胰岛素生物检定时间节点的控制

胰岛素生物检定时间节点的控制

王颖

江苏万邦生化医药集团有限责任公司 江苏省徐州市 221004

摘要：实验动物是个复杂的有机体，个体间存在差异，不像物理化学实验能够精细定量，实验过程中有很多关键要素需要控制。对于胰岛素生物活性检测和效价检测除了饲养环境因素的控制、动物质量的选择、样品的精确稀释、人员操作的准确规范外，实验的一些关键时间点也必须控制好。

关键词：胰岛素 生物检定 时间点控制  

Abstract: experimental animals are complex organisms, and there are differences between inpiduals. Unlike physical chemistry experiments, there are many key elements to be controlled. For insulin biological activity detection and titer test in addition to raising environmental factors control samples, the quality of animal selection, accurate dilute accurate specification, personnel, operation, experiment of some of the key point in time must also be good control.

Key words: insulin bioassay time point control  

实验动物中心通过大量的实验数据积累，改进了胰岛素生物活性检测和低精蛋白锌胰岛素注射液时间点的控制，举例说明如下：

胰岛素生物活性方法叙述：取本品适量，按照《中国药典》2015版第四部胰岛素生物测定法（通则1211），实验时每组动物数可减半，实验采用随机设计，胰岛素标准品（S）与供试品（T）引起小鼠血糖下降的作用，以测定供试品的生物活性。

实验前称取小鼠20只，随机分成4组，每组5只，各鼠间体重相差不超过3克。标准品、样品同样方法稀释， 按SL,SH,TL,TH顺序依次给药，40分钟后依次取血，离心，吸取上清液加酶试剂，30分钟后比色。按生物统计法（通则1413）计算效价。

按照此法进行实验时，有时会出现单组数据差别大，可信限率>25%的结果。分析其中原因为小鼠饱食后血糖值较高，注射胰岛素后自身产生数据不稳定现象。

通过摸索和大量的实验数据对比，在给药前小鼠禁食1小时后再注射，比色后得到的数值很稳定，可信限率每次都<25%。如果给药前不禁食直接用于实验，比色后得到的数值有时会出现不稳定的情况，可信限率经常>25%。 3批胰岛素生物活性检测时不禁食直接给药和禁食1小时后给药比色的值对比分别如图1、图2、图3所示：

图1：

图2： 不禁食1小时给药 禁食后1小时给药

图3：

结论：

1.从上述3个图表的结果分析，小鼠禁食后1小时的可信限率值远远低于不禁食直接给药，说明每组小鼠禁食1小时后检验得出的数据比不禁食直接给药检验得出的数据要稳定的多。

2.实验过程中眼眶采血后封口离心，经过实验证明，封口后立刻离心，容易使得红细胞破裂，造成溶血现象，不利于比色分析。如果封口后静置15分钟后再离心，就能有效避免溶血现象，血清澄清，利于比色分析。

3.通过实验得出：效价实验和生物活性实验对于可信限率的控制和不产生溶血现象的控制具有等同性。因此该操作方法同样适用于低精蛋白锌胰岛素注射液的效价检测。

4.综上所述，我们得出这样一个系统性的结论：

1）每次生物活性或效价实验之前将待实验小鼠禁食1小时后再进行实验操作

2）实验过程中眼眶采血后静置15分钟再进行离心

1.按此步骤操作排除了异常干扰，使得检验结果更加稳定、可信、可重复性强

2.我们已经将这种改进后的操作方法用于日常检验，取得了很好的效果，避免了动物体本身对实验结果可能造成的误差，使得该生物活性和效价检测因动物原因造成的复试率为0，极大程度上减少了动物的使用量，节约了检验成本。

参考文献：

[1]唐思梦 ， 杨泽民 ， 陈伟强  等等黄芪多糖保护胰岛β细胞改善大鼠2型糖尿病[J].第二军医大学学报 , 2017 , 38 (4) :482-487.

[2]范勇 ， 段忠鑫 ， 何俊杰 等等.强迫游泳损害小鼠空间记忆与海马区胰岛素样生长因子2水平的关系[J].兰州大学学报(医学版) , 2016 , 42 (6) :8-14.