一例猪链球菌在VITEK MS质谱技术中快速鉴定的病例

一例猪链球菌在 VITEK MS质谱技术中快速鉴定的病例

周慧琼 单云娟 秦莲

祥云县人民医院 672100

【关键词】猪链球菌Ⅱ型；血培养；VITEK MS质谱仪；快速

猪链球菌（S.suis）是链球菌属（Streptococcus）,隶属于细菌域，后壁菌门，芽孢杆菌纲，链球菌科^[6]。患者多因皮肤破损后接触过死猪及猪肉、病猪、猪内脏排泄物等造成感染。此菌感染为人畜共患病，可引发人脑膜炎和败血症。近年来猪链球菌

Ⅱ型在我国引起爆发流行，造成严重后果，应引起高度重视。近期我院从一患者血培养阳性样本中应用VITEK MS质谱仪技术快速检出一株猪链球菌，及时报告临床，了解流行病史针对用药，缩短患者住院周期，减少患者经济负担，同时切断感染源及感染途径避免流行爆发。现将病例报道如下：

1、病例摘要

患者，男，65岁，因 “咳嗽、咽痛、流涕3天，腹泻3次。”入院，主诉3天前无明显诱因出现咳嗽、咽痛，呈阵发性连声咳，无明显咳痰，伴畏寒、发热（具体体温不详），伴全身酸痛，今日凌晨03点左右患者出现腹泻3次，呈水样，量约300ml，无血便，伴呕吐4次，无呕血，病程中无胸闷、胸痛、气促、呼吸困难，无盗汗、乏力、消瘦、午后低热等症状。发病后未进行系统诊治，2019年12月14日为求系统诊治来我院就诊，我院行双肺CT检查后，以“脓毒血症”收住ICU。患者一般情况差，急性病容，神志清楚，查体配合，双肺呼吸音轻，可闻及散在湿性啰音，心率82次/分，各瓣膜区未闻及病理性杂音，腹软，无压痛及反跳痛，双下肢水肿，余查体无特殊。精神、睡眠、饮食欠佳，小便如常。体重无明显改变。 否认“高血压、糖尿病”等慢性疾病；20年前行阑尾手术（具体不详）否认外伤史；否认“肝炎、结核”等传染病史；否认药物、食物及其他过敏；否认输血史；预防接种史不详。入院后急查C：1.颅脑未见明显异常。2.双肺未见明显实质性病灶；心电图：窦性心律；频发室上性早搏；血常规：HGB170g/L，PLT65 10^9/L；PCT：19.63ng/L；同时采集血培养。2019-12-15 血常规：PLT 53 10^9/L , PCT:15.61 ng/mL。12月15日8时30分送检血培养双瓶（需氧瓶+厌氧瓶），12月15日15时50分仪器报警显示阳性（需氧瓶+厌氧瓶），涂片革兰染色提示革兰阳性球菌，呈链状排列，立即通知临床。16时50分质谱结果为猪链球菌，再次和临床医生沟通，询问病史，患者发病前曾宰杀病猪，医生已抗感染治疗。12月17日医生根据最终药敏结果调整用药方案为青霉素和左氧氟沙星联合抗感染，分别于12月18日和23日再次送检血培养各2套，培养结果阴性，PCT：1.82ng/mL。于12月27日康复出院。

2、细菌培养、鉴定

分别于使用抗生素之前，寒战发热时抽取肘静脉血8ml注入BD公司自动血培养仪（BACTEC^TM FX200）配套的标准成人需氧瓶及厌氧瓶送检。培养7.2h后需氧瓶及厌氧瓶同时报警显示阳性，取出阳性瓶观察呈均匀浑浊生长，查看曲线（阳性生长曲线）。直接涂片革兰染色镜检显示革兰阳性球菌，呈链状排列。将血培养接种血平板于37℃，5%CO2进行分离培养。并用无菌注射器抽取5ml培养液于EP管，4000r/min离心5min弃上清液加入200ml生理盐水混匀8000r/min离心5min得沉淀备用。使用一次性接种环刮取EP管上层少量细菌点样加入VITEK MS-CHCA基质液1.0ul，并取ATCC8739校准菌株作质控孔，至室温干燥后使用生物梅里埃公司VITEK MS质谱仪标准操作流程鉴定得猪链球菌，鉴定置信度为99.9%、置信水平为绿灯（绿灯表示鉴定结果高）。发现血培养报阳到鉴定出猪链球菌耗时约1h。菌株生长速度快，18-24h培养后血平板上呈灰白色、凸起、直径（1-2um）、单个或双个卵圆形菌落，菌落周围有溶血环。使用生物梅里埃公司微生物鉴定系统VITEK 2 campact进行菌种鉴定（GP卡），6h后鉴定完成显示猪链球菌，可信度99%。同时将菌种送往省疾病预防控制中心进行基因测序检测，结果为猪链球菌Ⅱ型。

3、药物敏感试验

用生物梅里埃公司ATB链球菌和肺炎链球菌药敏试验试剂盒（比浊法）检测本株猪链球菌体外抗菌活性，药敏试验执行标准为M100，结果显示对青霉素、万古霉素、莫西沙星、四环素、头孢噻肟、左氧氟沙星、利福平、氯霉素、泰利霉素、克林霉素、红霉素、喹努普汀/达福普汀均敏感。

4. 讨论

4.1基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）是近些年发展起来的一种新型的细菌鉴定技术^[2]。传统的微生物鉴定需要培养、纯化、再鉴定等，所需要时间长（24-48h）且鉴定范围窄，影响了病原微生物鉴定的速度和准确性。随着技术不断改进和数据库完善，MALDI-TOFMS已可在细菌不经过前处理的情况下直接检测细菌，因而被认为是鉴定细菌最有效的方法

^[1]。法国生物梅里埃公司的质谱系统VITEK MS是利用MALDI-TOFMS质谱技术来分析检测菌株蛋白组成成分，获得特征性的峰谱，与数据库中细菌图谱进行比较，能够吻合即可作出判断，从而快速鉴定细菌^[2]。与传统的生化及表型鉴定方法对比，VITEK MS具有操作简单、快速、自动化程度高、高通量的特点^[3]。本病例从发现血培养报阳到利用VITEK MS质谱仪鉴定出猪链球菌耗时仅1h，给临床诊断治疗争取时间。

4.2猪链球菌是国家二类动物疫源病，人感染猪链球菌病例早有报道，但具体致病机制尚未清楚，其荚膜多糖为其中重要致病因素^[5]。人感染猪链球菌感染死亡率达30%，目前无人之间传播证据，可导致视神经、耳神经损害，可出现视力下降，听力下降。人感染猪链球菌除直接接触、宰杀、加工、食用病死猪外，通过接触携菌猪的分泌物也会感染^[4]。此患者发病前有宰杀病猪史，流行病史明显，属于人感染猪链球菌典型病例，本院医护人员在患者收住院未使用抗生素之前及时留取血培养送检。报阳后利用VITEK MS质谱仪及时鉴定出细菌，提示临床针对用药，经培养后根据最终药敏结果调整用药，缩短患者住院时限。

参考文献

1. 吴茜，倪林仙，李扬芳，等.急性下呼吸道感染患儿病毒病原学分析[J]中国实用儿科杂志，2007,22（12）：938-939.

2. 蒋月婷，黎健成，易建云，陈定强.分离胶辅助VITEK-MS质谱仪快速鉴定血培养阳性菌的方法学研究[D]国际检验医学杂志，2016,15(008):1673-4130.

3. 张蓉芳.急性呼吸道感染患儿呼吸道病毒分子流行病学和临床特征研究[D].兰州:兰州大学，2011.

4. 王宏军，秦才珍，张翔，等.姜堰市首起人感染猪链球菌爆发疫情的流行病学调查及预防控制[J].现代预防医学，2009,36(22):4353-4354.

5. 张照亮，李玉艳，刘胜勇，郭伟艳.血培养检出猪链球菌II兴1例[J]内蒙古中医药，2013,30-0132-01

6. 陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].北京:人民卫生出版社，2011:194