荧光定量PCR检测肝病患者血清HBV-DNA的对比研究

荧光定量 PCR检测肝病患者血清 HBV-DNA的对比研究

严蓉

靖江市第二人民医院 214500

摘要：目的 比较不同类型肝病患者应用荧光定量PCR法检查血清HBV-DNA的临床结果。方法 选取2020年4月~2021年8月我院收治的276例肝病患者作为研究对象，其中慢性乙型肝炎213例、乙肝后肝硬化37例、原发性肝癌26例；应用荧光定量PCR检测各组的HBV-DNA，应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙肝病毒的血清免疫标志物HBeAg，比较检测结果。结果 肝硬化、原发性肝癌患者的PCR水平明显低于慢性乙型肝炎患者；HBeAg阳性组的HBV-DNA阳性率显著高于HBeAg阴性组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 荧光定量PCR检测肝病患者的血清HBV-DNA，能够直观反映出患者体内的病毒携带以及病毒复制情况，从而为临床评估病情提供依据，值得推广。

关键词：肝病；荧光定量PCR；血清HBV-DNA；临床价值

各种肝病的发生均与HBV感染密切相关，从无症状的HBeAg携带者，到重型肝炎患者，都可能发展成肝硬化与肝癌。HBV复制是启动乙型肝炎病变的基础，HBV-DNA则是评估HBV感染、HBV复制的重要指标^[1]，具有良好的特异性和敏感性。临床主要采用ELISA检测HBV感染，通过机体对HBV不同的免疫反应状态来检测乙肝病毒的血清免疫标志物，从而间接反映出HBV-DNA的复制情况。荧光定量PCR是HBV复制的定量检测手段，通过分子水平能够直接反映出患者体内HBV的复制情况。本文以2020年4月~2021年8月我院收治的276例肝病患者为例，应用荧光定量PCR检测了患者的HBV-DAN水平，现报道如下。

1.资料与方法

1.1资料

本研究中，慢性乙型肝炎213例，男性129例、女性84例；年龄29~73岁（36.82±1.71）岁；乙肝后肝硬化37例，男：女=26：11；年龄最低31岁、最大72岁，中位年龄（37.96±2.54）岁；原发性肝癌26例，男、女分别有19例、7例；年龄区间：32~74岁，平均（38.13±2.86）岁。三组患者的入组时间为2020年4月~2021年8月，自愿签署知情同意书，组间比较临床资料，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2方法

（1）HBeAg检测：检测仪器为安图PHOMO酶标仪，波长450mm；检测方法为ELISA；由北京万泰生物药业提供试剂盒。

（2）HBV-DNA检测：检测仪器为瑞士罗氏公司生产的Cobaz480荧光定量PCR自动检测仪；检测方法为荧光定量PCR；由上海复兴提供试剂盒。在单管封闭的条件下进行PCR的扩增，应用微机动态检测PCR扩增产物，并分析检测结果。结果判定标准^[2]：阴性：＜10³拷贝数/mL血清；少量或微量：＜10³拷贝数/mL血清；中量：10⁵~10⁷拷贝数/mL血清；大量：10⁷~10⁹拷贝数/mL血清。

1.3统计学方法

各组HBV-DNA拷贝数用（`x±s）表示；各组HBV-DNA含量与HBV-DNA阳性率比较用x²检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1各组患者ELISA与荧光定量PCR检测结果，见表1：

表1 各组患者ELISA与荧光定量PCR检测结果

注：与慢性乙型肝炎组比较，^#P＜0.05

2.2HBV-DNA阳性率比较，见表2：

表2 HBV-DNA阳性率比较

3讨论

目前为止，HBV损伤肝细胞的机制仍未完全清晰，研究普遍认为HBV可刺激机体免疫系统对感染的肝细胞进行攻击，从而间接的造成肝损伤^[3]。肝细胞感染HBV后，会产生病毒蛋白质，这些被感染的细胞就会受到细胞毒性T淋巴细胞的攻击。肝炎的慢性发展与HBV病毒的持续复制有关，最终发展成肝硬化与肝癌，而机体的免疫功能亢进则是导致重度肝炎的重要因素。

在HBV复制过程中，前区编码会产生一种分泌型核壳蛋白，即HBeAg，HBeAg（＋）表示HBV复制活跃、感染性强；HBeAg（－）则说明炎症或者病毒血症消失。本研究中，HBeAg阳性组的DNA阳性率显著高于阴性组（P＜0.05），可以看出HBeAg是否阳性，可作为评估HBV复制的参考指标。HBeAg（＋）说明机体内病毒复制较活跃。HBV-DNA是评估乙型肝炎病毒感染与病毒复制的可靠指标，检测HBV-DNA水平，在预测、诊断疾病和评估疗效等方面具有无可比拟的作用^[4]。本次研究结果显示：肝癌与肝硬化患者体内的HBV-DNA含量明显少于慢性乙型肝炎患者，说明肝损伤越严重，乙肝病毒的复制越轻，肝纤维化和占位性病变也会影响HBV-DNA的复制。

综上所述，乙肝患者的HBV-DNA拷贝情况和HBeAg是否阳性有直接关系，系统转换只能体现HBV复制水平下降，并不代表复制停止。荧光定量PCR检测可体现乙肝病毒的感染与复制情况，对于临床制定治疗方案具有重要的参考价值。

参考文献

[1] 慎强,董飞波,洪玲珍,等. HBV 基因变异对荧光定量 PCR 系统检测HBV-DNA 准确性的影响[J]. 中华医院感染学杂志,2017,27(3):521-524.

[2] 姜新华,高国生,胡爱荣. 国产PCR试剂和COBAS系统血清HBV-DNA检测结果不一致的原因分析[J]. 中国现代医生,2017,55(2):108-111.

[3] 陈鹏,孙玉良,邓星,等. 高灵敏度real-time PCR在低病毒载量病毒性肝病中的临床应用价值[J]. 中国医药导报,2020,17(19):151-155.

[4] 东冰,靳永胜,刘娜,等. 乙型肝炎患者FGFR4基因多态性、HBV的S基因MHR变异及交互作用与终末期肝病的关联性研究[J]. 湖南师范大学学报（医学版）,2021,18(5):123-127.