熟地黄传统九蒸九制过程中有效成分变化研究

熟地黄传统九蒸九制过程中有效成分变化研究

蔡超

福建省漳州市中医院363000

【摘要】目的：熟地黄在九蒸九制过程中有效成分发生变化，通过成分变化分析对熟地黄的实际应用提供一定的参考价值。方法：熟地黄各种环烯醚萜类成分含量测定方法：首先进行供试品和对照品溶液的制备，然后采取合适的色谱条件进行梓醇、地黄苷A和地黄苷D以及益母草苷的含量测定；熟地黄中毛蕊花糖苷和5-HMF以及糖类成分的含量测定方法：首先进行供试品和对照品溶液的制备，然后采取合适的色谱条件进行毛蕊花糖苷和5-HMF以及糖类成分的含量测定。根据测定的结果分析熟地黄在九蒸九制过程中各种有效成分的变化，为熟地黄在实际应用中炮制方法的选择提供一定的参考依据。结果：根据对熟地黄九蒸九制过程中各成分的实验显示，随着蒸制次数的增加，梓醇和益母草苷的含量在逐渐减少，地黄苷A和地黄苷D的含量在逐渐减少；随着蒸制次数的增加，毛蕊花糖苷的含量在逐渐减少，5-HMF的含量在逐渐增加，；随着蒸制次数的增加果糖和葡萄糖的含量在逐渐增加，蔗糖的含量在逐渐减少，在用药过程中可根据各成分的变化情况选择炮制方法。结论：熟地黄在九蒸九制过程中各种有效成分会随之发生变化，在实际用药过程中可根据各种有效成分的变化为熟地黄炮制方法的选择提供有效的参考。

【关键词】熟地黄；环烯醚萜类成分；毛蕊花糖苷和5-HMF；含量测定

熟地黄为生地黄的炮制加工品，传统的炮制方法一般选择黄酒蒸制加工而成，在实际用药过程中要根据功效的需求选择不同的炮制方法[1]。熟地黄味甘，性微温，具有补血滋阴，益精填髓的功效。熟地黄在临床上主要用于治疗血虚萎黄、月经不调、崩漏下血、肝肾阴虚以及腰膝酸软等症[2]。根据现代对熟地黄的有效成分及药理作用的研究发现，熟地黄的有效成分主要包括各种环烯醚萜类成分、毛蕊花糖苷和5-HMF以及各种糖类成分等，在炮制过程中随着炮制方法的不同各成分发生变化[3]。本次通过对熟地黄在传统九蒸九制过程中各种环烯醚萜类成分、毛蕊花糖苷和5-HMF以及各种糖类成分含量的变化进行统计和分析，为熟地黄正确炮制方法的选择提供一定的参考。

1.仪器设备与方法

1.1仪器设备

以山西临沂市的生地黄为研究材料，使用仪器分别为美国进口的U3000高效液相色谱仪、GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱、HHS恒温水浴锅、DV215CD万分之一精密电子天平、超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司生产）等[4-5]。

1.2方法

九蒸九制炮制方法：熟地黄的蒸制方法分为清蒸和酒蒸，生地黄经蒸锅蒸6小时后放置到干燥箱内，温度设置在60ºC，干燥24小时后为一蒸一制，反复蒸制9次，于每次蒸制后取适量的熟地黄样品，记为清蒸；生地黄加黄酒拌制，黄酒完全吸收后蒸锅蒸6小时后放置到干燥箱内，温度设置在60ºC，干燥24小时后为一蒸一制，反复蒸制9次，于每次蒸制后取适量的熟地黄样品，记为酒蒸[6]。

1.3含量测定方法

先制备供试品溶液和对照品溶液，供试品溶液的制备，分别以九蒸九制过程中清蒸和酒蒸在不同蒸制次数后的取样0.5g置入50ml量瓶中，加甲醇定容，室温下冷浸后超声提取1.5小时，冷却到室温，此时溶液质量也减少，补足后过滤，取滤液25ml蒸干，然后加15%甲醇溶解定容为5ml，用微孔滤膜滤过后作为供试品溶液；对照品的制备：分别取梓醇（批号为150331）、地黄苷A（批号为130506）、地黄苷D（批号为140402）、益母草苷（批号为130911）、毛蕊花糖苷（批号为MST-13122711）、5-HMF（批号为14099）、果糖（批号为MST-13072803）、葡萄糖（批号为111507-201303）以及蔗糖（批号为MST-13122601），精密称量后加甲醇定容至5ml作为空白对照组。

各种环烯醚萜类成分含量测定方法：色谱柱为HypersilGOLDaQC18，体积流量为1ml/min，柱温为25ºC，测定熟地黄梓醇含量时流动相选择乙腈-0.1%磷酸水，检测波长为210nm；测定熟地黄中地黄苷A、地黄苷D以及益母草苷流动相选择乙腈-0.1%磷酸水，检测波长为203nm。毛蕊花糖苷含量测定：色谱柱为HypersilGOLDaQC18，体积流量为1ml/min，柱温为25ºC，测定熟地黄梓醇含量时流动相选择乙腈-0.1%磷酸水，检测波长为334nm。熟地黄中5-HMF的含量测定：色谱柱为HypersilGOLDaQC18，体积流量为1ml/min，柱温为25ºC，测定熟地黄梓醇含量时流动相选择乙腈-0.1%磷酸水，检测波长为284nm。熟地黄中糖类成分的含量测定：色谱柱为HypersilGOLDaQC18，体积流量为1ml/min，柱温为25ºC[7-10]。

2.结果分析

2.1熟地黄中环烯醚萜类成分随蒸制次数的动态变化情况

根据对熟地黄九蒸九制过程中各种环烯醚萜类成分的动态变化统计显示：随着蒸制次数的增加，梓醇和益母草苷的含量在逐渐减少，地黄苷A和地黄苷D的含量在逐渐增加。梓醇线性方程：Y=106.7x-14.58，r=0.9994，线性范围：2024～40.48ug/ml；地黄苷A线性方程：Y=30.20x-2.065，r=0.9995，线性范围：830～16.6ug/ml；地黄苷D线性方程：Y=53.52x-10.02，r=0.9994，线性范围：782～15.64ug/ml；益母草苷线性方程：Y=115.4x-0.641，r=0.9995，线性范围：5430～108.6ug/ml。（见表1）

表1熟地黄中环烯醚萜类成分随蒸制次数的动态变化结果

根据熟地黄中毛蕊花糖苷和5-HMF在九蒸九制过程中的动态变化统计显示：随着蒸制次数的增加，毛蕊花糖苷的含量在逐渐减少，5-HMF的含量在逐渐增加。酒蒸和清蒸在第8次时5-HMF的含量最高。毛蕊花糖苷线性方程：Y=5.865x+0.655，r=0.9995，线性范围：5430～108.6ug/ml；5-HMF线性方程：Y=102.5x-8.329，r=0.9994，线性范围：866～18.4ug/ml。（见表2）

表2熟地黄中毛蕊花糖苷和5-HMF随蒸制次数的动态变化结果

熟地黄是应用广泛的中药材，药理研究显示其主要作用包括增强人体的造血机能、抑制中枢作用、调节免疫作用以及增强记忆与抗衰老作用[12-13]。目前针对熟地黄九蒸九制过程中各种有效成分是否发生改变的研究较少，没有得出一致的结论。本次研究通过统计和对比熟地黄在九蒸九制过程中各种有效成分的变化，为九蒸九制后熟地黄的临床处方应用提供一定的参考。研究数据显示，梓醇具有抗癌、神经保护、抗炎、利尿、降血糖及抗肝炎病毒等作用，随着蒸制次数的增加，梓醇的含量在逐渐减少，想要发挥其功效应减少蒸制次数。益母草苷具有利尿消肿和收缩子宫的作用，随着蒸制次数的增加，益母草苷的含量在逐渐减少，想要发挥其功效应减少蒸制次数。毛蕊花糖苷具有抗病毒和升高血压的作用，随着蒸制次数的增加，毛蕊花糖苷的含量在逐渐减少，想要发挥其功效应减少蒸制次数。5-HMF具有抗氧化损伤的作用，随着蒸制次数的增加，5-HMF的含量在逐渐增加，想要发挥其功效应增加蒸制次数，酒蒸和清蒸在第八次时含量最高。随着蒸制次数的增加，果糖和葡萄糖的含量在逐渐增加，想要发挥其功效应增加蒸制次数。，随着蒸制次数的增加，蔗糖的含量在逐渐减少，想要发挥其功效应减少蒸制次数。说明熟地黄在九蒸九制过程中各种有效成分会随之发生变化，在实际用药过程中可根据各种有效成分的变化为熟地黄炮制方法的选择提供有效的参考，促进临床合理用药。2015年版中国药典熟地黄的检测指标是毛蕊花糖苷。实验发现随着蒸制次数的增加，毛蕊花糖苷的含量在逐渐减少。若要毛蕊花糖苷的含量高，需减少蒸制次数。这一结论与传统的方法有冲突，需要业界更多人来探讨、研究。

中药在我国有几千年的应用和研究历史，随着医学水平的深入探索和研究，人们对中药的认识越来越多，也越来越全面，国内外对中药在临床中的应用越来越重视。中药材通过加工炮制变成中药饮片后才可以应用于临床处方，其炮制方法的选择直接关系着临床疗效、药品质量的稳定性以及临床应用的安全性[11]。虽然中药有着悠久的历史，但针对炮制机理的研究较少，医学的诸多学者对中药炮制的认识有限，需要加强在这方面的研究。中药在炮制过程中缺乏健全的法规，质量完全凭借操作人的主观感觉和经验来评定，很难保证饮片的质量，因此药物的疗效和安全性也存在一定程度的隐患。临床需要加大在炮制后成分含量变化的研究，通过有效成分的变化来分析药性和药效的改变，从而更好更科学合理的应用于临床[14-15]。

参考文献：

[1]吴金环，顾红岩，喇孝瑾，等.地黄与熟地黄对糖尿病小鼠血糖血脂的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（08）：161-163.

[2]李卫民，李卫红.方剂中熟地黄配伍规律的研究[J].中华中医药杂志，2011，26（12）：2810-2812.

[3]朱妍，徐畅.熟地黄活性成分药理作用研究进展[J].亚太传统医药，2011，7（11）：173-175.

[4]刘道刚，曾敏，高洪燕，等.生、熟地黄缓解肾间质纤维化的作用及其机制研究[J].中药材，2015，38（12）：2507-2510.

[5]孟祥龙，马俊楠，张朔生，等.熟地黄炮制（九蒸九晒）过程中药效化学成分量变化及炮制辅料对其影响研究[J].中草药，2016，47（05）：752-759.

[6]郭兆娟，翟华强，袁一平，等.基于李时珍药学学术思想传承的国医大师金世元熟地黄调剂技术研究[J].中国中药杂志，2016，41（09）：1759-1762.

[7]曹建军，梁宗锁，杨东风，等.应用HPLC指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点[J].中国中药杂志，2010，35（19）：2556-2560.

[8]朱化珍，陈德兴.张景岳《新方八阵》配伍规律研究[J].中华中医药杂志，2012，27（04）：1034-1037.

[9]陶怡，沈涛，马晖.熟地黄及其不同配伍药对治疗糖尿病大鼠骨质疏松的药效比较[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（08）：249-251.

[10]邱建国.熟地黄炮制的渊源及炮制终点判断依据研究进展[J].中草药，2012，43（08）：1656-1660.

[11]郑晓珂，侯委位，段鹏飞，等.熟地黄提取物体外免疫调节作用实验研究[J].中国药学杂志，2012，47（24）：1995-2000.

[12]李乃谦.熟地黄活性成分药理作用的研究进展[J].中国处方药，2017，15（01）：14-15.

[13]张副兴，裘生梁，祝雨田等.熟地黄多糖提取技术及药理作用研究进展[J].浙江中西医结合杂志，2013，23（02）：153-154.

[14]吴勃岩，王雪，王君龙，等.熟地黄多糖对H_（22）、S180荷瘤小鼠抑瘤作用及存活时间的影响[J].中医药信息，2012，29（06）：19-21.

[15]李娴，王娜，卫向龙.熟地黄炭补血止血作用的炮制机制探索[J].中国实验方剂学杂志，2017，23（04）：29-33.

作者简介：蔡超，女，40岁，毕业于福建中医药大学，本科学历，主管中药师，从事中药调剂工作。