牡丹江市食品药品检验检测中心,黑龙江 牡丹江 157011
摘要 综述了毛细管电泳法(CE)在药物分析中的应用,叙述了各种分离模式和检测方法,分析药物及其代谢产物等,与质谱联用具有广阔的应用前景。
关键词 毛细管电泳;电化学检测法;药物分析
毛细管电泳法(CE),又称“高效毛细管电泳HPCE”,是90年代发展最快的分离手段之一,是新型高效、快速的分离、分析方法,是以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,依据样品中各组分的不同迁移速度来实现分离的液相分离技术。在化学药品、抗生素、手性药物和中药、中药指纹图谱及生物技术产品等药物和制剂的分离、鉴定和分析中,显示了高效、快速的特点,益发受到重视。本文综述了毛细管电泳法在药物分析中的应用概况。
CE的特点
采用电化学检测器,最低检测限可达10-19mol
高灵敏度
每米理论塔板数为几十万,高者可达几百万甚至几千万
高 效
特 点
通常的分析时间不超过30min
高 速
只需nL(10-9L)级
样品用量少
只需少量(几毫升)流动相,在价格低廉的毛细管柱中进行
低消耗
无机物、有机物、生物、中性分子,生物大分子等
应用范围广
图1 CE的特点
实验流程和步骤
一般流程:预平衡、进样、分离、检测和数据处理
典型的实验步骤:
将运行缓冲液充满毛细管
移去进样端缓冲液池,用样品池代替
用电动或压力进样方式进样
将进样端缓冲溶液放回
毛细管两端操作电压进行电泳分离
分离样品迁移至检测窗检测,记录数据和处理
图2 实验步骤
3.毛细管电泳的分类(按分类模式)
依据为溶质在自由溶液中的淌度差异 可用于解离的或离子化合物、手性化合物及蛋白质、多肽等
毛细管区带电泳(CZE)
依据为溶质分子大小与电荷/质量比差异 用于蛋白质和核酸等生物大分子
电泳型毛细管凝胶电泳(CGE)
电泳型
分离依据为等电点差异 应用于蛋白质、多肽
毛细管等电聚焦电泳(CIEF)
(CIEF)
毛细管电泳的分类
电渗流驱动的色谱分离机制 应用范围同HPLC
色谱型毛细管电色谱(CEC)
色谱型
依据为溶质在胶束与水相间分配系数的差异 用于中性或强疏水性化合物、核酸、多环芳烃、结构相似的肽段
胶束电动毛细管色谱(MECC)
电泳/色谱型
电泳谱型微乳液电动毛细管色谱(MEECC)
电渗流驱动、电泳和色谱综合作用 可以同时分离水溶性、脂溶性、带电或不带电的物质
图2 毛细管电泳的分类(按分类模式)
4.CE的检测器
紫外可见光谱法(UV)检测器
最常用的方法,通用性好,特别是蛋白质的适应性强
可获得时间-波长-吸光值三维电泳图,多波长信号检测、峰纯度测定、峰的定性,未分离峰定量
二极管阵列检测器
CE的
检测器
荧光检测器(激光诱导荧光)
灵敏度最高,光强度大,单色性、相干性好,可检测单细胞,通用性差,适合DNA检测,样品衍生化
电导检测器(ECD)
无机离子和较小有机离子检测
具有氧化-还原性质的物质
电化学检测器(EC)
仪器复杂 可获得结构信息
质谱检测器
图4 CE的检测器
5.毛细管电泳在药物分析中的应用
5.1化学药品及其制剂分析
孙彤等[1]采用反向电压下场放大进样富集技术,建立4种磺胺类药物的毛细管区带电泳分析方法。确立了优化的实验条件,4种磺胺类药物在该方法条件下检出限可达10-9-10-10mol/L水平。李兴华等[2]建立了高效毛细管电泳-紫外检测法快速分离测定10-羟基喜树碱(10-Hydroxy camptothecin,10-HCPT)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine,6-MP)、5-氟尿嘧(5-Fluorouracil,5-Fu)三种抗肿瘤药物方法。考察了检测波长、分离电压、进样时间、缓冲液的pH值及离子强度对分离效果的影响。整个试验没有使用有机溶剂,方法用于尿样、血样样品的测定,结果满意,为临床对10-HCPT、6-MP、5-Fu 3种抗肿瘤药物的用药监测提供了更加简单快速的分析方法。
5.2抗生素药物分析
5.3手性药物分析
5.4生物样本的药物及代谢产物分析
5.5中草药分析
5.6中药指纹图谱研究
孙姗[12]通过毛细管电泳技术分析手段建立了白车轴草,苦瓜,苣荬菜,车前草等几种
药用植物的毛细管电泳指纹图谱,为其质量评价提供了新方法。方法简便、准确、重现性好。不同来源的同种药材在化学成分种类方面具有较好的一致性,但不同生态环境差异会影响含量。张政等[13]用未涂层弹性熔融石英毛细管柱(93 cm×0.75μm),有效柱长79 cm;二极管阵列检测器;50 mbar压力进样10s;运行电压-30 kV;柱温为20℃;运行时间60 min;考察不同检测波长、pH、缓冲溶液种类、浓度等对色谱峰的影响,并对10批样品做了相似度评价。建立了高效毛细管电泳指纹图谱法来检测全蝎酶解液中蛋白类成分(>10k Da)的分析方法。
6.结语
CE作为新型高效的分离技术,给现代药物分析提供了强有力的分离分析手段。近年来毛细管电泳在药物分析中的应用得到迅速的发展。CE的多种分离模式给样品分离提供了不同的选择机会,尤其是分离来源复杂的生物样品,更为有利。随着CE的发展和完善,将在中药分析、食品分析、环境监测等领域得到广泛应用。
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作者简介:杨明伟(1974.2),男,汉族,黑龙江牡丹江,牡丹江市食品药品检验检测中心,副主任药师,硕士,主要研究方向为药物分析与药品质量标准研究。
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