沙眼衣原体感染的实验室诊断

沙眼衣原体感染的实验室诊断

赵琪林

赵琪林（四川省遂宁市中心医院检验科629000）

【中图分类号】R777.32【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）15-0168-02

【摘要】目的探讨不同检测方法对生殖道衣原体感染的诊断意义。方法对2009年12月-2010年12月在本院进行治疗86的生殖道炎症患者的尿道（男性）或宫颈分泌物（女性），采用聚合酶链反应（PCR）、酶联免疫反应（ELISA）及细胞培养法（CC）进行检测，并进行比较。结果PCR、ELISA及CC三种方法的阳性检出率分别为25.58%（22/86）、8.14%（7/86）及19.76%（19/86），三种检测方法间差异具有统计学意义（P<0.05）；以细胞培养法为标准，PCR法的特异性为98.6%，灵敏度为100%；ELISA法的特异性为91.2%，灵敏度为88.6%，三种方法的差异不具有统计学意义（P>0.05）。结论PCR、ELISA及CC三种方法对于支原体感染的诊断价值较好，均可以用于对支原体感染的实验室诊断。

【关键词】PCRELISACC沙眼衣原体诊断

沙眼衣原体是一种在细胞内进行专性寄生的微生物，其感染后可以引起多种系统的疾病，包括有沙眼、生殖系统感染等，由于沙眼衣原体引起的泌尿生殖系统感染已经成为最常见的性传播疾病[1]，而其发病时临床症状并不明显从而导致患者就诊不及时，耽误治疗，因此，寻找高灵敏度、高特异性的诊断方法具有重要的意义，本文主要探讨PCR、ELISA及CC三种方法对生殖道衣原体感染的诊断价值。

1材料和方法

1.1一般资料

本次研究对象主要为于2009年12月-2010年12月在本院进行治疗86的生殖道炎症患者，其中男性有37例，女性有49例，年龄在18-68岁，平均年龄为38.4岁；所有患者排除了淋球菌感染。

1.2方法

1.2.1样本的采集：对于女性患者：首先用棉签将宫颈口的分泌物擦去，用无菌棉拭子在宫颈内进行刮取分泌物，将拭子进行旋转，尽量将上皮细胞都刮取下来；对于男性患者：将无菌棉拭子插入尿道3cm左右，将尿道分泌物刮取下来；将上述拭子放入运输液中（1ml，蔗糖磷酸盐缓冲液）对拭子进行挤压，尽量使其中的细胞都进入到运输液中，将拭子舍弃。将上述标本保存于-20℃。

1.2.2细胞法检测：将样本进行漩涡震荡，取上清，接种到McCoy细胞中，进行离心（3000r/min，1h），72h后进行固定（无水甲醇），碘染色，在显微镜下进行观察，若有包涵体，则为阳性。

1.2.3PCR法：去标本，离心（1500r/min，10min），加50μl的裂解液A，进行煮沸10min，待冷却后，加入10μl的裂解液B，进行混匀，再次离心（1500r/min，5min），取上清即为模板，保存于4℃。去待测样品10μl，加入20μl的反应液，离心后加入石蜡油100μl，最后进行扩增（全自动扩增仪）

1.2.4ELISA法：按照试剂盒上的说明进行操作，将样本进行漩涡震荡15s，煮沸15min，待冷却后再次进行震荡15s，加入转移液50ul，孵育90min，再用PBS洗涤5次，加扩增液30min后加入终止液，若为阳性可变为红色。

1.3统计学处理

本研究对于三种检测方法的阳性率进行比较，采用卡方检验，当P＜0.05为差异有统计学意义，统计软件应用SPSS13.0进行统计学分析。

2结果

2.1三种方法阳性率比较：PCR、ELISA及CC三种方法的阳性检出率分别为25.58%、8.14%及19.76%，PCR和CC两种方法的阳性率高于ELISA，差异具有统计学意义（P<0.05），具体结果见表1。

表1三种方法阳性率比较

检测方法例数阳性例数阳性率(%)P

PCR862225.58<0.05

CC861919.76

ELISA8678.14

2.2三种方法诊断特异性、灵敏度比较：以细胞培养法为标准，PCR法的特异性为98.6%，灵敏度为100%；ELISA法的特异性为91.2%，灵敏度为88.6%，三种方法的差异不具有统计学意义（P>0.05）。

3讨论

目前，随着生物技术的不断发展，临床上对沙眼衣原体进行检测的手段也越来越多，沙眼衣原体是一种胞内寄生的微生物，细胞培养法是金标准，但是此方法对仪器设备要求较高，同时影响因素也多，对于结果的准确性造成影响[1]；PCR法是聚合酶链反应，其检测的灵敏度及特异性较好，其对于一些不规范的样本其检测也有较高的稳定性，但是由于PCR技术本身的问题，使其检测结果的假阳性概率提高[2]；ELISA法器阳性率较低，但是操作简单，能够同时在短时间内进行高通量的检测，大大提高了工作效率[2]，临床上可以根据需要选择合适的检测方法。

本文主要对于86例样本进行了检测，结果显示PCR、ELISA及CC三种方法的阳性检出率分别为25.58%、8.14%及19.76%；以细胞培养法为标准，PCR法的特异性为98.6%，灵敏度为100%；ELISA法的特异性为91.2%，灵敏度为88.6%，综上所述，PCR、ELISA及CC三种方法对于支原体感染的诊断价值较好，均可以用于对支原体感染的实验室诊断。

参考文献

[1]贾文祥,主编.医学微生物学[M].人民卫生出版社,2001.

[2]杨杰，张武.沙眼衣原体实验诊断技术进展.中华医学检验杂志，2008,21（2）：134～136.