荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果探讨

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果探讨

周莹

（甘孜州疾控中心四川甘孜626000）

【摘要】目的：探究荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法：选取自2009年1月至2009年12月在我省流感病例900例，采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测，观察检测阳性率和阳性样本的类型。结果：2009年1～12月流行期采集流感样病例900例，流感病毒核酸检测呈阳性247例，阳性率为27.44%；其中，甲型H1N1共215例，甲型H3流感12例，甲通20例。结论：荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸科学有效，能够满足临床对流感病毒核酸快速、准确检测的需要，对其结果进行质量控制，能够最大限度保证结果的准确性，可临床进一步推广。

【关键词】荧光实时定量PCR法；流感病毒核酸；临床检测

【中图分类号】R44【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）29-0034-02

Qualitycontrolresultsdiscussionofreal-timefluorescentquantitativePCRmethodfordetectionofinfluenzavirusnucleicacid

ZhouYing.TheCentersforDiseaseControlandPreventionofGanzi,SichuanProvince,Ganzi626000,China

【Abstract】ObjectiveToexplorethereal-timefluorescentquantitativePCRmethodfordetectionofinfluenzavirusnucleicacidqualitycontrolresults.MethodsSelectedfromJanuary2009toDecember2009in900patientswithinfluenzainourprovince,usingreal-timefluorescentquantitativePCR,forinfluenzavirusnucleicacidtesting.Seeingthetypeoftestpositiverateandpositivesamples.ResultsPositivefor247casesofinfluenzavirusnucleicaciddetection,positiveratewas27.44%.Amongthem,thea(H1N1),atotalof215cases,12casesofinfluenzaa(H3,a20cases.ConclusionsReal-timefluorescentquantitativePCRmethodtodetecttheinfluenzavirusnucleicacid,scientificandeffective,andcanmeettheneedsoftherapidandaccuratedetectionofclinical.Tocontrolthequalityoftheresult,canmaximumlimittoensureaccuracy,clinicalpopularization.

【Keywords】Real-timefluorescentquantitativePCRmethod;Influenzavirusnucleicacid;Clinicaltesting

流感是一种急性呼吸系统疾病，主要由流感病毒引起，临床症状主要表现为高热、酸痛、乏力、呼吸道症状等[1]。流感传染性强、潜伏期短、传播迅速，2009年爆发的甲型H1N1流感，病情迅速蔓延，影响人类生命安全，流感预防已经越来越引起医务工作者的重视。为了进一步提升对流感病毒核酸的诊断效果，本研究特选取了2009年1月至2009年12月在我省流感病例900例，具体情况报告如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

随机选取2009年1月至2009年12月在我省流感病例700例，其中，男性523人，女性377人，年龄12～86岁，平均年龄（45.4±10.7）岁。

1.2方法

1.2.1流感病毒核酸提取

对所有流感病例患者进行流感病毒核酸提取，具体操作为：取一支无菌、无酶的1.5ml试管，加入560ulAVL，取病毒培养物140ul置于其中，混合15s，15～20℃保温10min，进行离心；之后，加入70%乙醇560ul，旋转混合器内混匀15s；将混合液分两次吸于带滤膜的离心柱中，8000rpm离心1min，弃收集管中的离心液；小心打开柱盖，加入500uLAW1，关盖，6000g，8000rpm离心15min，将离心后的滤柱转到新的2ml收集管上，于柱中加入500ulAW2，关盖，20000g，8000rpm离心3min弃收集管中液体，离心，彻底弃除AW2液；在离心柱上装入1.5ml离心管，小心打开杯盖，加入60ulAVE，室温下保持1min，6000g，8000rpm离心1min，收集离心液即为提取病毒的RNA[2]。

1.2.2荧光实时定量PCR法检测

流感病毒核酸荧光PCR检测混合液20υ1处理好的样本RNA5υ1反应体系为25υ1荧光通道检测均选择FAM通道，淬灭基团None[3]。盖好PCR反应管进行PCR扩增反应其条件为：50℃30min至95℃10min(95℃15s至55℃40s，循环45次)。

1.3诊断标准

在阴阳性参考均正常的条件下，Ct值36.0以下为反应呈阳性，无Ct值或Ct值为0为反应阴性，36.0＜Ct值＜40.0为灰区。

2.结果

2009年1～12月流行期采集流感样病例900例，流感病毒核酸检测呈阳性247例，阳性率为27.44%。检测结果呈阳性的样本中，甲型H1N1共215例，占比23.89%；甲型H3流感12例，占比1.33%；甲通20例，占比2.22%。

3.讨论

流感是一种由流感病毒所引起的急性发热性呼吸道传染病，临床表现为患者畏寒、发热、头痛、全身酸痛等症状。在以往研究中发现，流感临床表现不具备特征性，潜伏期短、传播迅速，对人类生命安全威胁极大，因此，加强对流感的检测和防控，对保证人类生命安全有着重要的意义。对流感病毒的检测，往往受到检测环境的影响，因此，对实验室检测方法进行质量控制，能够最大限度地保证实验结果准确，从而为流感防控提供依据。

流感病毒易变异，人类对特异性的流感病毒菌株缺乏免疫，导致流感容易爆发和蔓延，影响整个地区人类的生命健康和寿命长短。近年来，利用荧光定量PCR技术对流感病毒核酸进行检测，检测效果较好，荧光实时定量PCR法是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量[5]。该方法在对流感病毒核酸的检测中优势明显，操作简单、特异性强、污染较小，检测效果科学准确，因此，在临床上广泛应用。在本次研究中我们发现，2009年1～12月流行期采集流感样病例700例，流感病毒核酸检测呈阳性率为27.44%，其中，以甲型H1N1病毒最多，甲通次之，甲型H3流感病毒最少，各流感病毒发生率之间存在显著差异，充分证实了荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸科学性和有效性。对荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸进行质控，能够提升实验室技术水平，提升检验结果的准确性。

综上所述，荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸科学有效，能够满足临床对流感病毒核酸快速、准确检测的需要，可临床进一步推广。

【参考文献】

[1]葛琴娟,杨静,孙晋飞等.实时荧光定量PCR法检测镇江市流感样病例样本的结果与分析[J].实用预防医学,2010,17(4):755-757.

[2]刘建荣,宋淑娥,何莹等.实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用[J].职业与健康，2010,1(9):1000-1002.

[3]陈棋炯,孙永祥,丁水军等.应用实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒[J].中国卫生检验杂志,2010,1(6):1394-1396.

[4]区伟全,卢国钧.实时荧光定量PCR在铁路运输动物携带甲型流感病毒检测中的应用[J].热带医学杂志,2011,11(7):828-829.