止喘贴对哮喘大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ的影响

止喘贴对哮喘大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ的影响

盛刚1郭珍2王颖1

盛刚1郭珍2王颖1

（1陕西省中医医院针灸科陕西西安710000）

(2陕西中医学院第一附属医院针灸脑病科陕西咸阳712083）

【中图分类号】R562.2+5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）22-0157-02

支气管哮喘(BronchialAsthma，简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病，是由多种炎性细胞及其合成和释放的炎性介质、细胞因子参与的炎症过程[1]。临床表现为反复发作性的喘息、呼吸困难、胸闷或咳嗽等症状，常常出现广泛多变的可逆性气流受限。实验研究证明，止喘贴对卵蛋白致敏哮喘大鼠肺泡灌洗液有较好的改善作用。现报道如下：

1材料与方法

1.1材料

选用清洁级SD大鼠，雄性，月龄6-9个月，体重160±20克，共40只。实验前在实验室内喂养观察三天，随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松治疗组、止喘贴治疗组每笼各10只，分笼饲养，自由进食进水，饲料为标准颗粒合成大鼠饲料(由西安交大实验动物中心提供,动物质量合格证书号：医动字第08-005号)。实验室通风、采光条件良好，室温20℃左右。

实验用药：止喘贴：由麻黄、桂枝、干姜、半夏、细辛、五味子、白芍、炙甘草、生黄芪、葶苈子、杏仁、淫羊藿、丹参、沉香组成，共研末待用。由陕西中医学院附属医院中药制剂室提供，由陕西中医学院药剂科鉴定均合格。

外敷佐剂：生姜汁，蜂蜜。

卵蛋白(ovalbumin,OVA)8g/瓶，由Sigma公司出品(分装)；灭活百日咳杆菌疫苗2m1/支，氢氧化铝500g/瓶，乌拉坦、蒸溜水、PBS液等，大鼠IFN-γ酶联免疫试剂盒。

1.2方法哮喘模型的制备参照文献[2-3]方法，并稍加改进，对模型组及各治疗组分别于第1天、第8天，每鼠分别以两腹股沟、腹侧、前足跖共4点皮下注射抗原液（含OVA100mg、灭活百日咳杆菌原液约5×109个/ml和氢氧化铝干粉100mg制成的混悬液）0.2ml，同时腹腔注射0.2ml抗原液致敏；空白对照组以等量生理盐水代替抗原液进行皮下、腹腔注射。第15天开始，将造模大鼠置于密闭器内(自制的50cm×30cm×20cm透明带盖塑料盒内)，给予2%OVA溶液进行雾化吸入，雾化流量为3ml/min，每次持续20min激发哮喘，观察造模大鼠反应，以出现烦躁、抖毛、咳嗽、抓鼻、打喷嚏、腹式呼吸、呼吸急促，甚则出现口唇、双眼、双耳紫绀，明显点头运动，抽搐，跌倒等症状后，随机从空白对照组、模型对照组各取2只，共4只作病理切片，模型对照组较空白对照组支气管黏膜及黏膜下层组织有大量的嗜酸性粒细胞浸润、支气管壁增厚、平滑肌增生、管腔狭窄、组织黏膜轻度充血水肿等典型的气道炎症表现，视为大鼠哮喘激发成功。造模成功后，第15天开始雾化，哮喘激发后灌胃给药及穴位贴敷，1次/日，持续14天。（大鼠用量按文献法[4]折算）空白对照组、模型对照组每鼠以蒸馏水3ml灌胃；地塞米松治疗组每鼠以地塞米松0.75mg/(kgd)用蒸馏水溶化为3ml灌胃；止喘贴治疗组按照穴位贴敷方法贴敷定喘、肺俞、肾俞。

实验分组：实验选取40只健康雄性大鼠，体重150-180g，按体重随机分为空白对照组、模型对照组、地塞米松治疗组及止喘贴治疗组共四组并编号。

1.3治疗

止喘贴治疗组取穴：参照《实验针灸学》[5]中的大鼠穴位图谱。定喘：第7颈椎与第1胸椎棘突之间旁开0.1cm；肺俞：第3胸椎棘突下旁开0.7cm之两旁肋间；肾俞：第2腰椎棘突下旁开0.7cm之两旁肋间。具体操作参照文献进行[6]，并稍作改进，以适于动物用。穴位敷贴前先用8%硫化钠在穴位处脱毛1.5cm×1.5cm面积，然后将止喘贴以生姜汁、蜂蜜调和混匀，制成约1.5g的药饼，将药饼放在大块医用胶布上分别敷贴在大鼠双侧“定喘”、“肺俞”、“肾俞”上，每次贴敷6小时，每日1次，共治疗14天。造模成功后，第15天开始雾化，哮喘激发后灌胃给药及穴位贴敷，1次/日，持续14天。（大鼠用量按文献法[4]折算）

空白对照组、模型对照组每鼠以蒸馏水3ml灌胃；地塞米松治疗组每鼠以地塞米松0.75mg/(kgd)用蒸馏水溶化为3ml灌胃；止喘贴治疗组按照穴位贴敷方法贴敷定喘、肺俞、肾俞。

全部动物于末次激发后24h，将大鼠用25%乌拉坦（10ml/kg）腹腔注射进行麻醉，仰卧位固定；结扎右肺后从气管导管注入2ml的生理盐水，反复抽吸4次(回收率达80%)后以1000r/min离心10min，取上清放入Eppendof管中待测。所有计量资料以均数±标准差(x-±S)表示，应用单因素方差分析法，组间比较用q检验。

2结果

对肺泡灌洗液Th1细胞因子IFN-γ含量的影响

组别数量(n)IFN-γ含量(pg/m1)

空白对照组1083.51±17.43

模型对照组1037.70±19.61▲▲

地塞米松治疗组1044.72±16.59▲▲△△

止喘贴治疗组1064.33±22.63▲△☆

注:与空白对照组比较,▲▲P＜0.01，▲P＜0.05；与模型对照组比较,△P＜0.05，△△P＞0.05；与地塞米松治疗组比较☆P＜0.05。

从表中可以看出，模型对照组肺泡灌洗液中IFN-γ含量明显低于空白对照组，有非常显著性差异(P＜0.01)；与模型对照组相比，止喘贴治疗组肺泡灌洗液中IFN-γ含量明显升高，有显著性差异(P＜0.05)，地塞米松治疗组有上调IFN-γ含量的趋势，但无明显差异(P＞0.05)；与地塞米松治疗组相比，止喘贴治疗组明显升高肺泡灌洗液中IFN-γ含量，有显著性差异(P＜0.05)。

3讨论

止喘贴治疗组能升高大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ的含量，而地塞米松组大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ含量较止喘贴治疗组有下调的趋势，提示使用地塞米松可能抑制了IFN-γ的合成与分泌。表明止喘贴从某方面对哮喘大鼠IFN-γ合成与分泌有促进作用，体现穴位贴敷对机体的免疫功能有双向调节作用，这也正是中医药治疗哮喘优势所在。

参考文献

[1]崔德健.支气管哮喘治疗的进展[J].中华结核与呼吸杂志，2004；27(7)：474-476.

[2]胡桂英.支气管哮喘发病机制研究进展[J].河北医科大学学报，1999；20(4)：255-257.

[3]SulakvelidzeI，InmanMD，RerecichT，etal.Increasesinairwayeosinophilsandinterleukin-5withminimalbronchoconstrictionduringrepeatedlow-doseallergenchallengeinatopicasthmatics[J].EurespirJ，1998；11：821.

[4]孙敬方.实验动物方法学[M].第一版.北京：人民出版社，2001；1:478.

[5]李忠仁.实验针灸学[M].第一版.中国中医药出版社，2003；1：320-335.

[6]袁维真.哮喘贴治疗支气管哮喘100例疗效观察及护理[J].吉林中医药，2006；26（9）：21-22.