三种抗-HCVELISA检测试剂的评价

三种抗-HCVELISA检测试剂的评价

陈慧，胡文佳，蒋昵真，朱绍汶

江苏省血液中心江苏南京210042

摘要：目的：评价三种常用厂家抗-HCV酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂灵敏度和特异性结果分析，为本实验室ELISA试剂选择提供依据。方法：将24例HCV确证阳性标本、48例HCV阴性标本及177例抗-HCV单试剂反应性标本，用三家试剂检测，计算各试剂对阳性标本和阴性标本的灵敏度、特异性，确定不同浓度阳性标本抗-HCV检测最高稀释滴度，并对检测弱阳性标本时的非特异性进行评价。结果：三种长家的试剂对阳性标本的检测灵敏度均为100%，万泰、丽珠试剂特异性为100%，新创试剂特异性为97.9%。对倍比稀释中等强度的阳性血清进行检测，万泰、丽珠试剂在1：512能检出，新创试剂在1：128时检出；177例核酸阴性，酶免单试剂阳性标本，新创试剂假阳性率最高，达85.71%，万泰试剂假阳性率最低，为3.95%，丽珠试剂假阳性率为7.91%。结论：经综合评估，本实验室对抗-HCV的ELISA检测应选用特异性和灵敏度都较好的万泰、丽珠试剂，而不应选用假阳性率较高的试剂。

关键词：抗-HCVELISA试剂评价

丙型肝炎病毒（HCV）是引起丙型肝炎疾病的一种经血传播的病毒，其重要的传播途径之一是输血传播〔１〕。为保障临床血液的安全，避免输血传播丙型肝炎，２０１5版《血站技术操作规程》〔2〕要求使用２种不同的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂检测HCV抗体（抗-HCV），同时建议进行核酸HCV-RNA的检测。吴中华等[3-4]对不同厂家EILSA试剂进行了比较发现他们的检测结果还是有较大的差异性。为了选择更适合本实验血液检测的试剂提供科学依据，我们对三家酶免试剂盒进行进行实验评价。

1材料与方法

1.1材料

（1）经过RIBA确认过的24例阳性和48例阴性无偿献血者血液标本。（2）2015年5月到2017年7月177例无偿献血者核酸阴性酶免HCV单试剂反应性的血液样本。所有样本均按常规采血、分离血清,置-20℃以下冻存。

1.2试剂和仪器

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)分别来源于北京万泰生物科技有限公司,批号CS20170908;厦门英科新创科技有限公司,批号2016115825;珠海丽珠科技有限公司,批号2017071108。全自动加样仪（MICROLASSTAR8CH，瑞士Hamilton公司），全自动酶免仪（FAME24/30,瑞士Hamilton公司）。RNA检测试剂来源于瑞士罗氏公司。

1.3方法

1.3.1ELISA抗-HCV检测新创和丽珠采用ELISA间接法,万泰（四代）试剂采用双抗原夹心法，三种试剂均严格参照试剂说明进行操作。从24例阳性标本中选择3例S/CO高值（S/CO20）、中值（S/CO为15.9）、低值（S/CO为9.94）的阳性标本，再由高到低进行倍比稀释，观察不同稀释滴度各试剂的检出情况。

1.3.2HCVRNA检测采用COBAS系统进行(HCVRNA)检测,具体操作参照试剂说明。

2.结果

2.1如表1，24例阳性标本三种厂家的试剂均能检出；而48例阴性标本，仅新创试剂检出

一例反应性标本，其S/CO值为1.46。3种试剂对阳性标本的灵敏度100%；而三种试剂的特异性，万泰和丽珠试剂为100%，新创试剂为97.9%，略低于其他两种试剂。

2.23例阳性的标本倍比稀释后结果如表2所示，1号标本S/CO值＞20，倍比稀释到2048倍后均能检出，2号标本S/CO值为15.9，倍比稀释1：512时，B试剂检测不出，到1：2048时，三种试剂均检测不出，3号标本S/CO值9.94，在1：256时，B试剂检测不出，在1：512时均检测不出。

2.3177例单试剂反应标本经核酸检测均为阴性。新创试剂检出156例有反应性标本，S/CO值大多集中在0.53~1.79之间。S/CO值在1.0时，三种试剂共检出92例，占51.97%（92/177），S/CO值在1.0~2.0之间的共检出61例，占34.46%（61/177），S/CO值2.0三种试剂共检出24例，占13.56%。

3讨论

HCV为正单链RNA病毒，可经过血液体液传播引起丙型病毒性肝炎。有关调查研究显示输血量越大,感染HCV的危险性就随之增大。自1993年年开始对血液抗-HCV进行检测后，献血者经筛查抗-HCV,使输血后丙肝有了明显下降。目前采供血机构血源筛查抗-HCV有间接法和双抗原夹心法，但都存在着一定的漏检和假阳性。因此为进一步保证血液检测的安全准确，更好的提高HCV检出的灵敏度，减少漏检，同时要兼顾试剂的特异性，减少假阳性的发生，避免血液资源的浪费和献血者的流失。

从本实验结果可知，三种酶免厂家抗-HCV试剂检测的灵敏度和特异性均符合国家标准，但在假阳性检测方面，新创的假阳性率明显高于其他两家试剂，本实验结果与张艳梅等报道的结果较为一致。熊丽红等对三代和四代ELISA试剂检测抗-HCV比较发现采用双抗原夹心法的四代试剂灵敏度高于三代试剂，HeJ等通过实验发现双抗原夹心法检测抗-HCV所产生的灰区和假阳性标本大幅度减少。究其原因，可能是四代试剂是多表位HCV嵌合抗原（RHCV-NS4-C-NS3-NS5）包被微孔酶联板，既能检测IgG,又能检测IgM，其加样量为50ul，相比之下加样量更为准确，本实验3也显示3例阳性标本经过倍比稀释到1：512时四代万泰试剂仍均能检出。而新创和丽珠三代试剂则略低于四代万泰。本次实验的177例无偿献血者酶免单试剂反应标本，未必就是假阳性，需进一步确认。优于免疫重组印迹确认实验试剂价格昂贵，考虑经济原因，177例标本未做确证实验。

本实验室目前采用的血液筛查方式是两遍酶免和一遍核酸检测，明显缩短了HCV检测的窗口期，然而酶免与核酸联合检测，是互补检测，不能替代。为提高检测功效，尽量减少血液因假阳性导致的报废，我们应该综合考虑，选择灵敏度和特异性较高的试剂用于酶免检测。

参考文献

[1]VerbeeckJ,MassP,LemeyP,etal.InvestigatingtheoriginandspreadofhepatitisCvimsgenotype5a[J].Virol,2006,80:4220-4226.

[2]国家卫生和计划生育委员会.血站技术操作规程（2015版）.国卫医发[2015]183号.

[3]吴中华,徐琦,罗鹏,等.用不同厂家ELISA试剂检测抗HCV结果的差异性分析[J].检验医学,2007,22[5]:561-563.

[4]胡翠华,李金明,王露楠,等.用不同的ELISA试剂盒检测抗-HCV弱阳性血清标本的结果分析[J].实用肝脏病杂志,2004,7(3):148-150.