电针对帕金森大鼠中脑黑质SOD活力及MDA含量的影响

电针对帕金森大鼠中脑黑质SOD活力及MDA含量的影响

李霞1肖红玲2田凤芹3郭纪红4杨僧娥

DOI：10.7504/nk2016010203中图分类号：R587.1文献标识码：A

摘要：目的：观察电针百会、太冲、三阴交对鱼藤酮致帕金森（PD）大鼠的中脑黑质超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的影响，研究针刺治疗PD的作用机制。方法：78只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、西药组和电针组，采用颈、背部皮下注射鱼藤酮溶液0.8mg/kg·d制备PD大鼠模型，造模成功后，西药组给予美多巴混悬液灌胃，1.67mg/kg·d，电针组选百会、三阴交、太冲穴，用φ0.30mm×13mm毫针刺入，接韩氏电针仪，采用疏密波，频率疏波2Hz、密波80Hz，强度2.0mA，每次10mg/kg·d，电针正极接一侧三阴交，负极接同侧太冲，双侧相同；西药和电针组均7d/疗程，共治疗2个疗程，疗程间休息1d；除西药组外，其余各组均灌服等体积的生理盐水；除电针组外，其余各组也均采用同一体位固定10min。各组大鼠脱臼处死，取脑，测定中脑黑质SOD活力、MDA含量。结果：SOD活力比较：模型组低于正常组，P＜0.05，电针组高于模型组，P＜0.05，西药组与模型组相比，P＞0.05；电针组高于西药组P＜0.05。MDA含量比较：模型组高于正常组，P＜0.05，电针组低于模型组P＜0.05，西药组低于模型组P＜0.05，电针组与西药组相比，P＞0.05。结论：电针百会、太冲、三阴交具有改善PD大鼠行为学，提高其SOD活力，降低MDA含量的作用。

关键词：电针；帕金森；中脑黑质超氧化物歧化酶；丙二醛；大鼠

PD是常见的中老年神经系统变性疾病，临床以静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态异常为主要特征[1]。主要病理改变为中脑黑质DA能神经元逐渐变性死亡，纹状体DA含量下降。本病在我国65岁以上人群患病率为2.05%。随着人类平均寿命的延长和社会老龄化的到来，PD发病率呈明显上升趋势，成为影响人类身体健康和生活质量的重要疾病。

电针太冲、百会、三阴交系课题组经多年临床实践筛选出的治疗PD的效法,为探讨其作用机理，本研究采用颈、背部皮下注射鱼藤酮溶液制备PD大鼠模型，拟用补肾养肝填髓、熄风通络止颤法，观察电针百会、三阴交、太冲穴对实验性PD大鼠SOD活力和MDA含量的影响，探讨其抗脑组织氧化损伤的作用机制；

结果如下：

1材料和方法

1.1材料

1.1.1实验动物选用清洁级Wistar大鼠，雄性，体重200±20g，由河北医科大学动物实验中心提供。合格证号：201103042。动物喂养使用河北医科大学动物实验中心提供的大鼠基础饲料。在河北医科大学中医学院实验中心提供的清洁级动物实验房饲养，室温20～24℃，自然采光，通风良好。

1.1.2实验针具及药物华佗牌无菌不锈钢毫针，φ0.30mm×13mm；韩氏(HANS)电针仪，型号LH202H，北京华卫产业开发公司；多巴斯肼片(美多芭)，上海罗氏制药有限公司，批号H10930198，实验时采用生理盐水配制成所需浓度的混悬液。

1.1.3实验试剂和仪器鱼藤酮(RoteNone)，石家庄植物农药研究所，批号：SZYC20100113R，实验时采用二甲基亚砜配制成所需浓度的溶液；二甲基亚砜(DMSO)，天津市凯通化学试剂有限公司，批号：Q/HG3144-99；T-SOD活力、GSH、GSH-Px、MDA测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；HM-200型电子分析天平，日本AND；TDL-5-A型离心机，上海安亭；600型电热恒温水箱，天津；DW-40L262立式低温冷藏箱，青岛海尔医用低温科技有限公司。

1.2方法

1.2.178只Wistar大鼠均自然光照，自由饮水进食，正常饲养1周后，随机选取58只作为模型组大鼠，根据参考文献[2]造模，采用颈、背部皮下注射鱼藤酮溶液0.8mg/kg·d，(溶剂为二甲基亚砜，浓度为2mg/ml)28d制备PD大鼠模型；其余20只作为正常组注射等体积的溶剂。造模成功后将模型组大鼠随机分为模型组、西药组和电针组。

1.2.2治疗方法造模成功后，西药组大鼠每日给予美多巴混悬液灌胃1.67mg/kg·d(生理盐水配制的浓度为25mg/ml的美多巴混悬液)；电针组大鼠每日按顺序给予治疗，将大鼠固定在自制束鼠器上，参照全国针灸学会实验针灸研究会制定的《实验动物针灸穴位图谱》，选百会、三阴交、太冲穴，用φ0.30mm×13mm毫针刺入，接韩氏电针仪，采用疏密波，频率疏波2Hz、密波80Hz，强度2.0mA，10min/次·d，西药组和电针组均7d/疗程，共治疗2个疗程，疗程间休息1d；除西药组外，其余各组均灌服等体积的生理盐水；除电针组外，其余各组均采用同一体位固定10min/次·d。治疗均由同一操作者操作。

1.2.3取材与检测方法治疗结束后，将大鼠脱臼处死取脑，右脑取中脑黑质行黄嘌呤氧化酶法测定脑组织SOD活力，硫代巴比妥酸比色分析法测定MDA含量。

1.2.4统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行统计处理，实验数据均为计量资料，经正态性检验，用均数±标准差(±s)表示；经方差齐性检验，多组之间比较选择单因素方差分析，然后采用S-N-K检验进行两两比较，以上结果的显著性检验水准为0.05。

2结果

2.1治疗后各组大鼠一般状态观察

正常组大鼠皮毛光滑，活泼好动，饮食如常，体重增长。模型正常组大鼠毛色发黄，有呸毛现象；精神萎靡、自主活动减少、进食明显减少；动作迟缓、捕捉时反抗动作减少，部分大鼠有轻微口腔出血等现象，部分大鼠肌肉震颤、全身抖动、四肢僵直等类PD症状，随着干预天数增加，上述表现更加明显，个别大鼠出现惊厥、濒死状态。电针组和西药组大鼠毛色逐渐有所恢复，但较正常组稍差，饮食尚可，口腔出血现象消失，活动有所增多，肌肉震颤、全身抖动、四肢僵直等类PD症状均有减轻，较少出现惊厥、濒死状态。

2.2治疗前后各组大鼠体质量变化

治疗前比较4组大鼠体质量，模型组、西药组、电针组均小于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05)，但三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后正常组大鼠体质量逐渐增加，模型组大鼠逐渐下降，至治疗结束时，电针组和西药组大鼠体质量均增加，与模型组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)；电针组较西药组体质量增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。(见表1)。

表1治疗前后各组大鼠体质量的比较(±s)

注：与正常组比较△P＜0.05，与模型组比较▲P＜0.05，与西药组比较★P＜0.05。

3讨论

PD的病因病理尚不完全清楚，随着神经生物学、分子生物学和分子遗传学的发展，对PD的致病因素及发病机制研究取得了长足的进步，目前认为[3-5]PD是多种因素导致的涉及多个发病机制的疾病，是存在基因易感性基础上，在环境因素及年龄老化因素的共同作用下发生的。具体因素如氧化应激、神经系统老化、细胞凋亡、自身免疫等，环境毒素如汞、鱼藤酮、MPTP等。

1992年Cohen等提出PD致病的氧化应激学说，以后诸多研究表明，氧自由基在PD发病过程中起重要作用。马俊等认为氧化应激过度及自由基损伤是PD发生机制中的关键环节[6]。氧化应激指生物机体受环境因素或营养条件的制约时，抑制自由基产生的机制减弱或自由基生成量增加，引起组织器官的局部氧化应激反应过强，产生过量氧自由基，对蛋白质、DNA产生氧化损伤，导致细胞变性死亡。正常情况下机体存在自由基产生和清除的平衡，主要包括酶及非酶类抗氧化物，抗氧化酶如SOD、GSH-Px、过氧化氢酶(CAT)等，GSH-Px是机体内重要的催化过氧化氢分解的酶，它特异的催化GSH对过氧化氢的还原反应，GSH可与毒物分子及其代谢产物发生结合反应，降低其毒性，还可通对过氧化氢的还原反应来降低毒物过氧化的能力；此外，GSH在对抗氧自由基过氧化并抑制由此引发的细胞凋亡、坏死及自稳态改变等方面也发挥重要作用。SOD能催化超氧阴离子歧化成过氧化氢，否则可与一氧化氮作用生成活性更强的自由基过氧亚硝基，此自由基在酸性溶液中生成强氧化剂过氧亚硝酸，超氧阴离子还可以通过其他系列反应产生最活泼的氧自由基—羟自由基，因此SOD可通过歧化反应清除氧自由基，对氧化损害起保护作用。机体的非酶类抗氧化物能攻击生物膜中的PUFA，引发脂质过氧化作用，形成脂质过氧化物，如MDA、酮基、羟基、羰基以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用，因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中一部分有害者能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。因而测试MDA的量可反映肌体内脂质过氧化物的程度，间接的反映出细胞损伤的程度。MDA常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。有研究证实鱼藤酮染毒大鼠中脑黑质组织MDA含量增加,GSH含量降低,SOD和GSH-Px活力降低[7]。结果提示，氧化应激反应可能参与了鱼藤酮中脑黑质组织DA能神经元毒性作用。

本实验数据显示：鱼藤酮造模成功的PD大鼠，SOD活力降低，MDA含量升高，有可能说明PD大鼠机体清除氧自由基的能力低，细胞膜结构和功能的完整性受损，机体细胞受自由基攻击的程度重。而治疗后电针组、西药组均能提高SOD活力，降低MDA含量，说明机体清除氧自由基的能力提高，机体细胞受自由基攻击的程度减轻，对细胞膜结构和功能的完整性起到保护的作用。本实验证实认同了氧化应激学说在PD发病机制中的存在，针灸治疗可能是通过调节氧化应激途径对PD起治疗作用。

PD属中医“老年颤证”范畴，也称为“颤振”、“振掉”、“震颤”。我们认为本病的发生与肝肾不足，精血亏虚，督脉经气失衡密切相关。人之老迈，体质渐弱，肝肾易虚，精血易损，督脉失衡。是以精血不能上濡，以致髓海空虚，虚风内动，则震颤不已；精血不能濡养筋肉，则肢体僵硬，莫能任持；督脉失衡则动作迟缓，嗜睡乏力。正所谓肝肾亏则精血虚，精不濡则髓海空，虚风动而震掉摇，督脉虚则动作缓。本病以肝肾虚损为本，震颤动摇为标。故自拟补肾养肝填髓、熄风通络止颤的治疗大法，标本同治，临床选取百会、太冲、三阴交三穴，电针治疗PD取得较好疗效。百会穴位居头顶，隶属督脉，是肝经与督脉交会之所，有通督醒脑、熄风止颤之效；三阴交乃脾经要穴，肝、脾、肾三经交会于此，善于健脾补肾养肝，即可健脾化生气血，又可滋养肝肾之阴，还可疏通肝脾肾之经气，有滋养阴血，益精填髓、活血通络、熄风止颤之效；太冲是足厥阴肝经原穴，为肝脏原气留止之处、肝经与督脉会于头顶，肝脑相通，故可平肝熄风、醒脑通络而止颤。三穴合用即可通络熄风止颤，又可健脾补肾养肝、益精填髓，共凑标本同治之功。同时结合电针定量客观、受不同施术者影响小的特点，参考研究结果，2Hz和100Hz电针均可以有效地减轻PD模型大鼠的异常旋转行为[8]，本实验利用电针刺激替代徒手运针，选用具有促进局部气血循环，改善组织营养、消除炎症水肿作用的疏密波，频率2/80Hz，实验结果证明本治法选穴以及电针的使用行之有效的。

参考文献：

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