两种血栓弹力图检测试剂比对结果分析

两种血栓弹力图检测试剂比对结果分析

秦雯 宋松涛 海帆 杨超

昆明市第一人民医院 650011

_{[摘要] 　目的}通过30组临床枸橼酸抗凝全血标本进行血栓弹力图检测，验证以下内容：_评价YZ5000型血栓弹力图仪及其配套活化凝血检测试剂_和Haemoscope Corporation生产的TEG5000型血栓弹力图仪及其配套的活化凝血检测试剂具有良好的相关性_{。结果30例血标本分别用两种厂家试剂进行试验，实验结果通过统计分析具有相关性。结论}陕西裕泽毅医疗科技有限公司生产的YZ5000型血栓弹力图仪及其配套活化凝血检测试剂和已经获得国家医疗器械注册证Haemoscope Corporation生产的TEG5000型血栓弹力图仪及其配套的活化凝血检测试剂具有良好的相关性_。

_{[关键词]TEG；}YZ5000型血栓弹力图仪_；TEG5000型血栓弹力图仪

1948年，Hartert最早描述血栓弹力图（Throm-belastography,TEG），当时用于检测单个血样的整体凝血功能^[1]。TEG的设备体积小，测量速度快，可在30min内检测出血小板功能和凝血状态。TEG主要由一次性盛血样的烧杯、自由悬针及其上的扭力丝组成。将0.36ml血样加入小烧杯中，小烧杯温度保持在37℃，并以4°45′角旋转，每转持续10s。在旋转过程中，纤维蛋白在烧杯壁与扭力丝之间发生多聚反应，凝血过程开始，凝血块逐渐形成。通过自由悬针和扭力丝将凝血过程中凝血块机械阻抗的变化记录到电脑上，并与时间相对应，绘制成图像，即为TEG^[2-3]。传统的实验室凝血检查主要针对凝血过程的某个孤立的部分，而TEG反应了全血的凝血及纤溶能力。所以，TEG可以更好地为临床服务^[3]。

_{资料与方法}

_标本要求 30例符合凝血检测要求的枸橼酸抗凝全血（建议BD Vacutainer 注册证号国食药监械（进）字2011第2412553号，吸入后3小时内使用），按照抗凝管刻度抽满2管，未离心、新鲜血样。

_{仪器与试剂}

_实验组：陕西裕泽毅医疗科技有限公司生产的YZ5000型血栓弹力图仪及其配套活化凝血检测试剂（以下简称国产试剂）

对照组：Haemoscope Corporation生产的TEG5000型血栓弹力图仪及其配套的活化凝血检测试剂（以下简称进口试剂）

其他耗材：

样品杯： 陕西裕泽毅医疗科技有限公司生产

0.2M氯化钙：陕西裕泽毅医疗科技有限公司实验室配制

试验设计 本次试验采用自身对照配对设计方法，即将符合要求的同一血样分别获得国产试剂检测结果与该血样的进口试剂检测结果，每个血样得到国产试剂的检测结果及该血样的进口试剂检测结果形成配对数据。本次临床试验目的是评价两种检测TEG的试剂是否具有相关性，故采用自身对照配对设计使得试验产品检测结果与该血样的真实数据形成直接对比的配对结果，通过两个结果的对比评价试验产品检测TEG的准确性。

1.仪器准备

TEG5000型血栓弹力图仪 美国Haemoscope Corporation生产 正常保养后

对应两通道简称为I1、I2

YZ5000型血栓弹力图仪 陕西医疗科技有限公司生产 正常保养后

对应两通道简称为D1、D2

2.试验操作步骤

2.1按照血栓弹力图操作要求，使TEG5000血栓弹力图仪与YZ5000型血栓弹力图仪4个通道基线值保持一致，进行化学质控操作并符合质控要求。

2.2按照血栓弹力图操作指南要求在I1、 I2、 D1、D2上装载样品杯，分别加入0.2M氯化钙20ul，待检。

2.3将一管送检未离心枸橼酸抗凝全血上下颠倒5次混匀后，用移液器吸取1ml加入到复温到室温的进口试剂中再上下颠倒5次静止两分钟备用。为高岭土激活血样。

2.4再同一管血中进行国产试剂操作，步骤同3）

2.5从进口试剂中分别取0.34ml高岭土激活血样，加入到I1、D1的样品杯中，控制杆移到Test位置，软件立即点击开始按钮开始检测。

2.6国产试剂加样至I2、D2通道步骤同5）

2.7当检测到MA值出现后停止检测。

2.8重复步骤3-7，到测试样本数达到要求为止。

2.9分别导出R，K，Angle，MA进行分析，保留原始图形。

3.注意事项

3.1操作人员应严格按照血栓弹力图仪操作手册进行操作

3.2献血者应无抗凝药物使用，不在输血或溶栓等对凝血产生影响治疗过程中。

3.3仪器每通道基线与弹力（同一标尺）调节应该均在正常范围内，化学质控结果在正常范围内且每通道结果CV在15%以内。

3.4多仪器通道间调试应符合第2条注意事项。

3.5活化凝血检测试剂应保证足够的复温时间（建议20分钟）

3.6枸橼酸抗凝管应为1：9抗凝浓度（推荐BD），抗凝管中至少应有2ml标本，实验前应检查抗凝管中血样是否均质，有无凝块，如已静置分层应颠倒混均；如有凝块，应废弃重抽标本。

3.7应尽量缩短两次1ml标本的吸取和注入时间，混匀和颠倒等操作应保持一致。

3.8加样时应将移液器吸头沿样品杯壁缓缓注入，不应产生气泡，加样后应迅速开始检测，两通道检测应保持相同节奏，尽量缩短两通道间检测开始时间。

3. 临床试验数据的统计分析方法

以I1为因变量，以I2、D1、D2为自变量对R、K、Angle、MA分别应用SPSS软件进行相关回归分析，计算斜率、截距和相关系数，并根据以上指标进行显著性分析。具体方法如下：

病人比对实验用相关系数r值计算：设对进口试剂测定结果为 ，国产试剂测定结果为 值。按公式 计算出r值。

判定r值的显著性采用统计学的p值，p值是将观察结果认为有效即具有总体代表性的犯错概率。根据费希尔的理论，当p值小于0.05时在统计上是显著的。0.05≥P>0.01被认为是具有统计学意义，而0.01≥P≥0.001被认为具有高度统计学意义。

设定进口试剂的测定结果为 ,国产试剂的测定结果为 值。回归方程的一般形式是Y=a+bx，其中x为自变量，一般为资料中能精确测定和控制的量，Y为应变量，指在x规定范围内随机变化的量。a为截距，是回归直线与纵轴的交点，b为斜率，意为x每改变一个单位时, Y的变化量。

回归方程的显著性检验

表1 方差分析表

　　检验：Y与解释变量x₁，x₂，…,x_k之间的线性关系是否显著。　

　　(1)　　H₀： b₁=b₂=……b_k=0

　　　　　H₁： b_i不全为0　（i=1，２，…,k）

(2)   　        　                    

　　　　　或　 　　

(3)查F分布表，得： 　　(4)若　 ,拒绝H0，回归方程显著

　　　 ,接受H0，回归方程不显著

4.关于临床试验样本量的说明

陕西裕泽毅医疗科技有限公司在产品活化凝血检测试剂盒(以下简称试剂盒)的临床对比方案中，我们选择的是等效试验。将入选的同一临床血样，分别用试剂盒和已经上市的试剂Haemoscope Corporation活化凝血检测试剂盒在已上市的Haemoscope Corporation公司生产的血栓弹力图仪器上进行检测，对结果进行相关性统计。

样本量确定的依据基于

在符合《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》的前提下，应符合定量样本计算的统计学要求。

对于上述的统计学要求，我们对实验组和对照组的结果进行相关回归分析，计算斜率、截距和相关系数，并根据以上指标进行显著性分析。具体方法如下：

病人比对实验用相关系数r值计算：设对照试杯测定结果为 ，Haemoscope Corporation公司生产的测定结果为 值。按公式 计算出r值。

判定r值的显著性采用统计学的p值，p值是将观察结果认为有效即具有总体代表性的犯错概率。根据费希尔的理论，当p值小于0.05时在统计上是显著的。0.05≥P>0.01被认为是具有统计学意义，而0.01≥P≥0.001被认为具有高度统计学意义。

在统计学上样本量确定多少有统计学意义，具体计算如下：

线性回归样本量计算公式：N=1+M+M*F²*(1/R²-1)

M:自变量的个数,本试验中M值为1

F：本试验中取α=0.05 F=1.96

R：相关系数，相关系数越大，样本量越小，当R大于0.8时，可认为高度相关。本试验中R均大于0.8，按R=0.8计算最小样本量。

N=1+1+1*1.96²*(1/0.8²-1)=4.2 取N=5

因此，在本试验中，样本数大于5即有统计学意义。

3 讨论和结论

本次研究，共计完成30例合格血样检测。

经统计学分析，国产试剂和进口试剂检测结果有高度统计学意义，试验样本数也符合统计学要求，因此，YZ5000型血栓弹力图仪及其配套活化凝血检测试剂_和Haemoscope Corporation生产的TEG5000型血栓弹力图仪及其配套的活化凝血检测试剂具有良好的相关性_。

试验产品未出现影响可用性能的评价结果，表明试验产品具有良好的临床可用性能。

参考文献

[1] Bischof D,Dalbert S,Zollinger A,et al. Thrombelastography in the surgical patient.Minerva Anestesiol，2010,76(2):131-137.

[2] Ganter MT，Hofer CK.Coagulation monitoring:current techniques and clinical use of viscoelastic point-of-care coagulation devices.Anesth Analg,2008,106(5):1366-1375.

[3] Reikvam H,Steien E,Hauge B,et al.Thronbelastography.Transfus Apher Sci,2009,40(2):119-123.