化瘀通脉颗粒质量标准研究

化瘀通脉颗粒质量标准研究

胡靖1吴勇2

胡靖1吴勇2

（1马鞍山十七冶医院安徽马鞍山243000;2马鞍山市食品药品检验所安徽马鞍山243000）

【摘要】目的建立化瘀通脉颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对化瘀通脉颗粒中的丹参、白芍、当归、川芎进行了定性鉴别；用HPLC测定制剂中芍药苷的含量，采用KromasilC18色谱柱；乙腈-水(15:85)为流动相；检测波长为230nm；流速为1.0ml•min-1。结果定性鉴别方法专属性强；芍药苷在16.62～265.92μg•ml-1范围内有良好线性关系,回归方程为Y=11946X+339.22，R=0.9999（n=6），平均回收率为98.69%，RSD为0.98（n=4）。结论本研究建立的TLC和HPLC方法专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于化瘀通脉颗粒的质量控制。

【关键词】化瘀通脉颗粒质量标准薄层色谱法液相色谱法芍药苷

【中图分类号】R927.11【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）14-0377-03

StudyontheQualityStandardofHuayuTongmaiGranules

HUjing1WUyong2

(MaanshanHospitalof17thMetallurgicalConstructionCompang.MaanshanAnHui243000,Maanshaninstituteforfoodanddrugcontrol,MaanshanAnHui243000)

【Abstract】Objective：ToestablishqualitystandardofHuayuTongmaiGranules．Methods：TLCmethodwasusedtoidentifyDanshen,Baishao,Danggui,Chuanxiong,HPLCmethodwasusedtodeterminatepaeonilorininthispreparation.TheseparationwaspreformedonKromasilC18column,usingAcetonitrile-water(15:85),thedetectingwavelengthwas230nmandflowratewas1.0ml•min-1．Results：Qualitativeidentificationmethodhashighspecificity,thelinearrangeofPaeonilorinwas16.62～265.92μg.ml-1,recursiveequationwasY=11946X+339.22，R=0.9999（n=6）,theaveragerecoverywas98.69%,RSD=0.98%（n=4）.Conclusion：ThequalitystandardbasedonTLCandHPLCmethodhashighspecificity,highsensitivity,goodreproducibility,canbeusedforthequalitycontrolofHuayuTongmaigranules.

【Keywords】HuayuTongmaigranulesQualityStandardTLCHPLCPaeonilorin

化瘀通脉颗粒为医院临床经验方，由丹参、川芎、当归、红花、白芍等十四位中药组成，具有滋养肝肾、化瘀通脉。用于缺血性中风恢复期症见头晕头痛、耳鸣目眩、少眠多梦，口眼歪斜，半身不遂，舌强语顿等症。由于其为中药复方制剂，成份复杂，暂没有明确的质量控制标准，本文从定性和定量两个方面对其质量标准进行研究，分别采用薄层色谱法对制剂中的丹参、白芍、当归、川芎进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对白芍中有效成分芍药苷进行含量测定。以期为更好地控制化瘀通脉颗粒的质量提供一种简便、可行、重复性好的质量控制方法，以保证临床疗效的稳定。

1仪器与试药

日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪（LC-20AT四元泵，SPD—M20A检测器，SIL-20A自动进样器，LCsolution色谱工作站)；天津奥特塞斯AT-130型柱温箱；超声波清洗器JK-250型。薄层色谱用硅胶G板（烟台市化学工业研究所）；芍药苷对照品（批号：110136-200732，供含量测定用）；丹参酮ⅡA（批号：0766-200213，供含量测定用）；当归对照药材（批号120927-200310）；川芎对照药材（批号120918-200507）；均购于中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。化瘀通脉颗粒样品和阴性样品均由蒙城县中医院院制剂室提供。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别[1]

2.1.1丹参的鉴别取本品适量，粉碎取粉末2.0g，加乙醚30ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，即得供试品溶液，另取丹参酮ⅡA对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯（19:1）为展开剂，展开取出晾干,供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图1

图1.丹参TLCL图（1丹参酮ⅡA对照品2样品3阴性样品）

2.1.2当归、川芎的鉴别取本品2.0g，加乙醚30ml，加热回流1h，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归、川芎对照药材各1.0g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。见图2

图2.当归、川芎TLC图（1当归对照药材2川芎对照药材3样品3阴性样品）

2.1.3白芍的鉴别取本品内容物5.0g，加乙醇15ml，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml作为供试品溶液；取芍药苷对照品，加乙醇制成1mg·ml-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。见图3。

图3.芍药苷TLC图（1芍药苷对照品2样品3阴性样品）

2.2芍药苷的含量测定

2.2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：KromasilC18柱(4.6mm×250mm，5µm)；流动相：乙腈-水(15:85)；检测波长：230nm；柱温30℃；流速1.0ml•min-1；进样量：10µl。

2.2.2对照品溶液制备精密称取芍药苷对照品16.62mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.1662mg•ml-1的对照品储备溶液。

2.2.3供试品溶液制备取本品内容物，研细，取约1.0g，精确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇，称定，密塞超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

2.2.4阴性溶液制备按处方量称取除白芍以外的药材适量，按上述供试品溶液制备方法制备阴性供试品溶液，进行测定。

2.2.5测定方法精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各10ml，注入色谱仪中，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算样品的含量。色谱图见图4。

图4、化瘀能脉颗粒HPLC图谱(A:芍药苷对照品B：化瘀通脉颗粒样品C：阴性样品)

2.2.6线性关系考察精密吸取上述对照品贮备溶液1、4、7、10、13、16μl分别注入液相色谱仪中按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，得回归方程Y=11946X+339.22，R=0.9999（n=6）。表明芍药苷在16.62～265.92μg•ml-1范围内呈良好的线性关系。

2.2.7精密度试验精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，测定芍药苷峰面积积分值，分别为1653065、1648704、1647192、1651155、1654418、1677734，RSD=0.68%，表明精密度良好。

2.2.8稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进行测定，记录芍药苷峰面积积分值，分别为1656298、1652143、1653032、1666825、1665564、1640256，RSD=0.59%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.9重复性试验取同一批号样品，按2.2.3项下的方法平行制备供试品溶液共6份并测定，记录色谱图，计算出芍药苷含量分别为2.5586，2.5330，2.6590，2.6258，2.5771，2.5252mg•g-1，RSD=0.49%。表明本方法重复性良好。

2.2.10回收率试验取已知含量的化瘀通脉颗粒样品6份，精密称定，精密加入一定量芍药苷对照品。照上述供试品制备方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定芍药苷含量，计算回收率，结果见表1。

表1加样回收率测定结果

3讨论

3.1本方为中药复方制剂，采用薄层色谱鉴别方法对方中的主要药味进行了鉴别，并进行了阴性对照试验，结果其方法简便且专属性强，可有效控制本品的质量。

3.2关于白芍中芍药苷的含量测定方法，文献报道较多[2-5]，本试验前分别采用不同比例的甲醇水、磷酸盐缓冲液等，未取得满意的分离效果，采用乙腈-水(15:85)为流动相，结果样品分效果良好，阴性溶液在相应的芍药苷保留时间处无峰出现，可见本方法测定芍药苷其它成分无干扰。

3.3化瘀通脉颗粒为医院临床经验方，在医院临床使用多年，一直未建立其质量控制标准，本实验建立的质量标准具有简便、快速、重现性好的特点，可作为化瘀通脉颗粒及含白芍的制剂的定性、定量分析方法。

3.4为了更好地控制化瘀通脉颗粒的质量，确保临床疗效，建议每克化瘀通脉颗粒中芍药苷含量不低于2.5mg，以保证临床疗效的稳定，并可为其进一步开发提供参考。

参考文献

[1]国家药典委员会.2010年版中国药典（一部）[S],北京:化学工业出版社.

[2]安晔,赵明宏,何静.高效液相色谱法测定桃红四物口服液中芍药苷的含量[J].实用药物与临床,2011,14(6):498-499.

[3]黄巧平,郑笈,倪立坚,等.当归调经颗粒质量标准研究[J].海峡药学,2011,23(11):76-79.

[4]王春丽.HPLC法测定参芪健胃颗粒中芍药苷的含量[J].中国中医药咨讯,2011,3(20):23-24.

[5]郑美善,徐莲花,崔永学.高效液相色谱法测定止痛清晕胶囊中芍药苷含量[J].中国药业,2012,21(1):34-34.