高效液相法同时测定生素A和维生素E的含量

高效液相法同时测定生素A和维生素E的含量

王琛

（厦门医学院药学系福建厦门361023）

摘要：目的建立多维元素胶囊中维生素A和维生素E的HPLC含量测定方法。方法采用CenturySILC18柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为甲醇：三氯甲烷：水（体积比90：8：2）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：选择280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。结果维生素A在54.4～217.5μg·mL-1（r=0.9999）、维生素E在56.3～225.0μg·mL-1（r=0.9997）范围内均呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.70%（RSD=1.43%）、99.19%（RSD=1.25%）。结论建立的方法灵敏度高、准确度和重现性好，可作为多维元素胶囊的质量控制方法之一。

关键词：高效液相色谱法；维生素A；维生素E

多维元素胶囊为维生素及矿物质类非处方药药品，用于预防和治疗因维生素和矿物质所引发的各种疾病。维生素A和维生素E为脂溶性维生素含量测定较为复杂[1-2]，且有可能同时测定会相互干扰，本文建立一种高效液相法同时测定生素A和维生素E含量的方法。

1仪器与材料

UV-1575紫外检测器、PU-1580输液泵，N-2000双通道色谱工作站，三氯甲烷（色谱纯），二甲基亚砜（分析纯），正己烷（分析纯），甲醇（色谱纯），样品（自制），对照品：维生素A醋酸酯（瑞士Fluka公司）、维生素E烟酸酯（Sigma公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件的选择

色谱柱：CenturySILC18柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇：三氯甲烷：水（体积比90：8：2）；流速：1.0mL·min-1；检测波长：选择280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。

2.2溶液的制备

对照品及供试品溶液的制备：取20粒胶囊，除去胶囊，将内容物研细，精密称取细粉适量（约相当于维生素A7500单位），精密加入二甲亚砜20mL，于40～50℃超声约20分钟，放冷至室温，离心10分钟（3000转/分）；精密量取上清液15mL，用正己烷提取4次，每次20mL，小心振摇，静置使分层，合并提取液至100mL量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。精密量取贮备液2mL，用氮气吹干，精密加异丙醇2mL使残渣溶解，混匀，作为供试品溶液[3-4]。

2.3系统适用性试验

取对照品溶液及供试品溶液在上述色谱条件下测定，色谱图见图1。理论板数按维生素A峰计算应不低于2000，各相邻峰之间的分离度大于1.5。

2.4线性关系考察

精密量取供试品3mL（六份）贮备液用氮气吹干，分别精密加异丙醇1.5、2.0、3.0、3.75、6.0mL使残渣溶解，混匀，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。维生素A回归方程：A=5900.9C–57900，r=0.9999；维生素E回归方程：A=6686.1C–66474，r=0.9997，结果表明，54.4～217.5μg·mL-1、维生素E在56.3～225.0μg·mL-1范围内均呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取对照品溶液20μL，重复进样6次，计算各峰面积。维生素A、维生素E的RSD分别为1.42%、0.68%，表明色谱系统精密度良好。

2.6重复性试验

精密称供试品6份，按“2.2”项方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，根据各峰面积计算，维生素A、维生素E的RSD分别为1.06%、1.94%，表明方法具有良好的重复性。

2.7回收率试验

采用加样回收法，称取已知含量的供试品共9份，按低、中、高浓度分别精密加入维生素A、维生素E对照品适量，按上述色谱条件测定，维生素A、维生素E的回收率分别为99.70%（RSD为1.43%）、99.19%（RSD为1.25%）。

2.8样品测定

取3批样品，按“2.2”项方法制得供试品溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱峰面积，根据各峰面积用外标法计算样品含量（质量分数），维生素A三批测定结果分别为0.791、0.797、0.794，维生素E三批测定结果分别为0.0855、0.0867、0.0856。

3讨论与结论

为同时定量准确地测定维生素A、维生素E的含量，经过预实验条件摸索等工作，确定选择以甲醇：三氯甲烷：水（体积比90：8：2）为流动相进行测定。维生素A和维生素E样品处理方法较为复杂，为更好地处理样品采用萃取的方式进行样品提取，效果较好。维生素A和维生素E均属于油溶性维生素类，在进行含量测定时其性质与体内样品测定类似，因此建议使用保护住。本品为复方维生素类制剂，处方组分复杂，相互间干扰较大，本文建立的方法经测定，其他组分并无干扰。本法可作为该制剂产品质量控制方法之一。

参考文献

[1]刘翠红，陈科，姚雪清，等.不同液相色谱仪测定辣椒油中维生素E的含量分析[J].中国药物经济学，2016，11：23-26.

[2]吴基任，余欢欢，云玭，等.保健食品中维生素A的含量测定[J].广州化工，2016，44（22）：87-89.

[3]岑建斌，区硕俊，周朗君，等.二维液相色谱法同时检测婴幼儿乳粉中维生素A、E与D3[J].中国乳品工业，2017，45（2）：43-46.

[4]谢云峰，王浩，刘佟，等.复合氨基酸胶囊中水溶性维生素的含量测定[J].分析化学，42（9）：1343-1347.