摘要目的探讨淫羊藿素调控miRNA-329（miR-329）、miRNA-1236（miR-1236）抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2，对照组仅加入二甲基亚砜（DMSO），培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度（IC50）及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白（AFP）处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后，CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒，将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒（NC）、相应的抑制剂的对照质粒（INC）分别共转染HepG2细胞，培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞，检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。结果2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为（80.4±2.3）%、（73.2±1.6）%、（51.7±3.3）%、（38.2±4.6）%、（29.5±4.3）%和（94.0±2.9）%，差异有统计学意义（F＝75.65，P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。淫羊藿素对HepG2细胞的IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01，差异有统计学意义（F＝42.67，P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h，细胞增殖率分别为（102±5）%、（138±13）%、（186±24）%、（260±12）%、（311±15）%、（348±25）%，差异有统计学意义（F＝27.483，P<0.01）；AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。与对照组比较，不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达（均P<0.01）。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均降低了约40%；miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平（均P<0.05）。结论淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达，促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合，抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性，抑制AFP表达，从而抑制肝癌细胞增殖。
