生活饮用水中大肠埃希菌与耐热大肠菌群检测多管发酵法的改进分析

生活饮用水中大肠埃希菌与耐热大肠菌群检测多管发酵法的改进分析

王艳雄

广西桂林全州县疾病预防控制中心 541500

【摘要】目的：探究在生活饮用水的大肠埃希菌和耐热大肠菌群检测中予以改进多管发酵法的应用价值。方法：研究样本选自本市居民生活饮用水为样本，总共抽取100份，所有样本均采用多管发酵常规方法（原法）和多管发酵改进方法（改进法），对比其检测效果。结果：从检测结果上看，其中原法检测中，其耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例；改进法检测中，耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例，不存在特异性差异（P>0.05）。从检测时间上看，其中原法检测时间为（48.12±1.32）h，改进法检测时间为（23.51±2.11）h，存在差异（P<0.05）。结论：在生活饮用水检测中采用改进多管发酵法和原法，对大肠埃希菌和耐热大肠菌均有着较好的检测价值，其中改进法所用的检测时间比较短，应用价值较高。

【关键词】生活饮用水；大肠埃希菌；耐热大肠菌群；改进多管发酵法

根据我国《生活饮用水标准》得知，在每100ml饮用水当中，不能出现大肠埃希菌和耐热大肠菌。而从大肠菌群的来源分析，其主要存在于动物粪便当中，同时也包含有其他环境下的菌群。对于此类菌群的检测而言，一般通过多管发酵、滤膜、酶底物等方式进行检测，对于上述检测方式而言，其中多管发酵法最为简便，采用的设备也比较少，一般通过实验室来完成，但是其具体的操作方式比较繁琐，所需要的培养时间也比较长。根据近年来的探索，对常规的多管发酵法进行了相应的改进，改进后的检测方法所用时间更短，检测效率更高。本研究特选取生活饮用水样本100份，分别予以多管发酵常规方法和改进方法进行检测，探究具体的应用价值。

1. 资料与方法

1.1一般资料

研究对象选自本院生活饮用水样本100份，研究时间为2019年6月到2020年6月，分别予以多管发酵常规方法和改进方法进行检测。

1.2方法

①多管发酵常规方法：进行初发酵试验，取饮用水样本10ml，与10ml的双料乳糖蛋白胨水培养液进行接种，取1ml的样本与10ml的单料乳糖蛋白胨培养液进行接种，取1ml的样本与9ml的生理盐水进行缓和，混匀后注入到10ml的单料乳糖蛋白胨培养液。将所有接种样本置入到36℃左右的培养箱当中，培养时间为（24±3）h左右，若培养管未出现产气产酸则视为大肠菌群阴性，如产酸产气则需要按照下列步骤进行。进行分离培养工作，将产酸产气的发酵罐样本接种在伊红美蓝琼脂平板，后置入36℃的培养箱当中进行培养，培养时间为（20±3）h左右，观察菌落的形态，取深紫黑色、淡紫红色中心菌落进行染色。完成证实试验，经过染色工作后，接种乳糖蛋白胨培养液，置入到36℃的培养箱中培养，培养时间为（24±3）h左右，如产酸产气则视为存在大肠菌群。

②改进法，取10ml的样本接种到10ml的双料乳糖蛋白胨培养液当中，取1ml的样本注入9ml的生理盐水当中，混匀后注入到10ml的单料乳糖蛋白胨培养液当中，接种管置入到44.5℃的培养箱当中，培养时间为（24±2）h，如果所有乳糖蛋白胨培养管均未出现产酸产气，则视为阴性。后接种到伊红美蓝琼脂平板中，置入44.5℃的培养箱中，培养时间为（20±2）h，在平板上存在典型菌落则视为耐热大肠菌群，平板上蓝色菌落则为大肠埃希菌。

1.3观察指标

①检出情况（分析在两种不同检测方式下，大肠埃希菌和耐热大肠菌的检出率。检出率=（检出例数/总例数）×100%）、②检测时间

1.4统计学处理

结果用SPSS22.0统计学软件对所得数据进行分析研究。计量资料采用 表示，行t检验；计数资料采用n（%）表示，以χ²检验，当P＜0.05时，差异有统计学意义。

2.1检出率

从检测结果上看，其中原法检测中，其耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例；改进法检测中，耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例，不存在特异性差异（P>0.05）。

表1：两种检测方法的检出情况对比分析 （n）

注：^#与改进法检测相比，P>0.05

2.2检测时间

从检测时间上看，其中原法检测时间为（48.12±1.32）h，改进法检测时间为（23.51±2.11）h，存在差异（P<0.05）。

3. 讨论

对于大肠菌群的检测而言，其中采用原法检测需要进行初发酵实验，在培养24h后再接种EC培养基完成鉴定。通过改进法则可以按照初发酵试验的方式来接种乳糖蛋白胨培养液，然后将其放置在44.5℃的培养箱当中，持续24h^[1]。对于阳性管而言，不需要再进行接种，而是直接转种到伊红美蓝琼脂平板当中，并将其置入到红美蓝琼脂平板当中，平板上存在典型菌落则为耐热大肠菌群，呈现蓝色菌落则视为大肠埃希菌^[2]。而改进后的检测方式，则不需要采用EC培养基和EC-MUG培养基，究其原因是因为这两种培养基中含有3号胆盐，属于一种生物性抗菌剂，通过破坏细胞膜的方式来诱导杀菌作用^[3]。通过提升培养温度的方式来将自然环境当中的大肠菌群、革兰阴性菌、大肠杆菌放在普通环境下生长^[4]。

本研究中，从检测结果上看，其中原法检测中，其耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例；改进法检测中，耐热大肠菌群检出38例，大肠埃希菌菌群检出28例，不存在特异性差异（P>0.05）。从检测时间上看，其中原法检测时间为（48.12±1.32）h，改进法检测时间为（23.51±2.11）h，存在差异（P<0.05）。

综上所述，在生活饮用水检测中采用改进多管发酵法和原法，对大肠埃希菌和耐热大肠菌均有着较好的检测价值，其中改进法所用的检测时间比较短，应用价值较高。

【参考文献】

[1]王建利,郑振兴,师欢,王建美.榆林市2015年-2018年农村生活饮用水水质监测结果分析与评价[J].中国卫生检验杂志,2020,30(14):1781-1784.

[2]沈托,焦莉萍,张系忠,刘玮,郭晶晶,杨云云,魏惠琴,杨欢欢.2014-2017年陕西省渭南市生活饮用水微生物污染状况监测与分析[J].预防医学情报杂志,2020,36(02):186-191.

[3]李明,解泽华.冰雪灾害期间集中供水水质应急监测结果分析与应对措施[J].中国卫生检验杂志,2020,30(01):120-122.

[4]赵靓,张琦.农村家庭常用饮水容器中饮用水微生物污染及影响因素[J].环境与健康杂志,2018,35(12):1065-1067.