注射用甲泼尼龙琥珀酸钠中碳酸氢钠残留分析

注射用甲泼尼龙琥珀酸钠中碳酸氢钠残留分析

黄凤华 * 吴俊文 许卉云 侯宁 李雯

天津金耀药业有限公司 天津 300457

摘要：利用气相色谱仪对注射用甲泼尼龙琥珀酸钠产品中碳酸氢钠残留进行检验，采用HP-PLOT Q PT，30m×0.53mm，40.00um的色谱柱，进样口温度170 ℃，TCD检测器温度260℃，载气为氦气，流速为40cm/s；

，分流比为20:1，顶空系统平衡温度为80℃，平衡时间20min，定量环体积1.0ml。通过专属性、定量限、精密度、中间精密度、线性和范围、回收率试验等，证明了检测方法能够有效地测定注射用甲泼尼龙琥珀酸钠产品的碳酸氢钠残留。

关键词：注射用甲泼尼龙琥珀酸钠、碳酸氢钠、气相色谱仪

引言：

为证明琥珀酸甲泼尼龙经碳酸氢钠可完全原位转换为甲泼尼龙琥珀酸钠，进行了相关的方法学验证，并与原研产品进行对比，证明注射用甲泼尼龙琥珀酸钠的碳酸氢钠残留与原研产品基本相同，琥珀酸甲泼尼龙达到原位盐转化终点。

对于代谢性酸中毒，静脉滴注，所需剂量按下式计算：补碱量（mmol）=(-2.3-实际测得的BE值)×0.25×体重（Kg）；正常人体的BE值范围为-3.0mmol/L～+3.0mmol/L，BE为负值时，体内碱储存不足，提示代谢性酸中毒；BE为正值时，体内碱剩余，提示代谢性碱中毒。对于代谢性酸中毒，当BE值=-2.3mmol/L时，不用补碱，当BE值=-3.0mmol时，所需补碱量为（3.0-2.3）×0.25×120=21.0（mmol），相当于补碳酸氢钠21.0×84.01=1764.21mg，除非体内丢失碳酸氢盐，一般先给计算剂量的1/3～1/2，4～8小时内滴注完毕，所以实际补碱量为1764.21mg×1/3=588.07mg。对于代谢性酸中毒（BE值=-3.0mmol/L）的患者来说，这个补碱量是恰当的，但对于BE值=+2.3mmol/L的患者（BE值正常偏碱）来说，这个补碱量就是使患者造成代谢性碱中毒的最低量。为安全起见，当我们计算注射用甲泼尼龙琥珀酸钠的最低残留量时，将使患者造成代谢性碱中毒的最低量“1764.21mg×1/3=588.07mg”修正为“1764.21mg×1/4=441.05mg”。

注射用甲泼尼龙琥珀酸钠临床应用最大剂量为12.6g/day。碳酸氢钠最大的残留量（%）= 441.05/1000/12.6×100% = 3.5%。注射用甲泼尼龙琥珀酸钠产品碳酸氢钠残留的标准定为不得过甲泼尼龙标示量的 1.0 %。

一、验证用仪器和材料：

1、设备：电子天平、Agilent气相色谱仪7890B

表 1 ：所用设备仪器

2、玻璃仪器：量筒、移液管、容量瓶、烧杯等。验证中所用计量器具均提前经计量部门校验合格后使用。

3、试剂试药、溶液均在有效期内使用。

表 2：试剂试药

4、验证用样品：40 mg/瓶（含乳糖）和125 mg/瓶（不含乳糖）各一批。

二、分析方法

1、色谱条件：

（1）色谱柱：HP-PLOT Q PT，30m×0.53mm，40.00um；

（2）进样口温度170 ℃；

（3）TCD检测器，温度260℃；

（4）程序升温：起始温度为40℃，维持5分钟，以每分钟50℃的速率升温至180℃，维持3分钟。

（5）载气：氦气

（6）流速：40cm/s；

（7）分流比：20:1

（8）顶空系统：平衡温度：80℃；平衡时间：20min；加热环：90℃；传输线：100℃，定量环体积1.0ml。

2、溶液的配制：

(1) 稀释剂的配制：取纯化水适量，煮沸，放冷。

(2) 氯化钙溶液的配制：取无水氯化钙约1.2g，精密称定，置100ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。

(3) 供试品溶液的配制：

规格40mg/支供试品溶液配制：取10支40mg/支样品，每支分别用适量稀释剂溶解，置10ml容量瓶中，每个小瓶分别用水洗涤干净，合并洗液，稀释至10.0ml；

规格125mg/支供试品溶液配制：取8支125mg/支样品，每支分别用适量稀释剂溶解，置25ml容量瓶中，每个小瓶分别用水洗涤干净，合并洗液，稀释至25ml；

精密量取上述溶液5.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水4.0ml，密封，作为供试品溶液。

(4) 对照品贮备溶液的配制：精密称定碳酸氢钠对照品约4.0g置于100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。

(5) 对照品溶液的配制：精密量取碳酸氢钠对照品贮备溶液10.0ml至200ml量瓶中，用水稀释至刻度；

　　精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

3、 测定法：

分别取供试品溶液及与对照品溶液顶空进样，对照品溶液峰面积的相对标准偏差应不得过5%，按外标法计算，含碳酸氢钠不得过甲泼尼龙标示量的1.0%。

碳 酸氢钠（%）＝

----供试品溶液图谱中二氧化碳峰的峰面积；

A _r----对照品溶液图谱中二氧化碳峰的峰面积；

C -----对照品溶液中碳酸氢钠的浓度（mg/ml）；

LC ----供试品溶液含甲泼尼龙的标示量（mg/ml）；

三、验证程序

批次选择：样品分为含乳糖和不含乳糖的配方，选择规格为40mg的样品为含乳糖的配方样品，规格为125mg的样品为不含乳糖的配方样品。

1、专属性

1.1干扰试验

1.1.1测定方法：分别进一针空白、氯化钙溶液、对照品溶液和供试品溶液，进行色谱图的比较。

1.1.2空白配制：取稀释剂10.0ml,置顶空瓶中，密封。

1.1.3氯化钙溶液配制：取氯化钙溶液10.0ml,置顶空瓶中，密封。

1.1.4供试品溶液配制：见供试品溶液的配制。

1.1.5对照品溶液配制：见对照品溶液的配制。

1.1.6结果

空白、氯化钙溶液、对照品溶液和供试品溶液没有干扰峰的存在，见附图。

附图1:空白的色谱图

附图2:氯化钙溶液的色谱图

附图3:碳酸氢钠对照品的色谱图

附图4:注射用甲泼尼龙琥珀酸钠碳酸氢钠残留的样品色谱图

2、定量限

以对照品溶液作为储备液，再逐步稀释成一定浓度的溶液。当杂质峰高与基线的信噪比（S/N）约为10：1 (8 至 12/1)时，且6次平行测得杂质峰面积的RSD≤10%，此时该杂质的浓度即为定量限。

通过试验，定量限确定为：0.01819%。定量限的试验数据如下表：

表 3：定量限试验结果

3、精密度

3.1重复性

3.1.1 测定方法：按照方法分别配制6份供试品溶液并分析。

3.1.2 对照品溶液配制：见对照品溶液的配制：

3.1.3 供试品溶液配制

规格40mg/支供试品溶液配制：取10支40mg/支样品，每支分别用适量稀释剂溶解，置10ml容量瓶中，每个小瓶分别用水洗涤干净，合并洗液，稀释至10.0ml；

规格125mg/支供试品溶液配制：取8支125mg/支样品，每支分别用适量稀释剂溶解，置25ml容量瓶中，每个小瓶分别用水洗涤干净，合并洗液，稀释至25ml；

精密取上述溶液5.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水4.0ml，密封，作为供试品溶液。

3.1.4色谱分析

仪器色谱条件：见分析方法项下1

样品分析：对6份供试品进行测定，每份测定一次。

3.1.5评价标准：

分析重复性中连续6次测定碳酸氢钠的相对标准偏差RSD%≤10.0%，符合条件，则重复性好。

3.1.6重复性测定结果

重复性结果如表4至表5所列。

3.2中间精密度：

3.2.1 测定方法：

由另一个分析人员，在不同时间对同一样品进行样品分析，计算结果的精密程度。

3.2.2溶液的配制：同重复性试验。

3.2.3色谱分析

仪器色谱条件：见分析方法项下1

样品分析：同重复性试验

3.2.4评价标准：

每一个分析人员分析结果的相对标准偏差RSD%≤10.0%。

3.2.5 中间精密度结果

中间精密度结果如表4至表5所列。

结论：表7和表8中的结果符合验收标准，方法精确。

表4： 40mg精密度和中间精密度试验数据

表5：125 mg精密度和中间精密度试验数据

4、 线性及范围

4.1测定方法：

精确配制一系列浓度（最少5个浓度）的碳酸氢钠（相对于限度标准的25%-150%），按色谱条件进行线性测定。用被测物质碳酸氢钠的浓度（mg/ml）与测得的二氧化碳峰响应值作图，通过线性回归方程，计算相关系数R。

4.2溶液的制备：

贮备溶液配制：同对照品贮备溶液的配制。

0.02%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液0.1ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

0.1%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液0.5ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

1.0%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液5.0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

1.6%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液8.0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

2.0%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液10.0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

2.4%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液12.0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

3.0%线性溶液：精密量取对照品贮备溶液15.0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，加入氯化钙溶液1.0ml与水8.0ml，密封，作为对照品溶液。

4.3色谱分析

色谱条件：见分析方法项下1

样品分析：

按0.02%、0.1%、1.0%、1.6%、2.0%、2.4%和3.0%顺序测定样品溶液，分别以二氧化碳的峰面积对碳酸氢钠的浓度进行线性回归，计算碳酸氢钠的线性方程和相关系数。

4.4评价标准：

该曲线的线性回归系数R不得小于0.99。

4.5线性测定结果：

线性数据及线性回归见以下表格数据及线性图：

表6：线性数据

附图5: 线性回归曲线：

5、回收率试验

5.1测定方法：

精确配制加入三种不同浓度的碳酸氢钠的供试品溶液（相对于限度标准的5%、50%、100%和150%），每种浓度各配制3份，按色谱条件进行测定，以确定该方法的准确度。

5.2溶液的制备

对照品贮备溶液配制：同对照品贮备溶液的配制。

5%回收率溶液：精密量取对照品贮备溶液0.25ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，精密加入供试品溶液5.0ml，加入氯化钙溶液1.0ml与水3.0ml，密封。

50%回收率溶液：精密量取对照品贮备溶液2.5ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，精密加入供试品溶液5.0ml，加入氯化钙溶液1.0ml与水3.0ml，密封。

100%回收率溶液：精密量取对照品贮备溶液5.0ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，精密加入供试品溶液5.0ml，加入氯化钙溶液1.0ml与水3.0ml，密封。

150%回收率溶液：精密量取对照品贮备溶液7.5ml置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，混匀。精密量取上述溶液1.0ml，置顶空瓶中，精密加入供试品溶液5.0ml，加入氯化钙溶液1.0ml与水3.0ml，密封。

5.3色谱分析

色谱条件：见分析方法1

样品分析：

按5%、50%、100%和150%顺序测定样品溶液，计算碳酸氢钠的回收率。

5.4评价标准：碳酸氢钠的回收率应为：80~120%

5.5回收率测定结果：

表7：40mg回收率

表8：125mg回收率

6、验证总结：

表9：验证报告汇总

四、结论

通过以上对注射用甲泼尼龙琥珀酸钠碳酸氢钠残留分析方法的验证，证明注射用甲泼尼龙琥珀酸钠碳酸氢钠残留分析方法是可行的和可靠的，能准确检测出注射用甲泼尼龙琥珀酸钠的碳酸氢钠残留量。

参考文献：

[1] 美国药典.The United States Pharmacopoeia

[2] 中国药典2015年版.

[3] 欧洲药典European Pharmacopoeia

[4] ICH指导原则

收稿日期：．

作者简介：黄凤华，（1973-）女，天津人，本科生；* 通信作者：黄凤华，高级工程师，@ ．