强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中共刺激分子的表达研究

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中共刺激分子的表达研究

韩海 陈宗雄

福建中医药大学附属人民医院 福建省福州市 350102

【摘要】目的：研究强直性脊柱（AS）炎患者外周血单个核细胞中共刺激分子的表达意义。方法：选择38例AS患者作为病例组，38例体检正常的人群作为对照组，提取其外周血单个核细胞，再用PCR的方法检测CD86、CD28、CTLA-4、CD80 mRNA的表达。结果：病例组的共刺激分子CD86、CD28、CTLA-4、CD80 mRNA的水平较对照组高（P<0.05）。结论：AS患者在共刺激分子的CD86、CD28、CTLA-4、CD80的表达显著升高，和免疫系统紊乱关系密切。

【关键词】AS患者；共刺激分子；免疫系统

强直性脊柱炎（AS）是一种慢性炎症性的疾病，主要症状表现为臀部或腰背部疼痛，后仰、前倾、弯腰等动作受到限制等。如若不及时治疗，会出现关节强直和畸形，严重影响患者的生活质量。在临床研究中发现，AS患者的滑膜、关节以及骨组织有大量的单核-巨噬细胞、炎性T细胞，有Th1/Th2细胞因子和T细胞应答的平衡偏移。因此，本文对AS患者的外周血单个核细胞中共刺激分子做了研究，如下报道。

1. 资料和方法

1.1一般资料

随机选择我院2014年3月-2015年3月期间收治的38例AS患者作为病例组，年龄21-42岁，平均（31.5±6.18）岁，16例女性，22例男性；再选择我院体检38例正常人群作为对照组，年龄23-48岁，平均（35.5±7.14）岁，17例女性，21例男性。两组的年龄、性别等一般资料比较无差异（P>0.05）。

1.2仪器和试剂

1.2.1仪器

GRP-9160型隔水式恒温培养箱、eppendorf-cen-trifuge5430R低温高速离心机、eppendorf-centrifuge 5430台式高速离心机、Gene Amp PCR System9700扩增仪、light Cycler Real Time PCR扩增仪等。

1.2.2试剂

5XFirst-strand Buffer，dNTP Mixture(10mmol/L)，RNAisoRegent，0.1mol/LDTT，2.5xreal MasterMi，dNTP Mixture(10mmol/L)，mol/LDTT，Random Oc-tamers(200u/μL)，Rnase Free ddH2O，RNAsafe(20X)，M-MLV(ExScriptRtase)(200u/μL)，20xProbe Enhancer solution。

1.3方法

1.3.1提取全血RNA

提取5ml病例组和对照组的外周血，EDTA-Na2抗凝，在2h内将单个核细胞提取出来，用PBS将其洗涤一次，再将RNAisoRegent加入其中，提取里面的RNA，以1:50的比例进行稀释，再用紫外分光度计检测它在OD260nm，OD260nm的比值分别为1.8-2.0和1.9。在琼脂糖凝胶（1.5%）的平板上电泳，完整性较好。

1.3.2逆转录与设计合成

将mRNA作为模板逆转录，再将Taqman探针和引物进行设计合成。

1.3.3测定标本中的CD86、CD28、CTLA-4、CD80 mRNA

采用realMasterMix Probe试剂盒，将已经构建成形的内参基因ABL质粒标准品倍做稀释标准曲线。再得到各个标本的CD86、CD28、CTLA-4、CD80 mRNA以及ABLmRNA，再使用相对定量，把目的基因和内参基因（ABL）的数值进行分析。

1.4统计学分析

由SPSS22.0软件分析数据，采用t和X²检验计量与计数资料对比，以P<0.05表示有差异。

2结果

病例组的共刺激分子（CD86、CD28、CTLA-4、CD80 mRNA）表达较对照组高（P<0.05），见表1。

表1 两组的共刺激分子比较（x±s）

3讨论

AS属于脊柱关节病，其病因尚未明确，可能与环境、遗传、以及自身免疫系统紊乱等因素有关。免疫功能紊乱和免疫调节会直接影响AS患者的发病过程，AS患者的外周血淋巴细胞主要以Th1细胞为主，细胞的分化会随着炎症的活动向Th2细胞下降。AS发病可能与Th2细胞减少、Th1细胞增多有关。T细胞的CD86、CD28、CTLA-4以及CD80是共刺激分子最重要的部分。CTLA-4和CD28的结构相似，但是其调节功能具有正反性。CD80联合CD28，对Th1的细胞增殖具有促进作用，CD86联合CD28，对Th2的细胞增殖具有促进作用。在研究结果中发现，病例组的共刺激分子CD86、CD28以及CD80的表达较对照组高（P<0.05），这表明AS患者可能由于APC表面的CD86和CD80表达过度，为T细胞提供了很多配体，T细胞的受体受体CD82也表达过度，两者联合致使T细胞被过度激活。病例组的CTLA-4也较对照组高（P<0.05），这可能是由于APC表面的CD86的表达水平较高，CD86-CD82的作用占有优势，从而让T细胞激活。

综上所述，AS患者的共刺激分子异常表达，和免疫系统紊乱关系密切，对诊断和治疗AS具有参考价值。

参考文献：

[1]Lee Young Ho,Song Gwan Gyu. Diabetes mellitus in ankylosing spondylitis.[J]. Annals of the rheumatic diseases,2021,80(9):223-225.

[2]刘雷,洪学志,李啸天,姜玉欣,许佳,莫汉有.强直性脊柱炎合并骨密度异常患者危险因素分析[J/OL].重庆医学:1-7[2021-08-21].

[3]吴菲雅,苏晓.苏晓教授对强直性脊柱炎的诊疗经验[J].风湿病与关节炎,2021,10(07):35-37.

作者姓名：韩海 性别：男 单位：福建中医药大学附属人民医院

邮编：350102 籍贯:福建浦城 学历：硕士研究生 出生年月:1990年1月

研究方向：骨科脊椎方向 职称：医师

通讯作者：陈宗雄 性别：男 邮编：350102 籍贯:福建浦城

学历：博士 出生年月:1973年7月 职称：主任医师