叶酸代谢相关基因及血清HCY检测新生儿缺陷性疾病的临床观察

叶酸代谢相关基因及血清HCY检测新生儿缺陷性疾病的临床观察

裴艳霞1魏海青2

1.河北省迁安市妇幼保健院河北迁安064400；2.石家庄医学高等专科学校河北石家庄050000

摘要：目的：探讨叶酸代谢相关基因及血清HCY检测在新生儿缺陷性疾病中的临床观察。方法：取2015年4月-2017年4月医院进行检查的孕妇143例，入院后初次检测MTHFR基因位点-C677T、A1298C；MTRR基因位点—A66G和血清同型半胱氨酸（Hcy）水平，根据检测结果分为未发现风险或低风险组（n=111例）和中、高度风险组（n=32例）。未发现风险或低风险组每天口服400ug叶酸，中、高度风险组每天口服800ug叶酸，连续服用到孕3个月，再次检测Hcy水平。胎儿分娩后比较2组新生儿缺陷性疾病发生率。结果：143例孕妇均获得叶酸代谢相关基因的检测，MTHFR基因位点-C677T主要集中在CC位点，占72.03%；A1298C主要集中在AA基因位点，占62.23%；MTRR基因位点—A66G则主要集中在AA位点，占60.14%；2组补充叶酸后Hcy比较差异无统计学意义（P>0.05）；中、高度风险组叶酸补充前Hcy水平，高于未发现风险或低风险组（P<0.05）；中、高度风险组神经管畸形、四肢畸形、先天性心脏病及唐氏综合征发生率与未发现风险或低风险组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：加强叶酸代谢相关基因及血清Hcy检测能评估新生儿缺陷疾病发生率，每天口服800ug补充有助于降低出现缺陷发生率，值得推广应用。

关键词：叶酸代谢相关基因；血清同型半胱氨酸；新生儿缺陷性疾病；临床观察

Clinicalobservationoffolicacidmetabolismrelatedgenesand

thedetectionofserumHCYinneonataldefectivediseases

PeiYanxia1WeiHaiqing2

（1.Qian'anmaternalandchildhealthcarehospitalofHebeiProvince.HebeiQianan064400

2.ShijiazhuangMedicalCollege.HebeiShijiazhuang050000）

[Abstract]Purpose：ToinvestigatetheclinicalobservationoffolicacidmetabolismrelatedgenesandthedetectionofserumHCYinneonataldefectivediseases.Methods：Wetook143gravidasexaminedinthehospitalfromApril2015toApril2017.Afterbeingadmittedtothehospital，theinitialexaminationincludestheMTHFRgeneloci-C677TandA1298C；theMTRRgenelocus-A66Gandthelevelofserumhomocysteine（Hcy）.Thenaccordingtothedetectingresults，theywerepidedintonotfoundriskorlowriskgroup（n=111cases）andmiddleandhighriskgroup（n=32cases）.Notfoundriskorlowriskgroupwasgivenoral400ugfolicaciddailyandoral800ugfolicacidwastakendailyinthemeddleandhighriskgroup.Theytooktheirrespectivefolicaciduntil3monthsafterpregnancyandthelevelofHcywasdetectedagain.Theincidenceofneonataldefectivediseaseswascomparedbetweenthetwogroupsafterdelivery.Results：143gravidasallweredetectedthefolicacidmetabolismrelatedgenes.AndtheMTHFRgenelocus-C677TmainlyconcentratedontheCClocus，accountingfor72.03%；A1298CmainlyconcentratedontheAAgenelocus，accountingfor62.23%；TheMTRRgenelocus-A66GmainlyconcentratedontheAAlocus，accountingfor60.14%；Aftersupplyingfolicacidforthetwogroups，thedifferenceofHcywasnotstatisticallysignificant（P>0.05）；Beforethesupplementoffolicacid，thelevelofHcyinthemiddleandhighriskgroupwashigherthanthatinthenotfoundriskorlowriskgroup（P<0.05）；Therewasnosignificantdifferenceintheincidenceofneuraltubedefects，limbdeformities，congenitalheartdiseaseandDown'ssyndromeinthemiddleandhighriskgroupcomparedwiththenotfoundriskorlowriskgroup（P>0.05）.Conclusion：EnhancingfolicacidmetabolismrelatedgenesandserumHcytestingcanassesstheincidenceofneonataldefectivediseasesanddailyoral800ugsupplementisconducivetoreducingtheincidenceofdefects，soitisworthpopularizing.

[Keywords]folicacidmetabolismrelatedgenes；serumhomocysteine；neonataldefectivediseases；clinicalobservation

出生缺陷是指胚胎或胎儿生长发育过程中解剖学上、功能上出现的异常，包括：无脑儿、脊柱裂、先天性心脏病等[1]。数据报道显示[2]：我国新生儿缺陷性疾病发生率为5.6%，其诱因包括环境、遗传、染色体异常等有关。文献报道显示[3]：新生儿出生缺陷与叶酸代谢相关基因、血清Hcy水平有关。从我国婚前育龄妇女血清检查分析，我国妇女叶酸缺乏者分别为21％和38%，由于孕妇妊娠期叶酸摄入不足，容易造成叶酸缺乏，容易增加妊娠无脑儿、脊柱裂等先天性缺陷发生率。根据我国卫生组织调查报道显示[4]：我国每年约有90万新生儿缺陷性疾病，包括：先天性心脏病，神经管畸形等，多与叶酸缺乏有关。亚甲基四氢叶酸还原酶、甲硫氨酸合成还原酶均为叶酸代谢中关键酶，其位点的变化会引起Hcy水平的变化，加强妊娠期叶酸补充有助于降低新生儿缺陷性疾病发生率，但是该结论有待验证[5]。为了探讨叶酸代谢相关基因及血清HCY检测在新生儿缺陷性疾病中的临床观察。取2015年4月-2017年4月医院进行检查的孕妇143例，报道如下。

1.资料与方法

1.1临床资料

取2015年4月-2017年4月医院进行检查的孕妇143例，根据检测结果分为未发现风险或低风险组和中、高度风险组。未发现风险或低风险组111例，年龄（19-42）岁，平均（31.24±3.94）岁，孕周（36-41）周，平均（37.46±3.21）周。中、高度风险组31例，年龄（20-43）岁，平均（30.98±3.98）岁，孕周（35+-42）周，平均（38.03±3.28）周。纳入标准：（1）均为到我院孕检并建册者；（2）双方夫妇均无家族遗传病史及明显解剖学遗传者。排除标准：（1）不符合纳入标准者；（2）资料不全或难以配合诊断、治疗者；（3）合并严重心、肝、肾功能异常及合并妊娠疾病者。本课题在伦理委员会批准、监督下进行，患者对治疗方法等知情同意。2组年龄、孕周比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

新生儿缺陷疾病风险初筛。①标本的采集。孕妇第一次孕检建册时采集患者口腔黏膜上皮组织进行MTHFR基因位点-C677T、A1298C；MTRR基因位点—A66G检测；同时，建册当天早晨空腹抽取3mL静脉血用于血清Hcy的检测。②基因检测。基因检测时利用Taqman-MGB技术完成MTHFR基因位点-C677T、A1298C；MTRR基因位点—A66G多态性检测，探针及有关试剂盒购置于美国ABI公司。同时，检测时分别对3个位点进行荧光定量PCR检测，每个反应体系体积为10uL（1ug浓度为20ng/mL的DNA模板，2×Taqman-MGB探针，3.5uL去离子水），设置反应条件，95℃下进行10min反应，然后进行20个循环扩增，92℃下15s；60℃下1min，循环完毕后再次进行30个循环，89℃下15s，60℃下90s。反应完毕后直接在荧光定量PCR仪上完成相关数据的读取，利用专业分析软件完成基因分型的确定。③Hcy检测。对采集的标本进行3min离心，速度为3000rpm，采用全自动生化分析仪根据酶循环法完成血清Hcy的检测，有关操作严格遵循试剂盒、仪器操作说明进行。（2）二次检测。根据检测结果分为未发现风险或低风险组（n=111例）和中、高度风险组（n=32例）。未发现风险或低风险组每天口服400ug叶酸，中、高度风险组每天口服800ug叶酸，连续服用到孕3个月，再次检测Hcy水平，检测方法同上[6-7]。

1.3观察指标

（1）叶酸代谢相关基因检测结果。观察入选孕妇MTHFR基因位点-C677T、A1298C；MTRR基因位点—A66G检测结果。（2）HCY水平。观察未发现风险或低风险组与中、高度风险组补充叶酸前、后Hcy水平情况。（3）新生儿缺陷性疾病发生率。观察未发现风险或低风险组与中、高度风险组神经管畸形、四肢畸形、先天性心脏病及唐氏综合征等新生儿缺陷性疾病发生率[8]。

1.4统计分析

采用SPSS18.0软件处理，计数资料行检验，采用n（%）表示，计量资料行t检验，采用（）表示，P<0.05差异有统计学意义。

2结果

2.1143例孕妇叶酸代谢相关基因检测结果

143例孕妇均获得叶酸代谢相关基因的检测，MTHFR基因位点-C677T主要集中在CC位点，占72.03%；A1298C主要集中在AA基因位点，占62.23%；MTRR基因位点—A66G则主要集中在AA位点，占60.14%，见表1。

3.讨论

新生儿缺陷性疾病是临床上常见的疾病，且随着人们生活环境的变化，导致疾病发生率呈上升趋势，严重影响我国新生儿出生质量。研究表明：高Hcy血症是引起新生儿缺陷性疾病的高危因素，由于Hcy具有毒性，过高的Hcy水平将会直接影响胎儿的发育，导致胎儿宫内生长迟缓，严重者甚至会造成胎死宫内。出现这种现象的原因是多方面的：（1）过高的Hcy水平将会增加机体内的氧自由基，诱导细胞发生凋亡，造成DNA损失；（2）过高的Hcy水平将会激活机体内的血小板水平，有助于血栓的形成，导致胎盘出现血管栓塞，导致胎儿的代谢产物难以及时排出。（3）过高的Hcy能增加神经管畸形及心脏病发生率，造成新生儿缺陷性疾病发生。研究表明：C677基因的CT杂合型突变或导致机体内酶活性下降，而TT纯合型突变或引起70，0%酶活性下降。本研究中，143例孕妇均获得叶酸代谢相关基因的检测，MTHFR基因位点-C677T主要集中在CC位点，占72.03%；A1298C主要集中在AA基因位点，占62.23%；MTRR基因位点—A66G则主要集中在AA位点，占60.14%。提示：叶酸代谢相关基因在新生儿缺陷性疾病的发生、发展中发挥了重要的作用，其可能与孕妇体内叶酸水平较低有关。通过筛查叶酸代谢相关基因能实现新生儿缺陷疾病的初次筛选，帮助患者早期确诊，为临床后续治疗提供依据和参考。

为了降低新生儿缺陷性疾病发生率，临床上主要让孕妇在孕3个月前补充叶酸。从大的角度来说，叶酸属于水溶性B族维生素中的一种，传统观点认为叶酸能参与造血，但是随着研究的不断深入，认为叶酸的缺乏与多种疾病有关，尤其是对孕妇和新生儿疾病有着密切的关系。通过补充叶酸能增加能激活MTHFR和MTRR叶酸酶活性，能促进Hcy向蛋氨酸转化，降低Hcy水平，提高临床效果。本研究中，2组补充叶酸后Hcy比较差异无统计学意义（P>0.05）；中、高度风险组叶酸补充前Hcy水平，高于未发现风险或低风险组（P<0.05）。提示：适当的补充叶酸有助于降低新生儿缺陷性疾病发生率，提高妊娠结局。但是，叶酸补充时不宜过量，如果过多的补充叶酸则会增加排卵次数，能增加多肽妊娠风险。国外学者研究显示：补充过多的叶酸会影响脂类代谢，导致机体血糖水平持续升高，容易增加动脉粥样硬化发生率。因此，孕妇补充叶酸时应根据每一位患者情况、叶酸的利用情况制定相应的治疗方法，避免盲目补充叶酸，且孕妇应完善相关检查，根据检查结果及时调整治疗方案，对于确诊为新生儿缺陷产妇告知其危害，必要时可以终止妊娠，提高我国出生人口质量。本研究中，中、高度风险组神经管畸形、四肢畸形、先天性心脏病及唐氏综合征发生率与未发现风险或低风险组比较差异无统计学意义（P>0.05）。提示：对于高危叶酸代谢相关基因患者经叶酸补充后新生儿缺陷性疾病发生率得到显著的降低。但是，孕妇在补充叶酸时可以动态监测加强叶酸代谢相关基因水平测定，了解孕妇叶酸吸收情况及补充情况，评估新生儿缺陷疾病发生率情况，使得孕妇的治疗更具针对性，提高妊娠结局。

综上所述，加强叶酸代谢相关基因及血清Hcy检测能评估新生儿缺陷疾病发生率，针对叶酸代谢相关基因检测中的中、高度风险组，每天口服800ug补充叶酸，有助于降低新生儿的出生缺陷发生率，值得推广应用。

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注：基金项目：河北省医学科学研究重点课题项目，（编号：ZL20140314）

通讯作者：魏海青，女，47岁，副教授，博士学位。