结核分枝杆菌耐药性在线性探针技术快速检测分析的临床研究与应用

结核分枝杆菌耐药性在线性探针技术快速检测分析的临床研究与应用

阿孜古 ·祖农

新疆喀什地区结核病防治所暨肺科医院 844000

摘要：目的：探究分析对结核分枝杆菌耐药性的线性探针技术快速检测临床应用；方法：对260株结核分枝杆菌菌株进行线性探针技术检测，金标准选择比例药敏试验法，对比探针技术检测与比例药敏试验结果的符合情况，以评价线性探针检测技术的准确性和临床应用效果；结果：采用线性探针检测，异烟肼的敏感性为96.9%，特异性为95.8%，阳性预测值为94.6%，阴性预测值为93.8%，采用比例法共检出耐多药92例，而采用线性检出耐多药90例，两者符合率为97.8%，敏感度为98.9%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为100%，比较两种检测方式差异无统计学意义（X²=0.000 P=1.012）；结论：采用线性探针技术检测利福平、异烟肼的耐药性与比例法的一致性较高，操作更加简单，敏感性、特异性高，可以推广应用；

关键词：耐药性检测；结核分枝杆菌；利福平；异烟肼

结核病是全球面临的最严重的公共卫生问题之一，近年来研究发现，结核病的耐药性正在不断增加。1992年，世界卫生组织（WHO）将结合病患者中耐异烟肼与利福平者定义成耐多药。对于耐多药的临床诊断，目前主要采用结核分枝杆菌药物敏感试验进行。本文以我院的260株耐药结核分枝杆菌为研究对象，分析了采用线性探针快速检测技术的临床应用效果。

资料与方法

1.1一般资料 选择我院疾控中心2014年3月至2017年5月对肺结核患者进行痰培养的260株菌株为研究对象，对该菌株鉴定，全部为结核分枝杆菌复合群，分别采用比例药敏试验法与线性探针技术检测菌株的异烟肼、利福平的耐药水平。

1.2试验方法 比例药敏试验法培养基由珠海贝壳生活技术有限公司生产，采用WHO推荐的方法，先用接种环在培养基上挂刮取部分菌落，然后采用磨菌管和麦氏管配制1mg/ml的菌悬液，再对其稀释10~2mg的菌悬液，使用标准接种环将其接种至含药的培养基斜面，37℃环境中连续培养4周，观察培养基上的菌落情况，计算其耐药率，当耐药率超过1%时，判定为耐药。

线性探针检测试验剂选择德国的Hai Lifscience公司生产，按照GenotypeMTBDRplus试剂盒进行操作：先使用接种环在固体培养基上采集新生长菌落，然后在300ul灭菌的去离子水中配制悬浊液，并在95℃恒温金属浴中灭活处理20min，随后进行15min超声裂解，5min高速离心，取上清液5uL，加入至PCR扩增体系中，按照如下步骤进行循环：95℃15min，循环1次，95℃30s，58℃2min循环10次，95℃25s，53℃40s,70℃40s，循环20次，70℃3min，循环1次，将扩增产物与探针纸进行杂交，观察反应变化，判断结果。

1.3统计学处理 本次探究所有数据均采用SPSS软件专业处理，计数资料采用百分比表示（%），数据比较行X²检验，P<0.05表示数据差异具有统计学意义。

结果

2.1异烟肼与利福平耐药性检测 分别采用比例药敏实验法与线性探针法检测260株结核分枝杆菌的异烟肼与利福平耐药性，检测结果如表1所示。比例法检测出全敏感者35例，耐异烟肼者69例，耐利福平者60例，耐多药者92例，采用线性探针技术共检出全敏感者35例，耐异烟肼者68例，耐利福平者58例，耐多药者90例。比较两种检测方式耐异烟肼与耐利福平检测效果，差异无统计学意义（X2=0.0385，P=0.8524）。

表1 两种检测方式耐药性结果比较

药物

异烟肼 167 64.2 166 63.8

利福平 155 59.6 157 60.3*

耐多药 92 35.3 90 34.6

注*P=0.8524，X2=0.0385

2.2敏感性与特异性比较 本次采用比例法共检出耐多药92例，采用线性检出耐多药90例，两者符合率为97.8%，敏感度为98.9%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为100%，比较两种检测方式差异无统计学意义（X²=0.000 P=1.012）

讨论

耐多药结核病的临床诊断更加复杂，治疗难度也更大，成本更高，因此是结核病治疗中的重难点。以往的临床诊断中主要是通过比例药敏试验法进行诊断，但由于该诊断方式耗时较长，及时性差，无法得到进一步应用。所以急需为临床提供一种操作更加简单、耗时更短，且检测结果准确的脑药性诊断方法，以在最短时间内完成阻止耐药菌的传播。线性探针技术便是在此背景下被发明的。该种检测方式通过提取核算DNA，并用生物素标记引物，最终通过检测rpoB基因突变获得利福平的耐药性，而检测KatG基因、inhA基因获得异烟肼的耐药性。

本次以我院疾控中心经痰培养的260株结核分枝杆菌为研究对象，通过分别采用比例试验法、线性探针技术检测得到两者的一致率较高，达到97.8%。两种检测方式的耐药性检出率差异无统计学意义（X2=0.0385，P=0.8524）。不过需要注意的一点是，受到不同操作人员操作水平、操作环境等因素的影响，对于不同菌株的耐药性检测可能存在差异。本次采用线性探针检测的敏感度为98.9%，特异性为100%，阳性预测值为100%，阴性预测值为100%。与其他研究报道报道基本一致。

综上，线性探针检测技术对结核分枝杆菌耐药性检测结果准确性高，操作更加简便，耗时短，成本低，可以在临床上推广应用。

参考文献

[1]王斌,邓建平,李群,张正东,宁柱,白锐,罗载全. 线性探针技术用于临床结核分枝杆菌耐药性的应用[J]. 预防医学情报杂志,2016,32(03):285-288.

[2]江渊,张阳奕,李静,武洁,王莉莉,郁晨蕾,桂晓虹,梅建,潘启超,沈鑫. 线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价[J]. 上海预防医学,2016,28(03):148-152.

[3]赵竟男,何旺瑞. 应用线性探针方法快速检测结核分枝杆菌耐药性的效果评价[J]. 中国卫生检验杂志,2016,26(08):1117-1118.

[4]马莲英,于维莉,谢祎,李雪,张丽霞. 线性探针耐药技术对两种方法培养的结核分枝杆菌药敏结果差异评价[J]. 中华医院感染学杂志,2016,26(10):2229-2231.