血小板相关抗体的检验

血小板相关抗体的检验

孙晓春李娟（黑龙江省虎林市人民医院158400）

血小板相关抗体的检验

孙晓春李娟（黑龙江省虎林市人民医院158400）

【中图分类号】R558【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)21-0212-01

【摘要】目的探讨血小板相关抗体(PAIg)检测的临床意义.方法研究近年来我科进行的血浆凝血酶原时间测定报告。结论PAIg检测有助于ITP的诊断、选择最佳治疗方案并判断疗效.

【关键词】血小板相关抗体的检验

1．原理

在特发性血小板减少性紫癜(ITP)和一些自身免疫性疾病时机体存在抗自身血小板抗体，可破坏自体血小板，这些抗体主要是。IgG，另有少数IgM和IgA，可采用Elisa法、放射免疫法、流式细胞术等进行检测。

2．标本采集

EDTA抗凝静脉血，特殊处理后(详见操作方法)收集血小板。

3．试剂

以Elisa法PAlgG测定为例，也可以试剂盒说明书为准。

(1)抗凝剂

67mmol／LEDTA-Na2。

(2)洗涤液

0.01mol／LPBS-67mmol／LEDTA-Na2，pH6.5。

(3)缓冲液

0.01mol／LPBS缓冲液，pH7.4。

(4)包被液

0.05mol／L碳酸盐缓冲液，pH9.6。

(5)反应液

0.02mol／LTris-盐酸缓冲液，pH7.4。

(6)显色液

0.1mol／L枸橼酸-枸橼酸钠液100ml，加邻苯二胺40mg和30％过氧化氢溶液12μl。

(7)终止液：3mol／L硫酸。

(8)其他

①抗人IgG抗体。

②酶标记的抗人IgG抗体。

③参比血清。

4．操作方法

仍以Elisa法PAIgG测定为例，也可以操作说明书为准。

(1)标本制备

静脉血4.5ml与67mmol／LEDTA-Na20.5ml混合，以252g，离心8分钟，取上层PRP，以2264g，离心20分钟，弃去上清液，用洗涤液洗血小板3次。悬浮血小板于少量缓冲液中，将血小板数调整为100×109／L，以1：100(V／V)加入NP-40(终浓度为1％)，使血小板溶解。置4℃30分钟，以2264g离心10分钟，取上清液供测定用，也可贮存在-20℃1周内测定。

(2)抗体包被

用0.05mol／L碳酸盐缓冲液稀释抗人IgG抗体至5mg／L，加入酶标反应板孔中，每孔0.1ml。加盖置37℃3小时，再移至4℃过夜，次日用0.02mol／LTris-盐酸缓冲液、洗涤液洗板3次，甩干，室温晾干，密封4℃储存，可保存6个月以上。

(3)反应

每孔加0.1ml被检标本的血小板溶解液，置37℃温育l小时后，用洗涤液洗涤3次。甩干后加0.1ml酶标记的抗人IgG抗体，置37％温育1小时。取出后，同上洗涤3次，甩干，加显色液0.1ml，37℃反应20分钟，再加3mol／L硫酸50μl中止反应。

(4)测量

在酶标仪中测定各孔吸光度(A值)。

(5)校正曲线制作

每块反应板均应做相应的校正曲线。将参考血清稀释成10个浓度的参照品(IgG为20～10000ng／ml)，以替代血小板溶解液，操作过程同上，做双孔测定。以参照品管内抗体量的对数为横坐标，相对应孔的吸光度为纵坐标，在对数纸上绘制校正曲线。

(6)计算

从校正曲线中可查出被检样本吸光度所对应的抗体浓度，结果以ng/107血小板表示。

5．参考值

(1)PAIgG

0～78.8ng／107血小板。

(2)PAIgA

０～2.0ng/107血小板。

(3)PAIgM

０～7.0ng／107血小板。

6．临床意义

(1)特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者约90％以上出现PAIgG增高，若同时测定PAIgM、PAIgA、PAC3则阳性率可达100％。PAIgG为阴性时，ITP可能性较小，以慢性ITP时PAIgG增高更为明显。

(2)结缔组织病、系统性红斑狼疮时可见PAIgG增高，但程度较ITP低。

(3)恶性淋巴组织增生性疾病如恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病时可见PAIgG增高。

(4)其他疾病如Evans综合征、慢性活动性肝炎，变态反应性疾病、急性白血病，多发性骨髓瘤、多次反复输血者等均可见PAIgG增高。

(5)PAIgG测定还可用于ITP治疗后随访指标。治疗有效者PAIgG下降；复发者则升高；PAIgG在治疗两周内下降者表示预后良好。

7．影响因素

(1)皮质激素可影响结果，故应停药两周以上才能抽血检测。

(2)取血的试管必须充分硅化或用塑料试管。

(3)操作过程中血小板计数力求准确。

参考文献

[1]李卓江，廖若男，杨爱云.血小板表面相关IgG检测的临床评价—91例血小板减少症前瞻性研究[期刊论文]-贵州医药1993(03).

[2]中华医学会血液学学会血栓与止血学组.几种出血性疾病诊断(及疗效)标准的修订1995(06).