浅谈手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存

浅谈手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存

梁瑞萍

梁瑞萍

（阳泉市中心血站山西阳泉045000）

【摘要】目的：探讨血小板输注治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血。方法：目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分。结果；利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用。结论：本站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，取得了很好的临床效果

【关键词】浓缩血小板深低温保存

【中图分类号】R457【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）12-0072-01

血小板输注是治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血的有效治疗手段。目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分，利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用，避免资源浪费，还可减少悬浮红细胞保存过程中白细胞-血小板微聚物的形成，降低受血者发生血管栓塞的危险，减少非溶血性反应的发生。手工浓缩血小板多人份输注容易引起同种免疫反应而导致输注无效，其主要原因为HLA抗体引起，其次为HPA抗体，去除手工浓缩血小板中的白细胞就可减少输血反应和最大限度地避免同种免疫的发生。我站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，同时制备冰冻汇集滤白混合血小板，储存备用，用于急诊和手术出血患者，取得了很好的临床效果，现将方法报告如下：

1材料与方法

1.1材料采集于五联袋6小时内22±2℃保存的全血400ml；血小板汇集滤除白细胞输血器：南京双威生物医学科技有限公司提供；二甲基亚砜（DMSO）：广东新普公司提供。

1.2仪器设备Cyrofuge6000i大容量冷冻离心机（德国）血小板保存箱；速冻冰箱；海尔-80℃超低温冰箱；冰冻解冻箱；kjx-lA/CD-DR解冻箱（苏州医用仪器厂）血球计数仪；希斯美康XT-1800i血球计数仪(日本)

1.3浓缩血小板的制备：采用富浆法。

1.3.1第一次离心：400ml全血离心力850g、加速度9、减速度4、温度20℃-24℃、时间8分钟。

1.3.2全血装杯时要在杯内填塞些空袋，注意血袋不能打折，以防止离心后红细胞挂壁而造成血浆中混入红细胞超标。最佳离心效果以离心后上层血浆无肉眼可见的红细胞，血浆与红细胞分层清晰并无明显白膜层为佳。如果离心效果不理想可混匀后再次离心。使用分浆夹分离时主袋上的易折塞只开一半待血浆分出2/3后继续减慢速度，以上层血浆分干净且无红细胞混入为标准。使用成分分离机分离时速度均匀效果优于分浆夹。

1.3.3第二次离心：以离心力2990g、加速度9、减速度4、温度20℃-24℃、时间10分钟。2单位血小板留浆30-45ml。

1.3.4血小板解聚：分离好的浓缩血小板放置室温静置1小时，待血小板完全解聚后放入血小板保存箱保存。

1.4汇集滤白血小板的制备：

1.4.1挑选检验结果合格的血小板，外观无肉眼可见的红细胞，解聚完全无细小颗粒呈云雾状，每14单位为一个汇集量，容量为280-300ml,血小板计数＞2.5×1011。

1.4.2用无菌接管机将单袋浓缩血小板汇集到汇集过滤器材的空袋中，如果感觉外观发红，可用轻离心将红细胞再次去除。然后将汇集袋挂在架子上，先将滤盘倒置再打开滑轮待滤盘内充满液体后再将滤盘翻转，调节流速为点线状过滤白细胞。过滤完成后热合。如果临床需要新鲜血小板即可发往临床，如需保存可按照下面的方法进行制备。

1.5冰冻汇集滤白血小板

1.5.1DMSO保护剂的加入将制备完成的汇集滤白血小板称重，去皮，按照5%的比例计算出需加入DNSO的量，在百级净化间内或超净台内采用无菌技术，用一次性注射器抽出DMSO备用，然后采用无菌技术将血小板袋与一次性延长管连接，再连接注射器，将注射器安装在滴定仪上，设定速度为每分钟1ml，血小板袋放在摇床上，设定速度每分钟50次，开启滴定仪、摇床。加药后产品终浓度为5%，血小板袋温度应无明显变化。

1.5.2低温保存将加好DMSO的汇集滤白血小板装盒后直接放入-80℃冰冻保存。要单层放置，不能叠放。

1.5.3解冻使用前把冰冻汇集滤白血小板从深低温冰箱中取出，在37℃循环水浴箱中解冻，解冻时要轻轻摇动血小板袋。

1.5.4解冻后外观检查应为淡黄色均匀混悬的液体，有炫光性，无絮状物和细丝为合格，可发往临床。

2计数

随机抽取30袋（14u/袋）汇集血小板，将滤白前、滤白后和解冻后样品用全自动血液细胞分析仪进行计数，结果如下:

表130份WBC.RBC.PLT计数结果平均值及回收率计算：

滤白前滤白后解冻后

残留白细胞WBC(109/袋)0.04±0.140.03±0.12

残留红细RBC(109/袋)10.6±0.229.6±0.21

血小板计数PLT(1011/袋)3.54±0.613.25±0.582.96±0.52

血小板回收率（%）91.7%90.5%

白细胞去除率（%）93%

3讨论

3.1滤白后每袋血小板残留白细胞计数均值为1.26*107远低于机采血小板标准[3]，平均去除率为93%，血小板计数均值为3.25×1011个，远高于一个治疗量的机采血小板标准[3]，平均回收率为91.7%。

3.2汇集袋中残留红细胞平均为9.6×109个，符合浓缩血小板标准，略高于机采血小板标准[3]全血及成分血质量要求GB18469—2012。

3.3冰冻袋中汇集血小板解冻后血小板的计数均值为2.96×1011平均回收率为90.5%。

3.4结果表明每个治疗量（16u/袋）手工血小板汇集后，采用血小板专用滤白滤器进行滤白效果良好，在提高治疗效果的同时减少了输血不良反应，最大限度的避免同种免疫的发生，也减轻了患者的负担，同时利用了现有的血液资源，缓解了血小板供需紧张。

4科学合理输注

新鲜血小板保存期短，制备不及时，但输后计数提升效果优于冰冻血小板[4]。较适合需长期预防性输注血小板患者；冰冻血小板保存期长且冰冻血小板的临床止血效果优于新鲜血小板，适用于血小板减少或功能障碍引起出血患者的止血，特别是假期急诊以及创伤和外科手术出血患者的抢救。

参考文献

[1]临床输血与检验2008年10月第10卷第4期.

[2]虞容，单筠，何吉等。血小板输注无效患者的血小板抗体分析。上海医学检验杂志2003年第18卷第2期：111）.

[3]全血及成分血质量要求GB18469—2012.

[4]于洋，刘景汉低温保存血小板基础与应用研究进展.中国输血杂志2003年12月第16卷第6期：433.