QIAxcel毛细管电泳与常规琼脂糖凝胶电泳比较分析的研究

QIAxcel毛细管电泳与常规琼脂糖凝胶电泳比较分析的研究

李欣薛婧旎唐益明乔雪飞陆晓红杨丽华

李欣薛婧旎唐益明乔雪飞陆晓红杨丽华

（上海市松江区疾病预防控制中心201620）

【摘要】目的：比较QIAxcel凝胶电泳与常规琼脂糖凝胶电泳两种方法的优势。方法：采集疑似手足口病患者的咽拭子50例，提取RNA，RT-PCR扩增EV71，产物分别用两种电泳方法观察结果，最后经RealTimeRT-PCR验证。结果：50例标本中QIAxcel凝胶电泳结果显示24例为阳性，阳性率为48%，常规琼脂糖凝胶电泳结果15例为阳性，阳性率为30%；阳性结果RealTimeRT-PCR验证也均为阳性。结论：QIAxcel凝胶电泳比常规琼脂糖凝胶电泳具有更高的灵敏度，且QIAxcel系统所具有的方便性和快速分析适合病原微生物检测。

【关键词】QIAxcel电泳琼脂糖凝胶电泳

【中图分类号】R332【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）16-0140-01

QIAxcel毛细管凝胶电泳仪是一台DNA/RNA的快速分析系统，通过虹吸作用进样，在具有特殊凝胶介质中通过毛细管电泳的原理[1]自动进行分离检测、分析结果；常规琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质，通过电荷效应和分子筛效应进行样品分离，再染色拍照分析结果。本文旨在分析两种电泳的优势，为实验室病原微生物的检测方法提供理论依据。

1材料和方法

1.1材料

1.1.150例咽拭子标本来源于上海市松江区中心医院幼儿疑似手足口病患者。

1.1.2核酸提取试剂盒HighPureViralRNAKit购于QIAGEN公司

1.1.3核酸检测试剂盒肠道病毒EV71荧光PCR检测试剂盒购自上海之江生物技术有限公司，RT-PCR检测试剂盒购自QIAGEN公司，EV71特异性引物由上海生工有限公司合成

1.2仪器

1.2.1ABI7500RealTime实时荧光PCR仪和RT_PCR扩增仪购自lifetech公司

1.2.2QIAcub核酸自动提取仪购自QIAGEN公司

1.2.3电泳仪购自北京六一仪器厂，凝胶成像系统购自美国伯乐公司

1.3方法

1.3.1逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）用EV71特异性引物分别对标本RNA进行RT-PCR反应。反应条件设为；第1步：病毒RNA经AMV逆转录酶50℃反转录30min；94℃变性3min，1个循环；第2步：92℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，40个循环；第3步：72℃延伸5min，1个循环[2]。所用引物序列如下：EV71-1：5'-GTCCTTAATTCGCACAGCACAGCT-3'；EV71-2：5'-CGGTCCGCACTGAGAATGTACCCAT-3',扩增产物为341bp。RealTimeRT-PCR检测方法按照试剂盒说明操作。

1.3.2电泳

1.3.2.1RT-PCR产物先用1×TAE电泳缓冲液制备2.5%的琼脂糖凝胶进行电泳，100V电压，电泳30～40min。用凝胶成像系统分析相应PCR产物的条带并记录。

1.3.2.2RT-PCR产物再用QIAxcel毛细管凝胶电泳，直接观察EV71特异性条带。

2结果

2.150例标本的RT-PCR产物，QIAxcel毛细管凝胶电泳结果显示24例为阳性，阳性率为48%（24/50），电泳结果见图1；常规琼脂糖凝胶电泳结果有15例为阳性，阳性率为30%（15/50），电泳结果见图2。

2.2常规琼脂糖凝胶电泳15例阳性均与QIAxcel毛细管凝胶电泳结果一致，经Real_TimeRT_PCR验证均为阳性；其中9例常规琼脂糖凝胶电泳结果为阴性，而QIAxcel毛细管凝胶电泳结果为阳性，经Real_TimeRT_PCR扩增，9例也均为阳性。

图1QIAxcel毛细管凝胶电泳结果图2常规琼脂糖凝胶电泳结果

3讨论

通过RT-PCR法检测50例咽拭子标本的EV71，分别用QIAxcel毛细管凝胶电泳与常规琼脂糖凝胶电泳两种方法读取电泳结果，二者阳性率分别为48%和30%，说明QIAxcel毛细管凝胶电泳敏感度更高。另外琼脂糖凝胶电泳需要配胶，制胶，插上胶梳，并检查正负极，且观察结果需要染色；而QIAxcel毛细管电泳仪，将样品管放入仪器后，几分钟内便获得高分辨率的电泳结果。因此，QIAxcel毛细管凝胶电泳不仅有更高的灵敏度，而且使实验流程更加流畅，更加省时，为实验室检测提供一种更为敏感快速方便的方法。

参考文献

[1]宿振国,周玉明,高梅兰,宋向芹.高效毛细管电泳的临床应用[J].国际检验医学杂志,2011,32(10):1083-1084

[2]陈应坚,李水明,徐亚军.应用荧光定量PCR技术检测肠道病毒71型[J].现代预防医学,2010,37(2):339-352

基金项目:上海市松江区医学重点学科建设项目—病原微生物检验科（2013XK09）