糖化血红蛋白的临床检测方法概述

糖化血红蛋白的临床检测方法概述

金小丽

天津中医药大学附属武清中医医院301700

摘要：探讨目前糖化血红蛋白检测方法，本文简单介绍了离子层析法、亲和层析、电泳法、离子捕获法以及免疫凝集法在检测糖化血红蛋白中的应用，以分析针对糖尿病患者糖化血红蛋白的最佳检测方法，以提高患者生活质量。以下就概述糖化血红蛋白的临床检测方法，综述如下。

关键词：糖化血红蛋白；血红蛋白类；临床检测

近年来，随着生活水平和方式的改变，糖尿病（diabetesmellitus，DM）的发病率呈现持续上升趋势，已成为第三大死亡原因（仅次于心血管疾病和癌症）。目前我国的DM发病率高达9.7%。临床上对DM诊疗和监测常采用空腹、餐后血糖或葡萄糖耐量试验等，但其只能反映采血时的瞬间血糖水平，且易受到各种因素影响而致使检测结果只能作为参考。在糖化血红蛋白测定的众多方法中，其中的离子交换层析法，不仅具有精密度高、操作简单、重复性好的优点，同时也是开展临床糖化血红蛋白检测的最优方法。以下就介绍糖化血红蛋白的临床检测方法。

１糖化血红蛋白介绍

糖化血红蛋白在人体内，包含HbA1a、HbA1b、HbA1c三种糖成分，糖化血红蛋白浓度相对稳定，临床测定糖化血红蛋白，可以有效反映人体血液中的血糖水平，可以检测糖尿病患者血糖，是诊断糖尿病的标准之一。

２糖化血红蛋白检测方法

糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷以及胰岛素作用障碍而形成的高血糖代谢性疾病，不仅威胁人类健康，也将影响患者的生活质量[1]，加大对糖尿病的诊断监测显得非常重要。通过检测糖化血红蛋白，以判断是否患上糖尿病具有可行性，

2.1糖化血红蛋白检测中的阳离子交换层析法：离子交换HPLC法是目前分析检测HbA1c的“金标准”，该方法依据的原理是在pH7.0的条件下，由于HbAlc末端缬氨酸糖基化后几乎不带正电荷，非糖基化的HbA带正电荷，因此可通过弱酸性阳离子离子交换层析将其与其他组分（HbAlb、HbAla、HbF、HbA0）区分开。根据该原理，现在已经开发了专门的仪器对糖化血红蛋白进行检测和分析，可对全血中的HbA1c进行直接测定，其检测结果不受变异型血红蛋白及衍生物的影响，有较好的检测精密度，每个标本的检测速度很快，适合大批量标本同时测定。使用ＨＰＬＣ方法检测标本中糖化血红蛋白含量，精确度好、重复性好，是有效的测定方法之一[2-5]。

2.2亲和层析法的应用：硼酸能够可逆结合含有顺位二醇基的化合物的特性，血红蛋白发生糖化反应后，由于结合的葡萄糖含有顺位二醇基，因此硼酸可以与糖化血红蛋白结合，未糖化的血红蛋白则不能与硼酸结合而被洗脱流出柱子。在临床中也可以利用硼酸衍生物以及Hb分子，在层析柱上实施共价键、硼酸结合，利用亲和层析法测定糖化血红蛋白，可以客观反映糖化血红蛋白含量，测定快速、价格经济，但其缺点就是只能测定Ｈb总量，并不能检测出血红蛋白ＧＨb含量。

2.3采用免疫法

2.3.1离子捕获法：在免疫法中，可以根据ＧＨｂ同相应抗体结合后，可以形成反应复合物，并且再联结带负电荷阴离子复合物[6]，经过清洗后，可以来测定其荧光强度，从而得到糖化血红蛋白浓度，该方法灵敏度以及特异性较高，自动化程度高。

2.3.2胶乳凝集法：在临床糖化血红蛋白检测中，根据抗原抗体反应原理，检测ＧＨb缬氨酸β-Ｎ-末端，将其抗原表位作抗体识别位点，从而可以制备出单克隆抗体于多克隆抗体，之后可以应用放射免疫分析以及免疫酶学分析，测定糖化血红蛋白。该糖化血红蛋白检测方法，不会受异常Ｈｂ干扰，其特异性好，操作简便。

2.3.3免疫比浊法：可以在样本中加入特制抗体缓冲液，从而可以使HbA1c与抗HbA1c抗体相结合，确保形成可溶性抗原抗体复合物，并加多聚半抗原缓冲液，形成不溶性复合物，例用比浊法测定其含量，计算求得HbA1c的百分含量，该方法的抗交叉污染力差，结果不稳定。

2.4白检测中的应用电泳法：糖化血红蛋白检测之中也可以应用电泳法，根据蛋白质的等电点不同，则其在外界缓冲溶液中的带电荷也是不同的，因此可以根据琼脂糖凝胶在电泳中的泳动速度，分离出Hb，从而可以形成不同条带[7-9]。该检测方法操作简便，但是由于电泳速度慢，影响因素多，导致该糖化血红蛋白检测的重复性不太好。

2.5糖化血红蛋白检测酶法：对于糖化血红蛋白检测中，也可以应用酶法，其原理就是依据特殊蛋白酶分解Hb，从而导致果糖基氨基酸在Hb中分离，该检测方法精密度好，检测样本量大，且应用全自动生化分析仪操作简单。该糖化血红蛋白检测方法也有极大的突破，如在特异蛋白内切酶特异酶解血液中，由于Hb会产生果糖基氨基酸，那么血浆中的清蛋白以及球蛋白等就不会对检测结果不能产生干扰；并且由于果糖基氨基酸氧化酶在特定蛋白酶体系中才会与果糖氨基酸发生反应，所以提高该糖化血红蛋白检测方法的精密度。

2.6免疫传感器法

该方法原理是将免疫检测与场效应管传感器相结合，首先将抗体固定电极表面，电极放入到处理过的血清中，表面固定的抗体特异性结合血清中的糖化血红蛋白或血红蛋白，形成抗体一抗原复合物，导致电极表面界面势改变，进而引起场效应管阈值电压的变化，待测糖化血红蛋白或者血红蛋白的浓度与传感器输出信号成一定比例关系，进而实现检测。该传感器优点是体积小、响应快、操作简便、灵敏度高，我国学者边超、曲凤[10]等验证了该免疫微传感器用于糖化血红蛋白检测的可行性，具有广泛的应用前景。

2.6床边检测

目前在国内可用于POCT的是金标定量法，包括两种方法。第一种方法是根据硼酸和HbA1c亲和性结合的原理，即HbA1c与硼酸特异性结合后呈现蓝色，而那些没有进行糖化反应的血红蛋白不能结合而呈现红色，根据两种复合物光强度的不同即可对HbAlc进行定量。第二种方法是根据免疫反应原理，利用荧光分析仪对含有HbAlc的荧光染料分子的斑点进行检测，最后换算成HbAlc的百分含量。该方法可用于床边检验（P0CT），具有便携、速度快的优点，但是精密度和准确度相对其他方法要差。

3小结和展望

综合上述各种检测方法，从精确度上考虑，HPLC是最理想的方法，但该方法试验条件要求高，仪器十分昂贵，基层医院尚不能推广。目前我国多采用的手工微柱法，但是受到的干扰因素影响比较大，误差也较大，该方法并不理想。因此，发展一种完善而便于操作的糖化血红蛋白检测方法，还需要较长的时间去研究[11]。2010年NGSP评价报道[12]，在总共8款P0CT产品中，只有2款产品通过了评价。因此，研究和开发适用于床边检测的方法和产品也同样重要。

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[3]欧阳清；石青峰；刘健；杨峻；糖尿病患者空腹血糖、血清果糖胺、糖化血红蛋白测定的研究[J]；华夏医学，2011，06（34）：45－46

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[5]李冬梅；李倩；张颖；王英；马建华；２型糖尿病患者并发院外获得性败血症24例的临床分析[J]；医学研究生学报，2011，05（12）：3564－3566

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[7]陈斌，黄庆，府伟灵；离子交换层析微柱法及亲和电泳法与液相色谱分析法对糖化血红蛋白含量测定的比较[J]；第三军医大学学报，2012，25（10）：16－17

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[9]潘志雄；刘晓峰；刘丹；阳离子交换层析法和胶乳凝集抑制法测定糖化血红蛋白的比对研究[J]；实验与检验医学，2012，27（10）：45－48

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