微生物检验一般有这几种方法

微生物检验一般有这几种方法

梁敏

隆昌市疾病预防控制中心 四川 隆昌 642150

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义。

常见的检测方法有：生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测等，本文主要介绍常用的检测方法的原理，应用范围和优缺点。

微生物生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以此为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。

1、生长量测定法：

体积测量法，又称测菌丝浓度法。原理：通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。

称干重法。原理：利用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。称干重方法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activity dry yeast，ADY），一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

比浊法。原理：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。

菌丝长度测量法。方法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度。

2. 微生物计数法：

血球计数板法。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

染色计数法。为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。

比例计数法。将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。

液体稀释法。对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（most probably number）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

平板菌落计数法。这是一种最常用的活菌计数法。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

试剂纸法。在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

膜过滤法。用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

3、生理指标法：微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。

测定含氮量。大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。

还原糖测定法。还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况，常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。

氨基氮的测定。方法是，离心发酵液，取上清液，加入甲基红和盐酸作指示剂，加入0.02N的NaOH调色至颜色刚刚褪去，加入底物18%的中性甲醛，反应数刻，加入0.02N的使之变色，根据NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。

4、商业化快速微生物检测法：微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。