免疫组化染色在细胞学标本石蜡切片中的应用

免疫组化染色在细胞学标本石蜡切片中的应用

李剑颖苏良宝易秋婷

福建省泉州市安溪县医院362400

在临床各种诊断方法中，细胞学检查具有简便、安全、准确、经济等特点，已在病理学检查中广泛应用。除了抽取浆膜腔积液进行细胞学检查之外，随着细针穿刺吸取标本采集技术的发展，如何提高肿瘤细胞的检出率是一个值得探讨的问题，我们尝试将细胞学标本制成细胞块，用于进一步观察分析其组织结构，并进行免疫组化标记，旨在更客观地鉴别细胞的良恶性，判析瘤细胞的组织来源！

1、材料和方法

1.1标本的采取，送检的标本要求新鲜，临床上采取后应立即送检。

1.2方法

1.2.1送检的浆膜腔积液如肉眼可见较多纤维蛋白凝集物，按规范[1]离心涂片2张并取适量凝集物常规石蜡包理切片。

1.2.2送检的浆膜腔积液如肉眼未见凝集物，先静置30分钟，让瘤细胞自然沉淀弃去上清液，余50ml左右以每分钟2500转离心5-10分钟，取沉渣用滤纸包裹，10%福尔马林固定后常规石蜡切片。

1.2.3痰液用N-乙酰半胱氨酸液化后沉淀30分钟，2500rmp离心5-10分钟，取沉渣用滤纸包裹，10%福尔马林固定后常规石蜡切片。

1.2.4细针穿刺吸取的标本，先借助空气压力将针管内的穿刺标本喷至载玻片上，用穿刺针将标本聚成一小团，吸除多余的血液，将标本放置2-5分钟后，连同载玻片浸入95%乙醇中2-3分钟，使其表面凝固，然后立即浸入中性福尔马林中固定2小时，再用手术刀水平从载玻片上切取细胞块进行脱水，常规石蜡包理切片。

1.2.5细胞块切片行HE和免疫组化染色（依临床情况选用不同的抗体），镜下观察，结合临床，做出综合分析。

2、结果

2.1细胞块的常规石蜡切片，在某种程度上具有组织切片的特点，细胞集中，克服了涂片中细胞重叠堆积，厚薄不均的现象，图像背景中血细胞和炎性细胞更少，组织像清晰便于观察，较易识别具有特征性的异型细胞。

2.2综合HE染色的细胞学涂片，细胞块切片及临床资料，不同病例选用不用抗体进行免疫组化染色，染色结果定位准确，颗粒清晰，弥补了细胞学涂片不能进行多次免疫组化染色等检测的不足，为细胞学的诊断和鉴别诊断提供了丰富的信息。

2.3细胞块制备方法简便省时，经济快捷，可最大程度保留有效肿瘤成分，永久保存，多次切片应用多种抗体进行检测。

3、讨论

在肿瘤转移，炎性刺激或循环障碍等病理情况下，浆膜腔可形成大量液体[2]，通过对浆膜腔积液细胞学检查，可鉴别积液的良恶性，识别病变组织类型和探讨肿瘤的原发灶，而针吸细胞学是一种简便，易行又可以在一定程度上达到病理学诊断的方法，因此，进一步发掘延伸细胞学诊断技术领域，是行之有效的技能。

以往临床上浆膜腔积液细胞学涂片的诊断结果，常难对疾病作出客观评估。作者在工作中也遇到类似的情况，患者已明确癌症存在，但多次积液细胞学检查，均未找到癌细胞。因此，在工作中，要求标本采取后要尽快送检，观察积液性状后严格按照规范[1]制备涂片和细胞块包理切片。关于浆膜腔积液中各种细胞涂片的形态以往描述较多[1-2]，涂片利于观察细胞或细胞团的整体轮廓，细胞块切片可显示细胞团的内部结构，而免疫组化染色有助于鉴别细胞的组织来源，三者结合可提高浆膜腔积液检查的确诊率，起到取长补短的作用。

针吸细胞学与组织病理学检查比较，最大的不同是标本量少，标本中组织学结构和细胞间质大部分缺失，对肿瘤分型不够准确，造成了针吸细胞学最大的局限性，而把穿刺标本制备成细胞块可集合有限的细胞和组织碎片，并结合免疫组化染色，可大大提高针吸细胞学的诊断价值，目前细胞块技术有如下几种：离心法、琼脂法、血凝凝血酶凝集法、鸡蛋法、凝集法、但这些方法均存在步骤多、耗时、不易操作，甚至有标本量丢失等问题[3]，我们的方法步骤简单，，细胞成分丢失少，无需额外的辅助试剂，减少了细胞和组织变形的程度。

细胞涂片直接进行免疫组化染色具有一定的优点，如无需抗原修复、省时等，但由于涂片中细胞分散、量少及涂片数量的限制，存在试剂浪费，不能进行多种抗体标记以及无法正确判读染色结果等问题，而细胞块可最大程度保留有效肿瘤成分，且可永久保存，随时调用，多次切片，应用多种抗体进行免疫组化染色，甚至分子方向的检测，弥补了细胞涂片的不足，提供了更为丰富的病理诊断和鉴别诊断的信息。

总之，我们将细胞块技术和免疫组化染色相结合，既保存了良好的细胞形态学特征，又进一步发掘组织学结构特征，同时便于进行免疫组化染色，从而提供丰富的鉴别诊断信息，方法简单，操作方便，易于在各级医院推广使用。

参考文献：

[1]中华医学会.临床技术操作规范病理学分册.第1版.北京：人民军医出版社，2004，43

[2]王永才.当代针吸脱落细胞诊断学多媒体图谱.第1版.天津：天津科学技术出版社，2004，76

[3]舒仪经，阚秀.细针吸取细胞学.北京：科学出版社，2000