免疫组化技术、原位杂交技术检测尖锐湿疣结果对比分析

免疫组化技术、原位杂交技术检测尖锐湿疣结果对比分析

于兵兵刘艳峰胡延涛王建业

于兵兵刘艳峰胡延涛王建业

(河南平顶山解放军一五二中心医院病理科河南平顶山467000)

【摘要】目的：总结性探讨分析免疫组化技术、原位杂交技术在尖锐湿疣中的检测价值。方法：将110例门诊诊断为尖锐湿疣的蜡块进行连续切片，采用免疫组化技术和原位杂交技术对比染色，并在光镜下观察。结果：原位杂交92例表达HPVDNA阳性；免疫组化技术染色68例HPV多克隆抗体染色阳性，两者联合应用检测到104例呈阳性反应。结论：原位杂交技术的检测结果优于免疫组化技术，两者联合使用更加有利于尖锐湿疣的检测，使检测阳性率提高。

【关键词】免疫组化技术；原位杂交技术；尖锐湿疣

【中图分类号】R综合医学【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）22-0135-02

尖锐湿疣为一种性传播疾病，在临床工作中较为易见，其发病率近几年逐渐上升。此病的发生原因主要是由于人乳头瘤病毒感染[1]。人乳头瘤病毒感染后是否出现尖锐湿疣、病情的转归、发展与宿主的载量、病毒的型别、免疫功能的关系十分密切[2]。尖锐湿疣发病和复发或许和HPV的免疫逃逸以及宿主或者局部的细胞免疫功能低下相关。其病理诊断工作主要依靠免疫组化技术或者HE染色，然而尖锐湿疣的诊断工作有许多问题，免疫组化的阳性检测率低，HE切片典型（含血管丛、角化不全和挖空细胞），使尖锐湿疣和假性尖锐湿疣的区别难度更大[3]。本次临床研究将免疫组化技术和原位杂交技术同时运用于尖锐湿疣的检测中，取得了良好的成果，现报道如下.

1.资料与方法

1.1一般资料

本次临床研究的对象为110例尖锐湿疣患者，均为女性，年龄为21到53岁，病程10天到3个月，皮损都位于外阴部，大小为0.5厘米×0.3厘×0.2厘米～0.8厘×0.5厘米×0.5厘米，表面乳头样或者菜花样，固定组织时采用10%中性福尔马林，之后脱水、石蜡包埋、切片，切片的厚度为4微米，之后进行HE染色。捞于涂有多聚赖氨酸的玻片上，进行原位杂交技术和兔疫组化技术对比染色。

1.2试剂

HPV6B/11型单抗及检测试剂盒为福州迈新公司生产，HPV6B/11型基因探针和检测试剂盒均为DAKO基因公司生产。

1.3方法

1.3.1原位杂交技术：

操作步骤按照试剂盒进行，脱水操作时采用乙醇，采用微波炉煮杂交增效液半个小时，在95℃条件下滴加20微升探针液变性5min，95℃条件下孵育15h，蛋白封闭5分钟加一抗37℃冰湿盒孵育半个小时，洗涤，加二抗室温水湿盒孵育20分钟，洗涤，加HRP聚合物室温孵育半个小时，洗涤，采用DAB显色，采用苏木素复染，阴性对照是试剂盒配给。

1.3.2免疫组化技术：

首先将石蜡切片进行脱蜡，采用PBS洗涤3次，每次洗涤5分钟，之后进行抗原修复，即将切片置于盛有EDTA抗原修复液的高压锅中加热10分钟，之后自然冷却。切片上加0.3%双氧水，室温下孵育10分钟，阻断内源性过氧化物酶，采用PBS洗涤3次，每次洗涤5分钟，滴加一抗37度孵育一小时，采用PBS洗涤3次，每次洗涤5分钟，切片加生物素标记的二抗37℃孵育15分钟，采用PBS洗涤3次，每次洗涤5分钟，采用DAB显色，时间为3到5分钟，脱水时采用常规操作，透明封片。

1.4结果判定

评估时采取双盲法，免疫组化技术的阳性反应为细胞核出现棕黄色细颗粒，原位杂交的阳性反应为出现紫蓝色沉淀。

1.5统计学方法

本次临床研究的所有计量资料、计数资料分别使用t检验、卡方检验，标准统计学分析采用SPSS13.0，以P＜O.O5为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1两种检测方法检测结果对比

原位杂交92例表达HPVDNA阳性；免疫组化技术染色68例HPV多克隆抗体染色阳性，两者的差异较为明显（P＜0.05）；详见表1。

3.讨论

性接触为尖锐湿疣的主要传播途径，非性接触的感染而发病的人数很少，赘生性皮损、黏膜出现良性疣状增生、局部皮肤出现良性疣状增生是其主要的临床表现[4]。其病原体为HPV，是一种双链环状DNA，人是其唯一的宿主，主要侵犯黏膜和皮肤[5]。尖锐湿疣的发病因素主要有：机体局部和全身的免疫状态、免疫分子如Toll样受体的表达变化、自然杀伤细胞的免疫活性降低、非特异性免疫细胞抗原提呈能力的下降、T淋巴细胞亚群的数量和功能异常以及特异性免疫中的细胞免疫功能低下等[6]。

本次临床研究将原位杂交技术和免疫组化技术同时运用于尖锐湿疣的检测中，其中原位杂交技术的探针仅和靶基因根据碱基配对原则进行杂交。探针靶核酸的结合力比抗原抗体的亲和力更强，降低了假阳性和假阴性的发生率。组织被福尔马林固定，然而蛋白交联并不会发生，对mRNA蛋白质和DNA造成的影响很小。免疫组化技术中，因为福尔马林的影响蛋白交联的情况易发生，对实验造成的影响较大。此外，原位杂交安全、操作方便、耗时少。原位杂交检测对病毒的定位清晰，阳性物质位于角化不全的角质层、棘层的挖空细胞、表皮浅层；免疫组化检测阳性颗粒大多数位于表皮浅层的细胞核内，有些位于棘层中下部，少数位于角化不全的角质层和基底细胞层；较免疫组化方法，原杂交技术便于诊断，灵敏度高，特异性好[7-8]。

结合本次临床研究的结果，原位杂交92例表达HPVDNA阳性；免疫组化技术染色68例HPV多克隆抗体染色阳性，可知原位杂交的检测阳性率更高，此外，免疫杂交技术和原位杂交技术联用于尖锐湿疣的检测使检测阳性率较原位杂交的更高，所以尖锐湿疣的检测可以将两者联用，使检测阳性率更高。

综上所述，原位杂交技术的检测结果优于免疫组化技术，两者联合使用更加有利于尖锐湿疣的检测，使检测准确率提高。

【参考文献】

[1]邹长招.妇产科尖锐湿疣的诊断与治疗探讨[J].当代医学,2012，18(22)：107-108.

[2]郝世辉.妇产科尖锐湿疣临床诊断及治疗效果探析[J].当代医学,2012，18(17)：87-88.

[3]王文格,郑玲玲,孙铮.尖锐湿疣67例HPV分型分析[J].中国性科学,2013，22(02)：53-55.

[4]朱伟,曹萍.尖锐湿疣的研究进展[J].皮肤病与性病,2014,36(06):327-330.

[5]何丹华,李其林,黄永华等.尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒亚型与细胞免疫功能的相关性[J].广东医学,2012,33(13):1914-1916.

[6]HarredJF,KnightAR,McIntyreJS.Inventors.Dowchemicalcampany,assigneeeXpoXidationprocess.USPatent3.2014，3（17）.1927～1904.

[7]解方,李承新.尖锐湿疣免疫学发病机制研究进展[J].传染病信息,2015,28(03):175-178.

[8]陈珏.原位杂交和免疫组化技术检测尖锐湿疣的比较[J].中国皮肤性病学杂志,2010,24(09):869-870.