高效液相色谱法测定多西他赛注射液中多西他赛的含量

高效液相色谱法测定多西他赛注射液中多西他赛的含量

郭舒文通讯作者

浙江大学医学院附属第一医院浙江杭州310006

【摘要】目的：建立多西他赛注射液含量测定的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为AgilentZORBAXSBC18柱（150×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-甲醇-水（30∶30∶40），流速为1.0mL/min，检测波长为230nm，，柱温30℃，进样量10μL。结果：多西他赛含量为标示量的98.2％，多西他赛的浓度在75～130μg/mL范围内线性关系良好（y=234.46x+137.48，r=0.9999），平均加样回收率为99.25%，RSD为0.99%（n=6）。结论：所建方法简便，快速，准确度高，线性良好，适用于多西他赛注射液的质量控制。

【关键词】多西他赛注射液；含量测定；高效液相色谱法

多西他赛注射液为淡橙黄色至橙黄色澄明液体，适用于先期化疗失败的晚期或转移性乳腺癌的治疗，以及使用以顺铂为主的化疗失败的晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。临床研究表明，对于蒽环类耐药乳腺癌，多西他赛较紫杉醇有更高的有效率。多西他赛作为一种紫杉烷类抗肿瘤药物，由于其抗肿瘤效果大大优于紫杉醇，近年来在临床抗肿瘤领域的应用范围日益拓宽，广泛用于乳腺癌、肺癌、前列腺癌等多种肿瘤的治疗。到目前为止，多西他赛是蒽环类耐药乳腺癌的二线治疗中最有效的药物，在非小细胞肺癌单药治疗和联合化疗中，多西他赛是最有效的药物之一。为保障患者的用药安全，本文建立多西他赛注射液含量测定的方法，以利于做好多西他赛注射液的质量控制。

1仪器与试药

1.1仪器

HP-1100型高效液相色谱仪（安捷伦科技公司）；岛津SPD检测器；METTLER-204E分析天平（梅特勒公司）。

1.2试药

多西他赛（规格0.5ml，20mg，生产企业：江苏奥赛康药业股份有限公司），多西他赛对照品（中国药品生物制品检定所提供），甲醇（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯），乙醇（国药集团化学试剂有限公司，分析醇），乙腈（国药集团化学试剂有限公司，色谱纯），水为注射用水。

2.测定方法与结果

2.1色谱条件的选择

色谱柱：AgilentZORBAXSBC18柱（150×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-甲醇-水（30∶30∶40），流速为1.0mL/min，检测波长为230nm，柱温30℃，进样量10μL。多西他赛HPLC专属性色谱图如图1所示。

柱温的选择方面，分别测定了在15、20、25、30、35℃柱温时的色谱图，通过比较各种柱温下的色谱图，发现在30℃的柱温下，峰形和半峰宽相对都比较好，因此柱温选择30℃。

2.2标准曲线绘制

精密称取干燥至恒重的多西他赛对照品2.00mg，置10mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。分别进样5、10、20、30、50μL。回归方程y=234.46x+137.48，r=0．9999），结果表明多西他赛的浓度在75～130μg/mL范围内线性关系良好。

2.3供试品溶液的制备

精密量取多西他赛样品100μL，置10mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液2ml，进样10μL，测得峰面积，计算多西他赛含量。多西他赛含量为标示量的98.2％。

2.4精密度

吸取多西他赛供试品液10μL进样，连续5次，测量峰面积，RSD=0.96％。

2.5稳定性试验

取同一供试品溶液，照上述色谱条件分别于0、2、4、6、8h进样，测定峰面积，计算得出RSD=1.1％，供试品溶液在8h内稳定。供试品稳定性试验数据如表1所示。

3.结论

所建方法简便，快速，准确度高，线性良好，适用于多西他赛注射液的质量控制。

4.讨论

多西他赛（Docetaxel）作用与紫杉醇（PTX）相同，为M期周期特异性药物，促进小管聚合成稳定的微管并抑制其聚解，从而使小管的数量显著减少，并可破坏微管网状结构。体外实验表明，对多种小鼠及人体肿瘤细胞株有细胞毒作用，抗瘤谱较PTX广。对晚期乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌有较好的疗效。对头颈部癌、胰腺癌、小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、软组织肉瘤也有一定的疗效。

多西他赛为紫杉类药物，其药理作用为通过促进微管双聚体装配成微管，同时通过防止去多聚化过程而使微管稳定，阻滞细胞于G2和M期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增殖。多西他赛的药理作用比紫杉醇强，在细胞内浓度比紫杉醇高3倍，并在细胞内滞留时间长，其对微管亲和力是紫杉醇的2倍；作为微管稳定剂和装配促进剂，活性比紫杉醇大2倍；作为微管解聚抑制剂，活性比紫杉醇大2倍。在体外抗瘤活性试验中，已证实多西他赛的抗瘤活性是紫杉醇的1.3~12倍。

多西他赛的临床应用为静滴：每次135mg/m2或175mg/m，每3周1次。用于乳腺癌，每次175mg/m，每3周1次。用于非小细胞肺癌，每次175～200mg/m，每3周1次。也可用于乳腺癌淋巴结阳性患者的辅助治疗。

在多西他赛开始滴注的最初几分钟内，极可能发生过敏反应。如果发生过敏反应的症状轻微，如脸红或局部皮肤反应，则不需中止治疗。如果发生严重过敏反应如低血压，支气管痉挛或全身皮疹/红斑，则需立即停止滴注，并进行对症治疗。对已发生严重不良反应的病人，不能再次应用。

皮肤反应常表现为红斑，主要见于手﹑足，也可发生在臂部，脸部及胸部的局部皮疹，有时伴有搔痒。皮疹通常可能在滴注多西他赛后一周内发生，但可在下次滴注前恢复。严重症状如皮疹后出现脱皮则极少发生。可能会发生指（趾）甲病变。以色素沉着或变淡为特点，有时发生疼痛和指甲脱落。此外，体液潴留和水肿，毛细血管通透性增加及体重增加，当累积剂量达400mg/m后，可出现下肢体液潴留，甚至发展至全身水肿，体重可增加3kg以上，一般停止治疗后液体潴留逐渐消失。极少数患者可出现胸腹腔积液、心包积液。有报道极少数病例发生胸腔积液，腹水，心包积液，毛细血管通透性增加以及体重增加。经过4周期治疗或累积剂量400mg/m2后，下肢发生液体潴留，并可能发展至全身水肿，同时体重增加3公斤或2公斤以上。在停止多西他赛治疗后，液体潴留逐渐消失。为了减少液体潴留，应给病人预防性使用皮质类固醇。

药物相互作用方面，多西他赛与顺铂联合使用时，宜先用多西他赛，后用顺铂，以免降低本品的清除率；而与恩环类药物联合使用时，给药顺序与上述相反，宜先给予蒽环类药物，后给予多西他赛。多西他赛与酮康唑之间可能发生相互作用，同用时应格外小心。

需要注意的是，多西他赛由于可能发生较严重的过敏反应，应具备相应的急救设施，注射期间建议密切监测主要功能指标。在肝功能异常患者﹑使用多西他赛高剂量治疗患者和即往接受铂类药物治疗的非小细胞肺癌患者，使用多西他赛剂量达100mg/m2时，与治疗相关的死亡的发生率会增加。所有患者在接受多西他赛治疗前，都需预服药物，以减轻体液潴留的发生。预服药物只包括糖皮质激素类，如地塞米松，在多西他赛注射头一天开始服用，每日16mg，服用4～5天。在多西他赛治疗期间，可能发生外周神经毒性，如果反应严重，则建议在下一疗程中减低剂量。如已观察到患者的皮肤反应有肢端局限性红斑伴水肿脱皮等此类毒性，可能导致中断或停止治疗。

参考文献：

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