TMTP1-DKK治疗高转移宫颈癌的应用价值研究

TMTP1-DKK治疗高转移宫颈癌的应用价值研究

杨丹丹

（山西医科大学第二临床附属医院妇产科山西太原030001）

【摘要】目的：探讨TMTP1-DKK对高转移宫颈癌的治疗价值。方法：用药物TMTP1-DKK（实验组）和TMTP1-VK（对照组）分别处理高转移宫颈癌细胞系SiHa，CCK8检测两种药物处理后对SiHa细胞的杀伤率，Transewell检测两种药物处理后对SiHa细胞侵袭能力的影响。结果：TMTP1-DKK对SiHa细胞的杀伤率及对SiHa细胞的抑制作用均高于TMTP1-VK，差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论：TMTP1-DKK能特异性地杀伤高侵袭能力的宫颈癌细胞SiHa并可显著降低其侵袭能力，提示TMTP1-DKK可以作为靶向化疗药物治疗高转移宫颈癌。

【关键词】TMTP1-DKK；宫颈癌；肿瘤转移

【中图分类号】R737.3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）04-0287-02

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率仅次于乳腺癌，并呈逐渐年轻化的趋势[1]。近年来，肿瘤靶向治疗发展迅速，如小分子抑制剂、单克隆抗体和小分子多肽。本研究选用两种靶向药物TMTP1-DKK[TMTP1和D(KLAKLAK)2偶联]和TMTP1-VK[对照肽为错构肽和D(KLAKLAK)2偶联]分别处理高转移宫颈癌细胞系SiHa，观察TMTP1-DKK对高转移宫颈癌的治疗价值。现报告如下：

1.资料与方法

1.1一般资料

①仪器：全波段酶标仪(美国Bio-tek公司)；相差显微镜(日本Olympus公司)；细胞培养箱(美国Termo公司)。②试剂：FITC-TMTP1-DKK、FITC-TMTP1-VK(西安华辰公司)；CCK-8(日本Dojindo公司)；SiHa宫颈癌细胞系(美国ATCC公司)；Transewell小室(美国Cor-ning公司)；DMEM培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(中国四季青公司)。③选择宫颈癌细胞系SiHa为处理对象，经Transwell试验证实其高转移能力并用Rhodamine标记TMTP1，经免疫荧光检测证实Rhodamine-TMTP对SiHa的亲和能力高。

1.2方法

1.2.1细胞培养与处理SiHa细胞使用高糖DMEM完全培养基（添加10%胎牛血清），于37℃、C02浓度5%、相对湿度50%的细胞培养箱内培养，细胞融合率达90%时用0.25%胰蛋白酶～0.02％EDTA工作液消化分散细胞，以进行下一步实验，并分为实验组和对照组两组。

1.2.2CCK8法测两种药物对SiHa细胞的杀伤率将SiHa单细胞悬液以每孔100μL（约5000个细胞）的量接种于96孔板（边缘用PBS添空），贴壁培养1d后更换培养基，每孔加入含有5、10、20、40、80μM的TMTP1-DKK和TMTP1-VK的DMEM培养基100μL（每组浓度做3个平行实验并设置空白对照组)，于37℃、5%CO2浓度培养箱中培养24h后加入Cellcount-ingkit-8继续培养2h,用酶标仪测定450nm处的吸光度值，生长抑制率(IR)=[(对照组一实验组)/对照孔]×100%。

1.2.3Transewell法检测两种药物对SiHa细胞侵袭能力的影响将经低浓度的两种药物（即对SiHa无增殖抑制）处理后的细胞及未经处理的SiHa细胞种于Transwell室中，于37℃恒温培养箱中培养24h后随机选取5个视野计数。

1.3观察指标

通过实验测定两种药物对SiHa细胞的杀伤率及侵袭能力的影响。

1.4统计学方法

采用SPSS18.0统计学软件处理数据，采用均数±标准差(％)表示计量资料，计量资料两样本之间比较用t检验；计数资料采用%表示，χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1CCK8法测两种药物对SiHa细胞的杀伤率

两种药物在5、10、20μM浓度时对SiHa的杀伤无差异性，在浓度为40、60、80μM时，TMTP1-DKK对SiHa有抑制增殖作用(P＜0.05)，对照组对SiHa杀伤无差异性（P＞0.05）。见表1。

注：两组比较差异具有统计学意义(P*＜0.05)。

3.分析

宫颈癌是亚洲女性发生率中仅次于乳腺癌的恶性肿瘤，世界卫生组织公布，宫颈癌是唯一有希望被消灭的恶性肿瘤[2]。宫颈癌患者死亡率较高的重要原因为肿瘤的复发与转移,肿瘤转移是指肿瘤细胞经过多个步骤在原发部位的远区组织或器官继续生长的过程[3]。治疗宫颈癌的方法主要有手术、放疗和化疗等综合应用，但宫颈癌的治疗尚缺乏专一有效的方法，而目前分子靶向治疗己成为恶性肿瘤的治疗手段之一，并有望成为治疗宫颈癌的重要方法。

最近发现一些新型多肽不仅能够特异性地穿透肿瘤细胞及相关的内皮细胞，还可以通过与脂质体、微胶粒及树枝状大分子作用将药物靶向癌细胞以提高药物疗效[4]。TMTPl可结合高转移肿瘤细胞的能力已经被相关实验证实，因此TMTPl已成为构建有效治疗药物的理想靶向分子。抗微生物多肽D(KLAKLAK)2与促凋亡的抗微生物肽结构相似，且能在真核细胞外保持相对的无毒性，与其他的靶向肽相偶联后，可诱导线粒体肿胀，促进细胞的凋亡。

本实验结果显示TMTP1-DKK对高转移能力的宫颈癌细胞有特异性的靶向杀伤效应，并可以显著抑制癌细胞的侵袭，在临床应用上可以联合化疗药物，增强药物对转移肿瘤的杀伤。

综上所述，TMTP1-DKK能特异性地杀伤高转移宫颈癌细胞并可抑制癌细胞的扩散，提示TMTP1-DKK对高转移宫颈癌具有相当的应用价值。

【参考文献】

[1]王楠，马蓉，吴建中.宫颈癌的发病机制、诊断及治疗进展[J].中国肿瘤外科杂志，2013，05(02):121-124.

[2]李赛.2000-2009年浙江地区宫颈癌临床病理特征与治疗现状的研究[D].浙江大学，2014.

[3]姜兆静.miR-218抑制宫颈癌细胞EMT、侵袭迁移及其机制研究[D].南方医科大学，2015.

[4]魏睿，李飞，张振中.新型肿瘤靶向药物TMTP1-DKK应用于宫颈癌治疗的初步研究[J].实用药物与临床，2015，18(01):1-5.