高效液相谱法测定络石藤中黄酮苷元成分的方法

高效液相谱法测定络石藤中黄酮苷元成分的方法

罗世江

罗世江（广西北海市中医医院药剂科536000）

【摘要】目的：探讨高效液相色谱法测定络石藤中黄酮苷元成分的方法。方法：色谱柱为DikmaInertsilODS-3C18（250mm×4、6mm，5μm），流动相为甲醇-0.1％磷酸（pH2.5，梯度洗脱），检测波长为350nm，流速为0.8mL•min^-1柱温为32℃。进样量为10μL。结果：络石藤中黄酮类化合物多以木犀草素和芹菜素的结合形式存在,水解前后木犀草素的含量分剐为0.0097%和0.0332%,芹菜素的含量分别为0.0124%和0.0709%。木犀草素的加样回收率为98.4%～102.0%,RSD为2.84%～3.42%；芹菜素的加样回收率为97.2%～101.6%,RSD为1.82%～3.98%.结论:高效液相谱法对络石藤中的黄酮苷元成分进行了初步的定性、定量研究,可为络石藤的质量研究提供科学依据。

【关键词】高效液相色谱法络石藤黄酮类化合物黄酮苷元，

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）04-0313-01

络石藤为夹竹桃科植物络石的茎、叶。具有祛风通络，凉血消肿的功效。用于风湿热痹，筋脉拘挛，腰膝酸痛，喉痹，痈肿，跌扑损伤。其主要化学成分为黄酮，木质素类以及三萜类化合物[1]。天然黄酮类化合物多以苷类形式存在，并且由于糖的种类、数量、连接位置及连接方式不同，可以组成各种各样的黄酮苷类。通过高效液相谱法对络石藤中黄酮苷元的成分进行测定和比较。

1材料

1.1仪器材料：LC-2900型高效液相色谱仪--P2910型微机宝石恒流泵（上海普天分析仪器有限公司生产）Waters2487UV检测器,77251手动进样阀SA0063150型索氏提取器(中国医药集团上海化学试剂公司)；TG16-WS型台式高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)，试药木犀草素对照品(中国药品生物制有限公司）。

2方法

2.1色谱条件色谱柱DikmaInertsilODS—3C；流动相：甲醇—0.1%磷酸（Ph2.5）,梯度洗脱（0—10min，01.%磷酸的量为20%--50%），流速：每分0.8ml，检测波长：350mn。

2.2提取液的制备将干燥的络石藤饮片1.0g，放于索氏提取器中加入80ml石油醚，水浴脱脂2小时，然后到出石油醚，药渣混干后，加入50%乙醇80ml，水浴恒温提取4小时，将提取液过滤，放入100ml容量瓶中，用50%乙醇洗涤滤纸，转移定容至刻度混匀经微孔滤膜过滤。

2.3对照品溶液的制备将芹菜素对照品1.35mg、木犀草素对照品1.25mg，分别放置于容量瓶中，用甲醛溶解定容，作为对照品贮备液。

2.4水解时间取一定量的甲醇提取液，加入盐酸至成浓度为0.8moI.L,分别水解1,2,3小时，按照2.1项下色谱条件进行样分析，测出黄酮苷元总含量，表明水解1小时样品即可水解完全。

2.5精密试验将对照品溶液高度离心10分钟后。连续进样6次，结果木犀草素峰面积的RSD为3.12%，芹菜素峰面积的RSD为3.53%。实验证明仪器的精密度良好。

2.6加样回收率试验将络石藤0.6g共5份分别加入含量90%，100%，120%的木犀草素和芹菜素对照品按照上述方法计算加样回收率。

2.7样品含量测定将芹菜素和木犀草素样品未水解及水解后含量分别精密吸入供试品溶液，注入高效液相谱仪进行测定。

3结果

用高效液相谱法能精确的测定出络石藤中黄酮苷元成分。

4讨论

络石藤中的黄酮类化合物多以苷的形式存在，采用酸水解法对络石藤提取液进行水解，测定络石藤在水解前和水解后黄酮苷元的含量，经过一系列的实验表明络石藤中木犀草素和芹菜素的含量水解后均增高，实验证明络石藤中的同类化合物多以木犀草素和芹菜素的结合形势存在。

据文献[2]报道，黄酮类化合物除少数游离外，大多与糖结合成苷。黄酮苷元一般难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，易溶于稀碱液。黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水溶性相应加大，而在有机溶剂中的溶解度相应减少。用高效液相谱法测定络石藤中黄酮苷元成分，发现络石藤中黄酮类化合物多以木犀草素和芹菜素的结合形势存在。

参考文献

[1]谭兴起，陈海生，周密络石藤中的三萜类化合物[J].中草药.2006，37（2）：171.

[2]韩英梅，络石藤化学成分及其抗癌活性[J]国外医药植物药分册.2002,17（2）：57