金标法在乙肝血清学标志物检测中的应用

金标法在乙肝血清学标志物检测中的应用

杨玉军

杨玉军（攀枝花学院医学院基础医学教研室四川攀枝花617000)

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2010）12-035-02

我国是乙肝大国，感染者大约1.2亿，所以，乙肝的检测尤为重要。在临床中，实验室检测乙肝两对半绝大多数采用酶联免疫吸附实验（ELISA），ELISA法具有特异性强、灵敏性高的优点，但ELISA方法操作程序复杂，费时较长，一次检测需要5个小时左右，给实验室带来了极大的不便。近年来，出现了一种快速检测的试剂盒——金标试纸，大大提高了检测速度，15分钟就能够出结果，但此法出现假阴性的可能性较大。为此，我们在临床检验中将ELISA和金标法作对比，比较二者检验结果的符合率和方法的优缺点。现报告如下：

1材料和方法

1.1材料来自2008年8月—2009年8月健康体检者，共计416人，年龄18～43周岁，其中男238人，女178人。一次性无菌注射器静脉采血，室温下静置18小时待自行凝固收缩后析出血清。金标法检测试剂盒由上海金标生物科技有限公司(上海)提供，批号20080507。ELISA试剂盒由上海科华生物技术有限公司（上海）提供，批号20080406。酶标仪为美国伯乐公司550型，洗板机为北京普朗新技术有限公司DNX—9620型。

1.2方法

1.2.1ELISA一步法检测，严格按说明书操作，洗板机洗板，酶标仪450/630nm，双波长比色，以S／CO值判定结果。

1.2.2金标法乙肝两对半快速检测板是采用层析法检测乙肝病毒五项血清学标志，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。其中HBsAg、HBeAg检测试纸条采用双抗体夹心法，测抗原：固定于膜上测试区(T)的多克隆抗体+标本中待测抗原+金标记的特异性单克隆抗体显色和控制区(C)的相应抗体。HBsAb检测试纸条采用双抗原夹心法，在膜上测试区(T)有被事先固定的乙肝表面抗原和控制区(C)的相应抗体。滴加适量血清标本于试剂板加样处，不宜过多以免造成污染，不宜过少否则造成假阴性。在测试区(T)和控制区(C)均有红色条带出现为阳性，在测试区(T)不出现红色条带，而控制区(C)内出现红色条带为阴性结果。HBeAg、HBeAb此两项在检测试纸条上采用了竞争抑制法，试纸条膜上测试区(T)会有单克隆抗体和控制区(C)相应抗体。测试时滴入适量标本血清于试剂板加样处，如标本中含有相应抗体，则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应抗体，预包被在乳胶颗粒上的相应抗原则同膜上测试区(T)内单克隆抗体全部结合。强阳性标本测试区(T)没有红色条带，弱阳性则将出现一条较浅的红色条带，阴性标本测试区(T)内将会出现明显的红色条带。质控区(C)无论是阳性或阴性标本，都会出现一条红色条带，是判定是否有足够标本，层析过程是否正常，测试板是否失效的标准。本测试板在15分钟内读取结果，20分钟后判定结果无效。

2结果

416例标本结果如下，并经配对t检验(见表1)。

表1

阳性ELISA金标法P

HBsAg、HBeAg、HBcAb9797＞0.05

HBsAg、HBcAb、HBcAb5050＞0.05

HBsAg、HBcAb2627＞0.05

HBsAb、HBeAb、HBcAb1818＞0.05

HBsAb、HBcAb1212＞0.05

HBeAg、HBcAb11＞0.05

HBeAb、HBcAb88＞0.05

HBcAb43＞0.05

HBsAb7575＞0.05

全阴性125125＞0.05

3讨论

通过对416例标本的比较分析，金标测试板有1例HBsAg于15分钟内未能检出，该例标本ELISA法检测为HBsAg、HBcAb阳性。HBsAg显色较淡，S／CO值为0.937，可能是由于抗原滴度较低，金标法未能检出。其他各例均于10—15分钟内得出结果，且与ELISA法所得结果完全相符。ELISA法在临床实验室已得到普遍应用，特别是用于各种肝炎标志物的检测，但ELISA法需时较长，其主要原因是由于液相中的抗原(抗体)需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应。但作为基层医疗单位、医院急诊病人和手术前的应急的单个标本检测，包括现在的血站的流动采血点献血员的快速筛检是根本无法用ELISA法来实现的。20世纪70年代初，Fankl等建立了免疫胶体金技术，开始作为一种免疫标记技术而被使用，随后逐渐广泛用于免疫检测技术。各种金标检测条、检测卡已广泛被应用。金标法与ELISA法比较，金标法敏感性和特异性、重复性和稳定性较佳，准确性也较好，但金标法的敏感性较ELISA法差。故在实际应用中，根据实际情况两种方法联合起来，特别是在大批量检测时可用金标法作为初筛，这样可大量的节约时间，更快速、准确地为病人服务。