高尔基体蛋白73、AFP在原发性肝癌诊断中的临床价值探讨

高尔基体蛋白73、AFP在原发性肝癌诊断中的临床价值探讨

陈勇田刘红

陈勇田刘红（山东省安丘市人民医院山东安丘262100）

【摘要】目的分析高尔基体蛋白73（GP73）、AFP在原发性肝癌（PHC）、肝硬化、慢性乙肝及其他肿瘤患者血清中的浓度水平，评价GP73、AFP在原发性肝癌诊断中的价值。方法取原发性肝癌、肝硬化、慢性乙肝和其他肿瘤患者及健康人血清，分别检测GP73、AFP含量。结果①原发性肝癌组的GP73、AFP浓度水平要明显高于肝硬化组、肝炎组、其他肿瘤组和正常健康人组，各组GP73含量差异有统计学意义（F=68.84,P＜0.05），原发性肝癌组GP73含量与其余各组用LSD法两两比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。②GP73诊断PHC的敏感性为76.6%，高于AFP的敏感性59.4%，差异有统计学意义（x2=4.342,P＜0.05）。③GP73和AFP联合检测诊断PHC的敏感性为90.6%，高于GP73单项诊断PHC的敏感性为76.6%，差异有统计学意义（x2=4.614,P＜0.05），也高于AFP的单项诊断PHC的敏感性59.4%，差异统计学意义（x2=16.667,P＜0.05）。结论①GP73在原发性肝癌患者的血清浓度水平明显高于其他人群，差异有统计学意义（P＜0.05），可以作为辅助诊断原发性肝癌新的血清标志物。②GP73诊断原发性肝癌的敏感性、特异性优于AFP。③GP73与AFP联合检测可提高PHC诊断敏感性，特别是对AFP阴性的PHC患者更有诊断价值。

【关键词】原发性肝癌高尔基体蛋白73甲胎球蛋白

原发性肝癌(PHC)是目前世界上最常见的、病死率高的10种恶性肿瘤之一，其中90%为肝细胞癌。目前，临床上常用的高危人群血清学筛查指标是甲胎蛋白(AFP)，但是研究表明，AFP敏感性仅为36～74%，特异性为79～91%，所以AFP并不是一种非常理想的肿瘤标志物。随着基因技术、肿瘤免疫学、分子生物学等的深入发展，科研人员已经发现了一些新的诊断PHC的肿瘤标志物，包括高尔基体蛋白73(GP73)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、异常凝血酶原(DCP)等，高尔基体蛋白73是其中最值得期待的血清标志物之一。高尔基体蛋白73是一种高尔基体跨膜蛋白，该蛋白的编码基因位于第9号染色体，相对分子质量为73×103，全长3042bp，在HBV感染的肝病患者中，GP73水平均明显上调，Block等发现，在肝癌患者血清中GP73水平显著升高。

1材料与方法

1.1主要的实验材料

患者血清标本均取自安丘市人民医院2010年11月至2011年2月确诊的患者，正常健康人血清取自安丘市人民医院健康查体人员。其中原发性肝癌患者64例，诊断标准采用中国抗癌协会肝癌专业委员会在2001年关于修订“原发性肝癌的临床诊断与标准”的说明和2009年《原发性肝癌规范化诊治的专家共识》中表明的肝细胞癌和原发性肝癌的诊断标准，包括病理学诊断标准和临床诊断标准，平均年龄（59.1±9.3）岁，慢性乙肝患者16例，平均年龄（40.3±13.2）岁；肝硬化患者21例，平均年龄（56.8±11.7）岁；其他肿瘤患者66例（包括胃癌患者19例，食管癌患者11例，直肠癌患者8例，肺癌患者12例，支气管癌患者5例，宫颈癌患者6例，乳腺癌患者5例），平均年龄（58.6±13.7）岁，正常健康人32例，平均年龄（40.2±17.5）岁。

1.2血清标本的采集

早晨空腹静脉采血3ml，放入干燥试管，37℃水浴箱中温育1h，3,000rpm离心10min，提取血清于-20℃以下保存。

1.3主要仪器设备与试剂

HTF-化学发光免疫分析仪、BRIO酶标仪、微量移液器5-50ul、微量移液器50-250ul。高尔基体蛋白（GP73）试剂盒、甲胎蛋白（AFP）试剂盒。

1.4GP73的检测

采用双抗体夹心ELISA方法定量检测血清样品中GP73含量，酶标板上预包被抗GP73单抗，可与样品中GP73反应结合，配合加入HRP标记GP73多抗，然后用TMB底物作用显色，显色强度与样品中GP73的浓度成正比。通过酶标仪检测吸光度（OD值），按照GP73校准品制定浓度曲线，计算样品中GP73的含量。

1.5甲胎蛋白的检测

将双抗体夹心法免疫测定原理与酶标记技术和酶催化化学发光免疫分析相结合对AFP进行定量分析。在微孔板的孔内预先包被了识别抗AFP单克隆抗体，用辣根过氧化物酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。检测时血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应，再加上发光底物，用微孔板发光分析仪读取发光数值并计算其含量。

1.6统计学处理

应用SPSS13.0统计分析软件包进行统计与分析，各组数据用均数±方差表示，组间比较使用方差分析（ANOVA），P＜0.05表明有统计学意义。各组阳性率比值用采用x2检验，以P＜0.05表明有统计学意义。

2结果

2.1GP73、AFP在各病例组中的表达水平及对PHC的诊断价值

GP73在原发性肝癌患者血清中的含量为（240.8±113.0）ng/ml，在肝硬化组的含量为（130.2±75.8）ng/ml，在慢性乙肝组的含量为（115.0±45.1）ng/ml，在其他肿瘤组的含量为（50.8±28.6）ng/ml，在正常健康人组的含量为（41.7±18.5）ng/ml，各组GP73含量差异有统计学意义（F=68.84,P＜0.05）。原发性肝癌组GP73含量与其余各组用LSD法两两比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.2GP73与AFP单项诊断PHC时敏感性、特异性和准确性的比较

单项检测血清GP73诊断PHC敏感率为76.6%，单项检测血清AFP诊断PHC的敏感率为59.4%，GP73的敏感性明显优于AFP血清，差异有统计学意义（x2=4.342,P＜0.05）。单项检测血清GP73诊断PHC的特异性为90.4%，高于AFP的特异性为88.2%，差异不明显，无统计学意义（x2=0.348，P＞0.05）。单项检测血清GP73诊断PHC的准确性为82.9%，高于AFP的准确性为78.3%，差异不明显，无统计学意义（x2=1.041，P＞0.05）。

2.3GP73与AFP联合检测对PHC的诊断价值

GP73与AFP联合检测诊断PHC的敏感率为90.6%，明显高于GP73和AFP单项诊断原发性肝癌的敏感率，差异显著，有统计学意义（x2=4.614,P＜0.05;x2=16.667,P＜0.05）。在原发性肝癌组中，在AFP阳性的38例肝癌患者中，有30例GP73为阳性（78.9%）；在AFP为阴性的26例肝癌患者中，有19例GP73为阳性（73.1%）。通过GP73与AFP的联合检测，还可以提高二者检测PHC的互补性，尤其是可提高对AFP阴性的PHC病例的诊断率，结果见表1。

表164例肝癌患者GP73和AFP的阳性率(%)

3讨论

本课题对各组进行了GP73、AFP的检测，并对它们的敏感性、特异性和准确性进行统计比较。单项检测血清GP73诊断PHC敏感率为76.6%，优于单项检测血清AFP诊断PHC的敏感率59.4%，差异有统计学意义（x2=4.342,P＜0.05）。Block等在研究中发现，GP73诊断PHC的敏感度为81.2%，特异度为92.7%,与Wang等报道的结果较为一致，且对于早期PHC的诊断，GP73在敏感性和特异性方面优于AFP。国内毛一雷等在173例样本研究中，GP73敏感性达到76.9%，特异性达到92.8%。而AFP检测本组肝癌的敏感性为48.6%，GP73的敏感性要远高于AFP，与本课题研究结果一致。因此,GP73诊断PHC的价值要优于AFP，可能成为诊断PHC尤其是早期PHC更好的血清标志物。

本研究对GP73与AFP联合检测进行了数据统计，通过数据分析可以看到，GP73与AFP联合检测诊断PHC的敏感率为90.6%，明显高于GP73和AFP单项诊断原发性肝癌的敏感率，差异显著，有统计学意义，特异性稍有下降，但差异不明显，无统计学意义（P＞0.05）。国内张祖平等在160例标本的研究中发现，GP73与AFP联合诊断PHC敏感性达到95.3%，特异性达到85.9%，与本研究结果一致。可见，通过GP73与AFP的联合诊断，能有效地提高PHC诊断的敏感性。通过GP73与AFP的联合检测，还可以提高二者检测PHC的互补性。GP73可以作为恶性肝病的独立指标，可以有效的检测出AFP阴性的PHC患者，也可与AFP互补应用于临床诊断。国内胡劲松研究结果显示，胆管细胞型肝癌AFP与健康人中AFP比较无差异，而胆管型肝癌患者中GP73要明显高于正常健康人。在我们研究的病例中，AFP阴性的26例PHC患者中有19例GP73为阳性，其检测阳性率达73.1%，从而使AFP和GP73的总阳性率高达90.6%。所以通过GP73与AFP的联合，可以明显的提高检测原发性肝癌的敏感度，尤其是对阴性的肝癌患者，特别是早期的胆管型肝癌，有一定的诊断价值，从而能够达到早期诊断，早期治疗的目的。

参考文献

[1]张祖平,张德忠,吴耀震.血清GP73联合AFP对PHC的早期诊断价值探讨[J].放射免疫学杂志,2010,23(2):205-206.

[2]胡劲松.血清GP73对原发性肝癌诊断的实验研究[D].湘雅:中南大学,2010.