淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响分析

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响分析

王生瑜

王生瑜

(甘肃中医学院附属医院730000)

【摘要】目的:探讨并分析淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响。方法：体外进行人牙周膜细胞的培养，基于矿化诱导这一条件下，把第三代细胞和六个不同浓度淫羊藿苷进行互相作用，即浓度为零（对照组）、浓度为10mg/L、1mg/L、0.1mg/L、0.01mg/L、0.001mg/L，借助于BSP表达水平、噻唑蓝比色法以及ALP活性测定，就其对于人牙周膜细胞增殖与骨向分化的影响进行分析。结果：作用24个小时后，不同药物浓度都可使人牙周膜细胞增殖；48小时后，淫羊藿苷在1-0.001mg/L区间，对于人牙周膜细胞增殖能力的强化较为显著，在10mg/L时影响较小；72个小时后，淫羊藿苷浓度在0.1-0.001mg/L区间时，增殖能力较为显著；作用72个小时后，浓度在1-0.001mg/L区间的组数推动人牙周膜细胞骨向分化，相对于对照组而言，所存差异具有统计学意义，即P＜0.05，而10mg/L组和对照组之间所存差异不具统计学意义，即P＞0.05。结论：基于一定的浓度范围内，利用淫羊藿苷不仅可以推动人牙周膜细胞的增殖，同时还可进一步推动其骨向分化。

【关键词】骨向分化淫羊藿苷增殖影响人牙周膜细胞

【中图分类号】R78【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）12-0233-01

在淫羊藿茎叶中所提取的这种黄酮类成分就是指淫羊藿苷，通过大量实践证明，发现淫羊藿苷不仅能够推动成骨细胞的增殖，同时还能够诱导骨髓中的基质干细胞逐步分化成为骨细胞[1]。本文就淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响进行探讨和分析。

1.资料与方法

1.1一般资料

在本次研究中，所用材料和仪器主要如下：淫羊藿苷、高糖的DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、波形丝蛋白抗体、倒置相差的显微镜、地塞米松、抗坏血酸、角蛋白多克隆抗体、超净工作台、自动酶标分析仪、DAB显色液、四甲基偶氮唑蓝等[2]。

1.2方法

1.2.1选取健康前磨牙，将其保存于含有链霉素以及青霉素的培养液中，在半小时内将其送到实验室。接着于超净工作台内，借助于无血清含双抗培养液来实施冲洗，利用手术刀片获取三分之一的牙周的膜组织，并放入离心管中，滴入少量的胰蛋白酶，完全浸没管内中的组织，在37摄氏度下消化。十分钟以后再添加含有胎牛血清培养液，将消化完全终止，在此时牙周膜组织就会开始疏松，接着再进行五分钟的离心，将上清除去，留下少量的培养液。利用尖吸管一同吸出所残留的培养液以及组织块，将其移到培养皿中，采取分散摆放的方式来进行组织块的摆放，缓慢进行封盖，确保培养液能够充盈在盖波片以及组织间。最后再添加适量的培养液，把培养皿放入到二氧化碳培养箱中培养，每天进行观察，此后每三天进行半量换液，当细胞生长可铺满80%左右培养皿，且消化以后再根据1:3来传代，并染色，对细胞的来源进行鉴定。

1.2.2在培养24小时后，添加不同浓度量的淫羊藿苷，根据上述方式分别在48小时以及72小时后添加淫羊藿苷，并观察人牙周膜细胞增殖情况与骨向分化情况。

1.3统计学方法

在本次的实验数据中采用的是SPSS17.0软件来实施统计学分析，其中组间数据资料的对比采用的是t检验，而计数资料对比则采用的是卡方检验，以p＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

通过4-7天培养液的培养，组织块附近出现了较为明显的纤维样细胞，且胞核也比较清晰，呈椭圆形或者圆形。在染色以后，波形丝蛋白的染色呈阳性，且胞质为棕黄色；角蛋白染色呈阴性，没有出现着色。基于矿化诱导这一条件下，在淫羊藿苷作用了24个小时后，不同药物浓度都可使人牙周膜细胞增殖；48小时后，淫羊藿苷在1-0.001mg/L区间，对于人牙周膜细胞增殖能力的强化较为显著，在10mg/L时影响较小；72个小时后，淫羊藿苷浓度在0.1-0.001mg/L区间时，增殖能力较为显著；作用72个小时后，浓度在1-0.001mg/L区间的组数推动人牙周膜细胞骨向分化，相对于对照组而言，所存差异具有统计学意义，即P＜0.05，而10mg/L组和对照组之间所存差异不具统计学意义，即P＞0.05。淫羊藿苷对于人牙周膜细胞增殖以及骨向分化的影响如表1和表2所示。

表1淫羊藿苷对于人牙周膜细胞增殖影响（-x±s）

3.讨论

所谓人牙周膜细胞就是指一种混杂的细胞群，其主要由未分化间充质细胞、纤维细胞、成骨细胞以及成牙骨质细胞所组成。一般在正常的状况下，这种牙周膜细胞能够借助于分化以及增殖形成为牙槽骨以及牙骨质等相关的牙周组织，而这些均为牙周组织实现修复再生目的的一个基本基础。淫羊藿苷作为一种黄酮类药物，其具有调节内分泌、抗肿瘤、心脑血管功能的改善以及免疫功能的增强等作用。鉴于此，本文就淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖以及骨向分化的影响进行了详细地分析，从研究结果来看，淫羊藿苷浓度在1-0.001mg/L区间，可推动人牙周膜细胞的增殖，且其浓度依赖性不强。浓度为10mg/L的淫羊藿苷在24个小时对于人牙周膜细胞的增殖具有推动作用，然而随着时间的不断延长，其抑制作用就会越发的明显。此外，从研究结果来看，淫羊藿苷浓度在1-0.001mg/L范围内，对于人牙周膜细胞骨向分化影响比较强烈，可使人牙周膜细胞ALP活性得到提高。综上所述，在一定的浓度范围区间，淫羊藿苷不仅能够推动人牙周膜细胞的骨向分化，同时还便于牙周组织修复以及再生。

参考文献

[1]姜瑛,王祥,许华等.淫羊藿苷对内毒素抑制牙周膜细胞ALP表达的影响[J].临床口腔医学杂志,2013,29(3):137-140

[2]吴剑锋,何晓东,许卫东等.淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型[J].肿瘤,2009,29(12):1124-1128

[3]WenjunZhu,YuanyuanTan,QihongQiu,XitingLi,ZixianHuang,YunFu,MinLiang.ComparisonofthepropertiesofhumanCD146+andCD146?periodontalligamentcellsinresponsetostimulationwithtumournecrosisfactorα[J].ArchivesofOralBiology,2013,5812

[4]李春光.骨碎补总黄酮联合淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响[D].重庆医科大学,2011

[5]丁茜,张凤秋,马玉实等.淫羊藿苷对人牙周膜细胞骨向分化基因表达的影响[J].北京大学学报（医学版）,2013,45(6):975-978