大连地区沙眼衣原体流行分析调查

大连地区沙眼衣原体流行分析调查

王绘翔苏宗义龚爱红

（大连市皮肤病医院辽宁大连116021）

【摘要】目的：了解大连地区皮肤性病科门诊患者沙眼衣原体（CT）的感染现状及特点，并探讨分子生物学检测对衣原体（CT）的诊断价值。方法：采用实时荧光聚合酶链式反应技术（FQ－PCR）对大连皮肤病医院2017年3月-2018年3月共979例患者的泌尿生殖道分泌物的CT核酸进行检测。结果：979例患者中，CT的阳性检出率为12.2%。其中男性570例，其中83例为阳性，阳性率为14.6%；女性409例，其中36例为阳性，阳性率为7.4%,男性CT感染率高于女性（P<0.05），不同年龄感染情况显示，来我院检查的疑似患者，以20-50岁患者居多，但组间阳性率以10～40岁年龄段最高。结论:泌尿生殖道感染患者CT阳性检出率约为12.2%，阳性患者以青壮年为主，且与淋病混合感染较为常见，解脲支原体合并感染率也较高。临床应同时进行该3种病原体的检测。

【关键词】沙眼衣原体；实时荧光聚合酶链式反应；流行病学

【中图分类号】R771【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2019）10-0213-03

沙眼衣原体,染色为革兰氏阴性，寄生于真核细胞内的原核细胞微生物。有始体和原体两种发育形式。其中，原体具有感染性，而始体为其繁殖型。临床上，沙眼衣原体是非淋菌性尿道炎的主要致病菌[1]。在欧美国家，由沙眼衣原体引起的泌尿生殖系统感染已经超越淋病奈瑟菌跃居第一位。在我国，泌尿生殖系统感染的首位仍是淋病奈瑟菌。但随着我国经济地不断发展，性观念逐步开放，沙眼衣原体的感染率逐年上升，已经成为我国重点监测的传染病[2]。沙眼衣原体感染后，男性多表现为尿道炎，不经治疗也可缓解，但可呈慢性周期性加重，并可合并附睾炎、直肠炎等。女性则能引起尿道炎、宫颈炎以及输卵管炎等较严重的并发症。严重影响患者的身心健康及生活质量[3]。本研究旨在了解大连地区皮肤性病门诊患者CT的感染情况对2017年3月-2018年3月共979例泌尿生殖道标本以FQ-PCR的方法进行了衣原体检测，并对结果进行了统计分析，现报告如下。

1．资料与方法

1.1一般资料

选取2017年3月-2018年3月本院皮肤性病科门诊患者979例,其中男性570例，女性409例，年龄在10～80岁。大多数患者中，有尿道或阴道黏液性或黏液脓性分泌物，并有尿痛、尿道不适等症状，且患者在进行沙眼衣原体检测前均未服用抗生素治疗。

1.2标本采集

所有标本均按无菌操作进行采集。男性患者取尿道分泌物。用细小无菌男性一次性棉拭子深入尿道约2～4cm取分泌物；女性患者则用无菌棉签擦净宫颈分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停留几秒,旋动棉拭取出。所有采集好的标本立即置入一次性专用试管中加盖密闭备检。

1.3检测方法

检测均采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术（FQ－PCR）。实验选用仪器为宏石公司生产的Slan荧光定量PCR。实验所用的CT检测试剂盒由上海之江公司提供，有效期内使用,操作及结果判断严格按照说明书进行。

仪器为宏石公司Slan荧光PCR检测仪。

1.4统计学处理

数据采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（x-±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

2.1男、女性CT检出情况比较

979例疑似泌尿生殖道感染者CT总阳性率为12.2%，其中男性和女性患者的阳性检出率占各自所在组别人数的百分比的14.6%和7.4%。男性检出率明显高于女性，且χ2检验结果P<0.05，有统计学意义，显示大连地区沙眼衣原体感染率存在性别差异，见表1。

表1大连地区沙眼衣原体检出率性别差异

3.讨论

随着我国社会不断进步，人们的性观念逐渐改变，且人们普遍对性卫生知识了解不深，保护意识较弱，且病原微生物感染常呈隐形感染，患者常无任何临床症状。使得我国由不洁性交而造成的泌尿生殖道感染逐年上升。在泌尿生殖道感染者中，以解脲支原体，沙眼衣原体以及淋病奈瑟菌为感染率最高[4]。衣原体（CT）是主要的非淋菌性尿道炎的致病病原体，常规检测方法包括涂片法、免疫胶体金法、酶联免疫法以及细胞和药敏培养法[5]。虽然细胞培养是检测衣原体的金标准，检测的是有繁殖能力的始体，因而是临床诊断衣原体感染的最直接的依据。但检测时间长，而其余常规方法敏感性较低，特异性不高，容易造成假阴性，且对实验要求较高，且易存在主观性误差，从而阻碍相关诊断。因而，已经逐渐被其他检测方法所代替。酶联免疫法是一种检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，发展于上个世纪70年代。当前，已成为众多科研项目的重点研究方向。很多实践研究均证实该种检测方法灵敏度和特异性均较高，优势较为明显。但该方法对窗口期感染患者检出率低，在复发感染的患者中阳性检出率也较低，且常伴有非特异性反应的发生[6]。PCR检测技术作为分子生物学的常规检测方法，应用广泛，涵盖病原微生物、肿瘤、遗传病等多方面疾病的检测和诊断。而荧光定量PCR（FQ-PCR）发展较晚，是二十世纪末基于普通PCR的基础上发展起来新型的检测技术。由于在扩增时加入了一对引物及特异荧光探针,便可通过荧光能量传递获得想用的检测结果。读取荧光定量PCR结果时，我们可以引入CT。当样本CT≤37时，结果判定为阳性，当CT=40或无CT时，结果判定为阴性，党CT介于37与40之间时，应视为灰区，对标本复检。荧光定量PCR能够有效避免传统PCR易污染的缺点,也就解决了常规PCR假阳性率高的问题，因此获得检测结果的准确性更高。灵敏度、准确度、特异性、敏感性都实现了质的飞跃，检测时间也大大缩短。上述种种优点使得这项检测技术得到诸多临床及科研工作者的认可。采用FQ-PCR进行检测时，荧光信号强度是随着基因产物的增加而等比例增强。所以，可以将每次循环后收集到的荧光信号组成扩增曲线。不论采用何种方法检测，每次实验均应该设置阳性和阴性对照来印证实验的有效性。此外，检测前的质量控制也对检测结果的准确性有很多影响，包括标本的采集，以及对标本的前处理。因此，要获得准确的检测结果，还要有保证患者采集标本前正确准备，临床医师能够准确采集标本，标本正确运输、保存等措施。

“扩大金标准”为FQ-PCR和常规方法同为阳性的判定方法，本研究既是采用此标准，但由于实验条件有限，并未采用细胞培养作为检测，而是采用免疫胶体金法检测。用此两种检测方法均为阳性作为评判阳性的标准。在119例“真阳性”标本中，FQ-PCR法检测出阳性32例，胶体金法仅检测出阳性13例，在860例“真阴性”标本中，PCR法检测出阳性3例，胶体金方法并未检测出阳性。在本研究中，FQ-PCR检测的敏感性明显高于免疫胶体金法。这与王勤和戴芸等人的研究结果，PCR荧光探针法的阳性率分别为9.76%和9.94%,明显高于胶体金法2.64%和6.29%相符[7-8]。证实FQ-PCR方法有利于避免CT检测假阴性的发生。但是，我们同时也发现，FQ-PCR的检测方法特异性较弱，应注意避免假阳性造成的误诊。因此，在临床中，如果将两种方法联合应用，将很大程度上提高检测报告的准确率。

根据帕丽扎提.阿不都热依木等对318例疑似衣原体感染患者的研究表明，CT阳性标本为30例，占9.43%，其中男性8例，占6.25%，女性22例，占11.58%。女性感染率高于男性[9]。王敬人等的研究则表明，2014年至2016年，柳州地区CT的阳性率约为10．90%，且女性患者CT阳性率约为12.2%，同样高于男性患者9.92%的阳性率[10]。而本研究中CT总阳性率为12.2%，高于新疆地区及柳州地区，但低于马晓慧等人的研究结果-河南地区CT感染率16.5%[11]以及车汉荣等人的研究结果-茂名地区CT感染率19.08%[12]。表明CT感染率存在地域差异。大连地区女性标本36例为阳性，阳性率为7.4%,男性CT感染例数为83例，阳性率为14.6%，明显高于女性，与帕丽扎提以及王敬仁等的调查结果不符，但同马晓慧等人的研究结果-河南地区男性CT感染率29.32%，女性CT感染率3.61%，男性CT感染率高于女性相符。年龄上，21～30岁和31～40岁年龄组CT感染率最高，分别为为14.7%和14.9%，这与王敬人等人的研究结果相符，21～30岁年龄组和31～40岁年龄组，分别为12.34%和8.84%[13]以上阳性检出率青壮年所占比例最高，其原可能为处于性活跃阶段，且大部分青年缺乏相应的保护意识。以上不同于相关文献报道20岁以下人群的CT阳性率相对高于其他年龄阶段的报道，此结果可能与本院就诊患者年龄年龄主要集中于21～50岁有关。同时，疑似沙眼衣原体感染患者合并感染淋球菌及支原体者较多。我院就诊患者中，CT（衣原体）+NG（淋球菌）合并感染率为16.78%，高于CT（衣原体）+UU（解脲支原体）合并感染率10.71%。这与车汉荣的研究结果-UU＋CT感染最为常见,阳性率最高,为35.73%；CT＋NG阳性率较低,为9.27%不符.说明不同地区衣原体的感染率在性别及合并感染情况上存在一定差异。这可能与本地区就诊群体差异相关。此外，各地区气候、风俗、文化、教育程度、医疗条件等也是造成以上差异的原因。

综上所述，FQ-PCR的检测方法较常规检测方法拥有操作便捷、检测时间短、敏感性高等优点，符合早发现、早治疗的临床需求，具有较高的临床诊断价值。但由于其特异性较弱，建议与其他常规方法联合检测。同时，对年龄、性别易感染的重点人群应注意筛查，也建议在筛查衣原体感染时同时进行淋球菌及解脲支原体感染的筛查，从而为临床诊断、治疗提供有效理论依据。

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