药品检验用菌种保藏方法及其应用探讨

药品检验用菌种保藏方法及其应用探讨

郑文吉

郑文吉

（兴安盟食品药品检验检测中心；内蒙兴安盟137400）

【摘要】：药品检验用菌种保藏方法是微生物生产过程中的一个重要因素，由于微生物具有新陈代谢的作用，因此，国家有关药品检验部门在菌种的存储上高度重视，研究出一套适应微生物发展的方法。

【关键词】药品检验；菌种；保藏方法

【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2019）01-0164-01

菌种作为微生物行走于人们生活当中，由于菌种新陈代谢快，不利于存储，因此，菌种的存在就只能是属季节性的东西，但是现在，伴随着经济社会的发展，科技也在不断进步，因此，国家便借助这一优势特点，在菌种的保藏上投入大量的资金进行研究，目的是为找到真正适应菌种长时间生存的存储方法。

一、药品检验用菌种保藏方法

（一）传代培养保藏法。又称定期移植保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等，是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待菌种生长完全后，通常置于4℃～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。如牙裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等。

（二）冷冻干燥保藏。主要是培育好的菌种防止于冷冻柜或者是低温环境下，使之能够达到冷冻效果的环境中。其过程主要是以下几点：1.准备菌种，保证菌种的质量及可操作性，因为用冷冻干燥法保藏的菌种，保藏周期长，因此，以防多年后不出差错，所用菌种都要特别注意其纯度，不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10天。2.制备菌悬液与分装。案例：细菌斜面，用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中，制成浓菌液，每支安瓿管分装0．2ml，然后将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2>）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻4—5分钟，即可使悬液结冰。当然，这种方法作为菌种保藏方法之一，其具有很强的操控性及使用性，且对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，同时对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。

（三）定期移植法。主要是将菌种接种于所要求的培养基上﹐在最适温度中培养﹐至静止期或产生成熟的孢子时﹐置入5℃的冰箱(或冰库)保存。在培养和保存的过程中﹐由于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件﹐结果菌落群体中的个体就不断衰老和死亡﹐因此每5~15天或1~4个月就需重新移植一次﹐具体间隔时间因种而异，并且人工培养的微生物适用于此法。例如，黑木耳食用菌的栽培，传统的黑木耳菌种生产是在试管母种培养的基础上扩大繁殖到菌包原种。母种所采用的试管为一端开口，培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA);原种培养基以木屑为主料，在菌种扩繁时，就需要通过接种针截取一部分母种菌丝体移植到原种木屑培养基。但是居于此种方法存在耗时费力的特点，因此，不是很受欢迎，正所谓“具体问题具体分析”，这种方法在菌种的储存中也占有重要比例，是一些特殊性菌种保藏的有效途径之一。

（四）矿油封藏法。将液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌﹐放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分﹐然后注入斜面培养物中﹐使液面高出斜面约1厘米，将试管直立﹐放在15~20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体﹐既能隔绝空气﹐又能防止培养基因水分蒸发而干燥﹐可以延长菌种保藏的时间，但注入的液体必须不与培养基混溶﹑对菌种无毒﹐不易被利用和挥发。例如，酵母菌﹑芽孢杆菌。

二、药品检验用菌种保藏方法在生活中的应用

（一）应用于医院领域。传代培养在口腔医院上的应用，随着社会的不断发展，尽管人们已经能够重新构建牙冠结构，然而重新构建结构复杂的牙根始终是不少科研人员的终极梦想。案例：第四军医大学口腔医院文玲英教授等在一项国家自然科学基金资助课题中，培养出了纯化的牙囊细胞，尽管这离重新构建牙根还有很长的距离，但毕竟又向前迈了一步，且牙囊是牙胚的重要组成部分，随着牙齿的发育，由它分化的细胞形成牙骨质、牙周膜和部分牙槽骨，换句话说，由牙囊发育的组织结构主要负责将牙齿固定在牙槽骨上。另外在牙齿萌出的过程中，牙囊细胞还可能通过对一些细胞和因子进行调控，促进牙齿的顺利萌出。案例表明，医院领域也离不开药品检验用菌种的保藏，只有充分利用好这些菌种保藏方法，医学领域的发展才能稳步前行。

（二）应用于生活。例如，黑木耳的栽培，黑木耳的栽培便是应用了药品检验用菌种保藏方法中的“定期移植法”，将这一方法应用于食用菌黑木耳的栽培上，既能够方便种植户栽培黑木耳，同时对菌种也能起到很好的保护作用。例如，种植户想要种植大面积的黑木耳，但是又担心会因为存储不当从而造成经济损失。居于此，我们就可以看到菌种保藏方法的重要性。如，曾经有一个乡镇，他们在产业的布局上就引进大量的大球盖菇、猴头菇来种植，菌包多达几百上千，大球盖菇种植有几十上百亩，因为有得天独厚的地理优势，一段时间下来，食用菌长势喜人，营养价值极高，但是这种菌种也有一个缺陷，成熟周期短，一经成熟，不及时销售的话就会烂在地里，有些更甚于还会长蛆。但是，如果能够完善保存方法，那么就可以食用菌长时间储存下来，方便人们食用，同时，种植户也能够大规模的种植。

（三）应用于实验室。众所周知，实验室里保存着大量的菌种，并且很多的菌种都会对人身体造成影响，如果没有对菌种实行严格的储藏和管理，就会导致一些极易挥发性的菌种肆意乱窜，从而危害人类人体健康。因此，实验室里对菌种的保藏要求就很高，比如，一些菌种需要冷藏、一些需要真空储藏等等。例如：肠道杆菌选用的生化反应有五糖管发酵试验、靛基质试验、动力试验；葡萄球菌可选用触酶试验、血浆凝固酶试验；新城鸡瘟病毒选用血凝、血抑试验等等。在这些实验当中，实验室就会根据不同的菌中选择保藏方法。

（四）应用于工业发展过程中。工业发展中，对菌种的贮藏最常见的就是冷冻，因为很多的工业化学物品是需要长期处于低温的环境之中，因此，我们可以看到，在一些大型的工厂，物质库里都会陈列有大大小小参差不齐的冷冻柜，这些柜子的作用主要是对工业发展过程中一些化学药品的存放。例如，制冷剂。近年随着国家制造业不断发展，加之市场竞争激烈对产品质量的要求亦有较大程度的提高。因而，在提高产品的过程中，厂家往往无视了一个细微而主要的因素。在消耗过程中，由于机械、模具及工业反应始终发作热量，当温度逾越物料之遭遇程度产品质量就不稳定，以塑料产品和电镀消耗为例。塑料产品消耗中冷却时间占全周期80%以上，由此可见，冷藏水能及时吸收热量，使模腔温度快速降落，加速产品定型，延伸开面。电镀消耗中冷藏水能将电镀溶液温度降落并将温度恒定在某一范围内，使金属分子随着稳定电流快速附向镀件外表，使产品平滑和密度增加。由此得出，药品检验用菌种保藏方法不仅对人们的生活产生影响，同时在工业的发展过程中也起到了一定的促进作用。

总而言之，药品检验用菌种保藏方法在生活占有重要比重，国家相关部门应高度引起重视，使药品检验用菌种保藏方法能够在实践中得到广泛利用。

参考文献：

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