浅谈如何提高冷冻切片的质量

浅谈如何提高冷冻切片的质量

李剑颖

李剑颖（福建安溪县医院病理科362400）

【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)11-0396-01

【摘要】目的探讨如何提高冷冻切片的质量。方法制作冷冻切片过程中，掌握送检组织的性质，调节好冷冻温度和时间，注意冷冻切片的固定和染色等等。结果制出的冷冻切片结构完整，无皱褶，核质对比鲜明，背景清晰。结论认真对待切片过程中的每个环节，从而提高冷冻切片的质量。

【关键词】冷冻切片质量

冷冻切片是利用低温使组织迅速冻结，达到一定硬度后进行切片的一种方法，具有方便、快速的特点，已广泛用于临床。手术中的快速冷冻切片要求病理医师在短时间内向临床手术医师提供病理诊断，以决定手术方式及范围。冷冻切片与常规石蜡切片的诊断相比，局限性和难度更大，更易出现漏诊和误诊，因此，冷冻切片的质量对术中快速诊断的正确率有着直接影响，但冷冻切片的组织不经脱水处理，受组织成分、切片机温度、冰晶等多因素影响，制片难度较大，我们通过积极探索提高了冷冻切片的质量，介绍如下。

1材料和方法

1.1材料材料均来自我科的冷冻切片标本。

1.2方法按规范①制作冷冻切片，并注意以下操作环节。

1.2.1准备根据送检组织的性质调节好冷冻切片机的温度，备好固定液、染色剂、吹风机等。

1.2.2取材送检组织及取材器械避免沾水，取材组织大小以1.5×1.5×0.3cm3为宜。

1.2.3包埋将取好的组织用OCT或胶水包埋，尽快放在冻头上，放入冷冻切片机中。

1.2.4切片固定、染色切片厚度5-6μm，切片贴附于载玻片上，及时用电吹风吹干，立刻放入AFF液中固定，固定时间为1min，然后放入预先加热的苏木素液中染30s-1min即可，接着按常规HE染色步骤进行，最后中性树胶封片。

2结果

制出的冷冻切片平整、无皱褶、厚薄均匀、核质染色鲜明、对比清晰。

3讨论

3.1掌握送检组织的性质由于各种组织的形态结构和成分不同，含水量多少不一，质地软、硬不同，其冷冻温度和冷冻时间也有所不同，故应分别处理。软组织如肺、乳腺、胃肠组织在用OCT包埋时，尽可能冻硬后再切片，冷冻室温度控制在-22℃左右，冷冻时间约2min。而子宫肌瘤、宫颈等硬组织用OCT包埋时则不能冻得太硬，一般冷冻八成状态时切片效果最好，冷冻室温度控制在-18℃左右，冷冻时间1min。细胞致密的组织如肝、脾、淋巴结及脑组织，这些组织一般也冻到八成即可切片，如果冻得太硬，则切片很脆，形成裂隙，会破坏组织结构，影响诊断，冷冻室温度控制在-16℃左右，冷冻时间1min。脂肪组织由于冰点低，需将冷冻室温度调至-30℃以下，且要冻硬才能切片。

3.2取材的注意事项取材时所取组织应具有代表性，应避开坏死组织，手术缝线等异物，切除非诊断需要的脂肪、皮肤等多余组织。取材器械和组织须避免遇水，以防止冰晶形成，因为冰晶会引起细胞间针状裂隙，导致细胞结构改变，核普遍增大，容易导致误诊。

3.3冷冻切片的要点冷冻时间要短，只有速冻才能减少组织内冰晶的形成，取好的组织应尽快放入冷冻切片机内速冻，最好将速冻头压在组织上，冻好后即可切片②。切片时，先轻修组织，注意观察切面有无结节、包膜等，避免修切过度，造成误诊、漏诊。

3.4冷冻切片的固定和染色为防止脱片，切片后先用吹风机稍吹干，然后立刻放入固定液中，否则容易发生细胞退变，及时固定对保持细胞结构非常重要。新鲜组织对染料的亲和力较强，苏木素液染30s-1min即可，需注意的是要认真掌握苏木素的温度、染色的时间，当苏木素染色力下降时应及时更换。

我科在冷冻切片制作过程中不断探索，总结经验，优化操作方法，使冷冻切片的质量有了明显提高。

参考文献

[1]中华医学会.临床技术操作规范病理学分册.北京：人民军医出版社，2004：10-12.

[2]范慧.陈立华.刘宇.冷冻切片的制作体会及常见问题分析.诊断病理学杂志.2008（2）：134-138.