正交设计优选通窍活血巴布剂中红花水提取工艺研究

正交设计优选通窍活血巴布剂中红花水提取工艺研究

张伟唐明张莉张云丽白小英

张伟1唐明1张莉2张云丽1白小英1

（1青岛市海慈医疗集团山东青岛266033；2青岛市中心医疗集团山东青岛266044）

【中图分类号】R【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2011）20-0100-01

【摘要】目的实验研究通窍活血巴布剂制备工艺中红花的最佳水提取方法。方法采用高效液相色谱法，以红花黄色素为评价指标，考察L9(34)正交实验设计对通窍活血巴布剂中水提取工艺参数的影响。结果提取次数对红花黄色素的提取具有非常显著的影响（P<0.01），提取时间对提取效果有显著的影响（P<0.05），浸提温度影响不显著（P>0.05）。结论每次加水10倍红花药材量，60℃浸提2次，每次浸提40分钟。

【关键词】通窍活血巴布剂红花黄色素高效液相色谱法提取正交设计

通窍活血巴布剂制备工艺研究是青岛市中医科研基金项目，是对古方通窍活血汤的剂型改革研究。本实验以红花黄色素为评价指标，L9(34)正交设计实验考察组方药物红花的水提取工艺，优化红花提取液制备方案。为该巴布剂制备工艺研究提供实验依据。

1仪器、试剂与药材

1.1仪器1100型高效液相色谱系统(美国Agilent)；JA2003型电子分析天平（上海）；超声波清洗器：KQ100型(昆山市超声波仪器厂)；恒温水浴箱。

1.2试剂与药材红花黄色素A，甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。实验用药材取自本院中药库，经青岛市药检所中药科鉴定，红花为菊科植物红花的干燥花。

2实验方法与结果

2.1红花黄色素含量测定方法

2.1.1色谱条件DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.7%磷酸（26∶2∶72）为流动相，流速1.0mL·min-1，检测波长403nm，柱温40℃，进样量10μL。

2.1.2线性关系精密吸取浓度为0.1012mg/ml的对照品溶液0.5、1、2、3、4、6、8μl（进样量依次为0.0506、0.1012、0.2024、0.3036、0.4048、0.6072、0.8096μg），按以上色谱条件进样，测得峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，标准曲线方程为：Y=1.243×105X-3.681×103，r=0.9993。结果表明红花黄色素A在0.0506～0.8096μg范围内呈良好的线性关系。

2.2正交实验方法

2.2.1正交实验因素水平的确定固定每次加水10倍红花药材量，选择影响提取效果的三个主要因素:浸提时间、浸提温度和浸提次数，每个因素各取3个水平，按L9(34)正交表进行试验。试验因素水平见表1。

表1正交设计因素水平

2.2.2正交实验方法称取红花粗粉45.0g，共9份，每份与对应的处方比例量赤芍和桃仁的乙醇提取后药渣一起，分别按表2设计方案进行实验，分别合并提取液，过滤，定容至2000.0ml。精密吸取滤液1.0ml，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10.0ml；用微孔滤膜(0.45μm)过滤，续滤液即为供试品溶液。分别进样10μL。每项试验平行重复2次。测定并计算各样品中红花黄色素A含量。

表2正交试验设计及结果

2.3正交实验结果实验结果表明，各因素对本工艺影响大小顺序为C>A>B；考虑到生产周期，确定A2B2C2为红花水提取工艺方案，即每次加水10倍红花药材量，60℃浸提2次，每次浸提40分钟。

3讨论

3.1红花黄色素不稳定，其水溶液中的保留率随温度升高和时间延长而下降[1]，提示在含红花药材的制剂工艺研制时，要尽量避免长时间浸泡和高温处理[2]。

3.2我们曾对加水量进行单因素考查，结果表明，加水量低于8倍量时，溶剂不易充分浸泡红花药材，提取率较低；加水增至10、12、14倍量时，提取量明显增加但差距不大。考虑到红花提取液是作为该巴布剂基质材料的溶胀溶媒，容量不宜太大，以减少后续浓缩处理对成分的影响。因此本实验固定加水量为10倍红花药材量。

3.3我们还对该巴布剂组方药物中红花黄色素A的含量测定方法进行研究。

参考文献

[1]金鸣，臧宝霞，李金荣，等.羟基红花黄色素A热稳定性的初步研究[J].中国中药杂志，2003，28(12):1197-1198.

[2]周平兰，夏新华.红花黄色素提取工艺的研究.湖南中医学院学报，2004，24（1）：11-12.