蜂蜜 +抑酸剂对 Hp细胞膜及对其鞭毛在胃粘膜定殖机制 的影响研究

蜂蜜 +抑酸剂对 Hp细胞膜及对其鞭毛在胃粘膜定殖机制 的影响研究

葛昕旭 袁铭鸿、郑瑞亮、张苏媛、彭英 段文彧 （ 通讯作者）

长沙医学院口腔医学院 湖南长沙 410219

项目基金：长沙医学院大学生创新性课题，长医教[2017]18号-036

【摘要】：目的 研究蜂蜜+抑酸剂对Hp细胞膜及对其鞭毛在胃粘膜定殖机制的影响 方法：利用空白对照法，冷冻法，烛缸法 ，细胞计数法，革兰染色法将8株口腔培养出纯Hp与8株胃粘膜培养出纯Hp分为八组同时在50%甘油血清肉汤中进行对比观察。结果 口腔标本8株实验株中第三组（比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液）在光学显微镜下检测到的Hp株最少且活性最低，其差异具有统计学意义(P<0.05)，临床胃镜活检标本中8株实验株中C组（比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液）在革兰染色显微镜下检测到的Hp株最少且Hp的鞭毛在胃粘膜细胞定植呈不稳定状态，加入干扰项组与未加入干扰项组水平差值具有统计学意义(P<0.05)。结论 被蜂蜜与抑酸剂混合溶液处理过的Hp粘附胃粘膜细胞的能力明显大于空白对照，从而可以论证出蜂蜜+抑酸剂可以使Hp在胃粘膜粘附能力降低。

【关键词】：Hp 口腔内 胃粘膜 空白对照

相关现国内外对幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori , Hp)本身以及对因Hp所导致的消化系统等疾病的诊断与治疗的研究已经开展得非常广泛了。Hp是消化性溃疡病重要的发病原因和复发因素之一^[1]，宿主感染Hp后通过多种机制导致胃黏膜损伤，包括Hp定殖、损害胃黏膜屏障、炎症与免疫反应、毒力基因造成的损害、感染后胃泌素和生长激素调节失衡所致的胃酸分泌异常等，涉及炎症、免疫、泌酸、氧化等多方而，有毒力因子、细胞因子、自由基毒力基因等多种Hp致病因子参与。本实验旨在通过蜂蜜+抑酸剂的中西联合疗法对Hp细胞膜及对其鞭毛在胃粘膜定殖机制所产生影响的相关性研究从而进一步探究其对慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的治疗效果。序贯疗法与四联疗法对Hp（＋）胃溃疡的Hp根治率相当，1年后Hp复发率无明显差异^[3]。 对象与方法

1.1研究对象：临床胃镜活检所获8株Hp标本、口腔标本所获8株Hp标本

1.2实验方法：①将20ml蜂蜜与20ml抑酸剂一同加入100ml的烧杯中，均匀混合，得蜂蜜和抑酸剂以1：1配比的混合试剂，待彻底融合，放入无菌箱，保存备用

②取口腔标本所获8株Hp标本通过Hp液体选择培养基培养12h，分离Hp，以烛缸法纯化培养标本同时将临床胃镜活检所获8株Hp标本放入-20℃冷冻箱内保存，将口腔所获8株纯Hp标本平均分为4组每组中加入适量50%甘油血清肉汤保证其正常生长。

③第一组中加入蜂蜜5ml，第二组中加入抑酸剂5ml，第三组中加入比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液5ml，第四组中加入50%甘油血清肉汤5ml，四组均在37℃恒温条件下培养，第1、6、12天后用革兰染色法染色，在光学显微镜下用细胞计数法数出残留在胃粘膜细胞上Hp的数量并纪录。且一并观察Hp的细胞膜损坏程度并记录。（本步实验均在胃酸溶液中进行）

④从-20℃冷冻箱内取先前胃镜活检所获8株Hp标本平均分为4组每组Hp在模拟胃酸中培养直至生长正常后同模拟胃酸一并分别植入胃黏膜上皮细胞内直至观察到8株胃镜活检所获Hp均正常，且定殖于胃粘膜细胞上，四组实验对象编号分别为ABCD组。

⑤A组加入5ml蜂蜜，B组加入5ml抑酸剂，C组加入比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液5ml，D组为空白对照。第1、6、12天用革兰染色法染色，在光学显微镜下用细胞计数法数出残留在胃粘膜细胞上Hp的数量并纪录。

⑥将③中细胞膜被蜂蜜与抑酸剂混合溶液所破坏的Hp与⑤中D组Hp在光学显微镜下观察两组Hp鞭毛在胃粘膜上皮的粘附能力并进行统计分析比较。

⑦将实验所得数据进行统计分析。

1.3统计分析 数据用spss21.0软件分析，多组计量资料的比较采用方差分析，检验水准取0.05

2结果

2.1不同组别残留在胃粘膜细胞上Hp的数量及Hp的细胞膜损坏程度比较

口腔标本8株实验株中第三组（比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液）在光学显微镜下检测到的Hp株最少且活性最低，两组差值有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1不同组别比较

组 别 Hp数（株） P

第一组 1.5±0.5

第二组 1.0±0.5

第三组 1.0±0.5 <0.05*

第四组 2.0±0.5

注：*表示实验组和对照组差异有统计学意义

通过测得临床胃镜活检标本中8株实验株中C组（比例为1:1的蜂蜜与抑酸剂混合溶液）在革兰染色显微镜下检测到的Hp株最少且Hp的鞭毛在胃粘膜细胞定植呈不稳定状态，其差值具有统计学意义(P<0.05)。具体见表2。

表2不同组别比较

组 别 Hp数（株） P

A组 1.0±0.5

B组 1.0±0.5

C组 0.5±0.5 <0.05*

D组 1.5±0.5

注：*表示实验组和对照组差异有统计学意义

3

讨论 本实验表明，蜂蜜+抑酸剂对Hp细胞膜有破坏作用及对其鞭毛在胃粘膜定殖稳定性有所影响，尿素酶、黏附素、超黏附因子、脂多糖、磷脂酶A等都可以导致胃黏膜屏障的损害，但它们的作用并不能解释为什么Hp感染者会出现不同的临床表现。近年来临床观察显示，在根除Hp感染的治疗中，中西药治疗具有着较为理想的效果^[2]。Hp菌株基因型的不同是导致感染后不同临床结果的重要因素。传统认为，在细胞凋亡的过程中，内源性通路由活化的线粒体介导，外源性通路由细胞表而死亡受体，如Fas、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体/受体1/2等通过其中的死亡结构域传递信号介导凋亡^[4]。

近期研究表明，Hp可通过TLR2介导的信号引起免疫耐受和抑制Thl免疫，以逃避宿主防御。通过相关文献可知蜂蜜具有相关的抗菌作用。成熟蜂蜜的理化性质就决定了蜂蜜是一种非常不 适合细菌生长和繁殖的物质。糖类是成熟蜂蜜的主要 成分，以果糖和葡萄糖为主，占蜂蜜总重量的约80％， 高浓度的糖类成分使得成熟蜂蜜有着极高的渗透压， 极度不利于微生物的生长与繁殖。此外，成熟的蜂蜜中 还含有以葡萄糖酸为主的多种有机酸，使得成熟蜂蜜 的pH值偏酸性(3．4至6．1)^IS]，能有效抑制细菌生长。 但是大量的研究都发现，成熟过程中的蜂蜜或大 比例稀释后的成熟蜂蜜，仍保留有一定程度的抑菌能 万方数据 力，这意味着除了高渗透压和低pH值这些理化因素 外，蜂蜜一定还有其他的抗菌手段。进一步研究发现，蜂蜜中的多种抗菌活性物质对蜂蜜的抗菌活性有着重 要的作用^[5]。

参考文献：

[1]寇继光,寇玥婷,袁岸龙,摆斌,赵运志.胃铋镁四联疗法治疗幽门螺杆菌相关性消化性溃疡的临床效果[J].中国医药导报. 2016(33)

[2] 李锋华,甘旗旗.半夏泻心汤加减对幽门螺旋杆菌感染的疗效观察[J].陕西中医.2016(08)

[3] 臧东方.序贯疗法与四联疗法治疗幽门螺杆菌阳性胃溃疡的临床观察[J]. 中国处方药. 2016(01)

[4]苏青，徐三平,幽门螺旋杆菌的研究进展[J].临床消化病杂志,2014,8(3)

[5]吴雨祺,郑宇斐,张言政,胡福良，蜂蜜中抗菌活性物质的研究进展[J].浙江大学动物科学学院，杭州310058

作者简介：葛昕旭，长沙医学院口腔医学院在校学生

通讯作者简介：段文彧 ，长沙医学院口腔医学院教师