绿茶粗提物中的EGCG分离纯化

绿茶粗提物中的EGCG分离纯化

庞玉娜

庞玉娜（广西博白县人民医院药剂科广西博白537600）

【中图分类号】R965【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2012）9-0272-02

【摘要】目的分离纯化绿茶粗提物中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。方法绿茶粗提物(含EGCG60%,),用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，等量（500ml）收集流分，用旋转蒸发仪浓缩，薄层层析分析流分，合并相同流分重复快速干柱层析。用高效液相测定EGCG的纯度。结果用硅胶快速干柱法快速重复层析两次就可得到纯度80%以上的EGCG。结论用快速干柱法分离速度快，而且上样量大。用石油醚-乙酸乙酯洗脱剂毒性低，具有工艺简单、操作方便、成本低的特点。

【关键词】EGCG分离快速干柱法薄层层析

1EGCG的分离纯化

1.1快速柱层析分离

工艺流程:取50g茶叶粗提物加适量95%乙醇,加入50g硅胶H,混匀,调成糊状,60℃水浴蒸干,并充分研磨成细粉。取400g硅胶H经105℃、30min活化，装入清洁、干燥的玻璃层析柱,压实，以石油醚洗脱至硅胶层稳定,将样品装入层析柱,并盖一张滤纸。依次用石油醚，含乙酸乙酯10%、30%、50%、80%的石油醚进行梯度洗脱,旋转蒸发仪浓缩流分，薄层层析法检测流分,用标准品进行对照。再含EGCG的流分合并。用同样的程序进行另外4根柱，共分离样品250g。再把5根柱含EGCG的流分合并，重复层析两次，最后得到粉末状、微褐色的固体EGCG100g。

1.2成分鉴定及纯度测定

薄层层析法：分别取EGCG标准品和上述分离得到的EGCG固体粉末少量，用95%乙醇溶解，进行薄层层析,展开剂为（乙酸乙酯：甲醇=8：1），显色剂为1%FeCl3甲醇溶液。

高效液相（HPLC）对EGCG样品进行鉴定和纯度测定:

色谱柱：芬兰产C18柱（Φ5um,4.6×150mm）流动相：0.5%三乙胺和1%醋酸的水溶液-乙氰（82：18）

流速：1.0ml/min,

检测波长:280nm,

柱温：35℃

溶剂：甲醇

2结果

2.1薄层层析结果

2.2高效液相结果

EGCG标准品谱图

EGCG样品谱图

溶剂甲醇的高效液相谱图

从高效液相得到EGCG的纯度为80%，这样的纯度已经可以作为结构修饰的先导化合物。

3结论

茶叶的资源非常丰富,茶叶中重要组分儿茶素是优良的生物催化剂,其还能逆转肝癌多药耐药性，生产儿茶素或表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG)具有良好的前景。用硅胶快速干柱法从绿茶粗提物中进一步分离纯化得到EGCG,所用试剂在普通实验室条件下均能获得,而且操作简单,其得率也很高，实为一种较为理想的分离方法。

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