IL-10基因多态性与HBV感染易感性研究

IL-10基因多态性与HBV感染易感性研究

高建梅1刘华兴2邹云莲1董虹1严新民1

高建梅1刘华兴2邹云莲1董虹1严新民1(通讯作者)

(1云南省第一人民医院临床基础医学研究所/昆明理工大学附属医院云南昆明650032)

(2勐腊县疾病预防控制中心云南景洪666300)

【摘要】目的探讨IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点多态性与HBV感染的相关性。方法运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术，对200例健康对照和400例HBV感染患者的IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点进行基因分型。结果rs1800871位点基因型分布频率在HBV感染组与正常对照组间显著不同（χ2=9.625，P=0.008），TT基因型有增高的趋势。以非条件logistic回归模型校正混杂因素后，在T隐性模式下（TT/CC+TC），两组间仍有统计学差异（P=0.034；OR为1.467；95%CI为1.028-2.094）；而rs1800896位点基因型和等位基因分布频率在两组间差别无统计学意义。结论IL-10基因多态性与HBV易感性相关，rs1800871TT基因型可能是HBV感染的危险因素。

【关键词】IL-10基因多态性肝炎病毒乙型

【中图分类号】R39【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）11-0084-02

研究证实，宿主的遗传异质性特别是与免疫应答相关的基因的多态性可导致不同人群或个体间免疫功能的差异，从而与HBV易感性密切关系[1-2]。细胞介素10（interleukin-10,IL-10）是由Th2细胞产生的一种具有多效性的免疫调节性细胞因子，其启动子区域rs1800871和rs1800896位点的多态性可影响IL-10基因的转录活性和血浆IL-10水平[3-4]，与乙型肝炎病毒的感染和和预后密切相关。本文以运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(Matrix-AssistedLaserDesorption/IonizationTimeofFlightMassSpectrometry，MALDI-TOF-MS)分析了IL-10启动子多态性与HBV感染的相关性，现报道如下：

对象与方法

1．研究对象：在知情同意的原则下，收集云南西双版纳州医院门诊及住院患者血样600份，其中正常对照200例，HBV感染患者400人，诊断标准符合《病毒性肝炎防治方案》。所有观察人员均静脉抽取EDTA-K2抗凝静脉血3ml，充分混匀后-20℃保存备用。

2．Il-10rs1800871和rs1800896位点多态性分析：全血标本用全血基因组提取试剂盒（百泰克DP1801）提取基因组DNA作为模板，采用MALDI-TOF-MS技术对IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点进行基因分型。首先进行PCR扩增，其中引物浓度为0.1μmol/L，HotStarTaq1U，dNTP浓度为0.5μmol/L，MgCl2浓度为1.625mmol/L，DNA模板10ng。PCR反应的条件为94℃15分钟；94℃20秒，56℃30秒，72℃1分钟，45个循环；72℃延伸3分钟。随后将扩增后的产物进行SAP纯化后进行延伸反应，其中伸反应引物0.84mol／L，iPlex酶1U，反应条件为94℃30秒；94℃5秒，52℃5秒，40个循环；80℃5秒，5个循环；72℃延伸3min。反应结束后每个延伸反应产物经树脂纯化后于芯片上点样，MassARRAYAnalyzer质谱检测相应位点的基因型。PCR引物和延伸引物见表1。

表1PCR引物及延伸引物序列

3．统计学分析：采用SPSS11.7统计软件分析，直接计算法计算基因型和等位基因频率，组间频率比较采用x2检验，非条件logistic回归模型计算相对风险度的比值比（OR）及95%可信区间（CI），P<0.05视为有统计学意义。

结果

1.飞行时间质谱检测结果：经x2检验所调查的人群基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05），样本具有代表性。rs1800871三种基因型均有检出，而rs1800896位点只有AA和AG基因型，结果见图1。

图1IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点飞行时间质谱图

注：a?e分别为：rs1800871CC、rs1800871TT、rs1800871CT、rs1800896AA和rs1800896GA

2.IL-10启动子rs1800871和rs1800871位点多态性与HBV感染相关性分析：

HBV感染组rs1800871位点基因型分布频率与正常对照组显著不同（χ2=9.625，P=0.008），TT基因型有增高的趋势。而rs1800896位点基因型和等位基因分布频率在两组间差别无统计学意义，结果见表2。采用非条件logistic回归模型校正观察人群年龄和性别上存在的差异后再进行分层分析，结果rs1800871位点的多态性与HBV易感性仍有统计学联系：在T隐性模式下（TT/CC+TC），HBV感染组与正常对照有显著性差异（P为0.034；OR为1.467；95%CI为1.028-2.094），即携带TT基因型者感染HBV的危险性是携带CC和TC基因型者的1.467倍。

表2IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点基因型与等位基因在不同组间的分布

讨论

不同个体感染HBV后的临床表现复杂多样，从一过性的自限性感染到急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化乃至肝癌，可形成一系列的临床疾病谱。这种差异除与病毒本身因素（如病毒载量、基因型、基因变异等）有关外，还与机体自身的免疫清除能力相关[1-2]。IL-10是具有免疫抑制和免疫刺激双重作用的调节性细胞因子，在免疫调节中处于中心环节。它可通过抑制Th1细胞的增殖和降低IFN-r等细胞因子的分泌而抑制Th1细胞介导的免疫反应、抑制MHC-II抗原的表达和抑制单核／巨噬细胞的递呈能力，从而影响机体对病毒的抑制与清除。其启动子区域rs1800871和rs1800896位于Ets转录子和正调控序列结合位点，因此其多态性可以影响IL-10基因的转录活性和血浆IL-10水平[3-4]并与乙型病毒性肝炎的发生发展等密切相关。但目前国内外对IL-10基因多态性与HBV易感性的研究结果各不相同。有些研究认为，IL-10低表达的基因型和等位基因如-592A、-819T和-1082A不利于HBV感染后疾病的好转[5-6]；有些学者则认为IL-10中、高表达等位基因、基因型如-592C-819C和-1082G与HBV感染后病程的进展相关[7]；而有些研究则未发现IL-10基因多态性与HBV感染有任何关联[8]。

我们的研究发现HBV感染组rs1800871位点基因型分布频率与正常对照组显著不同，TT基因型有增高的趋势。采用非条件logistic回归模型校正观察人群年龄和性别上存在的差异后再进行分层分析，结果rs1800871位点的多态性与HBV易感性仍有统计学联系，携带TT基因型者感染HBV的危险性是携带CC和TC基因型者的1.467倍。以往的研究已证实，rs1800871C相对于T为高表达等位基因，C基因型的IL-10产量是T基因型的2～3倍。所以我们认为可能是由于rs1800871位点由C突变为T后，影响了其与Ets转录子和正调控序列的结合，IL-10表达量降低，从而使IL-10对T细胞介导的免疫反应的抑制或对IFN-r的拮抗作用减弱，从而增强了机体的抗病毒能力的结果。

综上所述，我们的研究提示IL-10基因多态性与HBV易感性相关，rs1800871TT基因型可能是HBV感染的危险因素。

参考文献

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基金项目:云南省卫生科技计划项目资助，项目编号2010NS004；

云南省应用基础研究计划-昆医联合专项资助，项目编号2012FB097