HPLC法测定茴三硫片中茴三硫的含量

HPLC法测定茴三硫片中茴三硫的含量

刘志斌

哈尔滨市中医院150000

【摘要】目的建立茴三硫片中茴三硫含量的HPLC方法方法采用高效液相色谱法(HPLC)、C18为色谱柱填充料、甲醇-水体系为流动相（比例80:20）、流速1.0、检测波长348nm。结果茴三硫在10.5~50.28mL范围内，其浓度与吸收峰面积线性关系良好(r=0.9998)，加样回收率达到99.2%(RSD=0.49%)结论本法具有准确度高、测量稳定等优点，可以推广应用。

【关键词】高效液相色谱法；茴三硫；有效成分测定

茴香脑三硫酮(AnetholeTrithione)简称茴三硫，具有降低血液胆固醇含量、促进唾液分泌、抑制血小板凝集等功能。该药物能增强肝脏谷胱甘肽(GSH)水平，还能明显增强谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)、谷胱甘肽硫转移酶(GSH-S-Tx)以及谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)的活性,降低谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性，使得肝细胞功能活跃、胆汁分泌量上升，从而起到利胆的作用。适用于胆结石、胆囊炎、急慢性肝炎等病症的治疗，对于长期处以放射性环境或者接触肝毒性物质的工作者有保护作用。茴三硫口服吸收见效极快，药理清晰确切，是一种优秀的口服药剂。本文讲述的HPLC法是替代紫外分光光度法测定茴三硫片有效盛饭含量的方法。

1、仪器与试药：

高效液相色谱仪一套（包括以下配件：美国奥泰AltechModel426HPLCPump；AltechUVIS201型紫外检测器；HT-230A型柱恒温箱；ChromatographyDataSystem色谱工作站；美国Rheodyne7725型液相色谱进样器），C18色谱柱（4.6mmx250mm），岛津AUW-120D型电子天平；国产（北京普析通用仪器有限责任公司产）TU-1800SPC紫外-可见分光光度计，茴三硫片，自制及市售样品（成都国嘉生物制药股份有限公司产），茴三硫对照品（中检所100489-200501），甲醇（色谱纯），去离子水。其他药剂均为分析纯。

2、方法与结果

2.1色谱条件

流动相：甲醇-水80:20；检测波长：348nm；流速：1.0；柱温：35摄氏度；进样量：20；理论板数：以茴三硫峰计算，不低于5000。

2.2茴三硫对照品的制备

精密称取茴三硫对照品10mg，置入100mL容量瓶中，加入适量甲醇将其溶解，然后取流动相淋洗剂定容至100mL，摇匀，即得茴三硫溶液对照品。将其放入冰箱中保存备用。

2.3茴三硫供试品的制备

将茴三硫片研成细粉，精密称取适量粉末（约相当于20mg茴三硫）加入100mL容量瓶中，用3mL甲醇将其溶解，然后用流动相定容至刻度，摇匀，滤过，即得茴三硫供试品溶液（茴三硫浓度约0.2）供后续实验使用。

2.4系统适用性试验

取茴三硫对照品溶液与供试品溶液，用流动相将其稀释，达到浓度约为20为止，然后按照2.1中的色谱条件进样，记录色谱图如下：

从图中可得结论：茴三硫对照品与供试品的主成分保留时间一致，均为约500s。

2.5标准曲线

精密称取62.8mg茴三硫对照品，置入25mL容量瓶，溶于5mL甲醇之中，再用流动相稀释定容至刻度；将一次稀释液精密量取1mL至另一只25mL容量瓶中，用流动相再次稀释定容至刻度，摇匀。分别精密量取二次稀释液1mL、2mL……5mL置于10mL容量瓶之中，用流动相最后一次稀释定容到刻度，摇匀，依次进样20至色谱仪中，记录谱图。以浓度C为横坐标、峰面积S为纵坐标作线性回归，得回归方程：S=79825C–40262，r=0.9998。故茴三硫浓度和峰面积在10.5~50.24之间均具有良好的线性关系。

2.6精密度试验

精密量取浓度为20.096的茴三硫溶液（该浓度处于标准曲线的线性区间之内），连续进样5次，分别记录峰面积，结果如下：997463、996719、998547、997341、998974，平均峰面积等于997811，RSD为0.32%；结果证明测量的精密度相当良好。

2.7药品稳定性试验

2.7.1酸、碱、氧化、光照条件稳定性

取三只棕色瓶和一只无色瓶；精确量取适量的茴三硫，分成四份；前三份分别装入棕色瓶中，各自用1的盐酸、1的氢氧化钠溶液、3%的过氧化氢溶液制成茴三硫浓度为0.2的溶液，水浴加热2h后自然冷却、酸碱性溶液中和至中性，然后用流动相定容；第四份茴三硫配成与前三份浓度一致的溶液，装入无色瓶中，于强光（~20000lx）下照射2h，照射完毕后定容。分别取20酸性、碱性、氧化、强光环境样品溶液置入色谱仪，各自记录色谱图20min。结果表明，茴三硫在酸性、碱性、氧化性环境中均具有一定的稳定性，但是在强光条件下稳定性一般，有明显的分解现象。

2.7.2药品随时间衰减的稳定性试验

取本品研成细粉，精密称取适量（约相当于20茴三硫）3份，分别加入100mL容量瓶中，用3mL甲醇将其溶解，再用流动相稀释定容。滤过之后，取1mL滤液用流动相稀释10倍，制成待测液。将待测液取20置入色谱仪，测量主要色谱峰面积、记录；然后每隔4h测量记录一次色谱峰面积，直至16h。测量的结果如下：

2.8加样回收率实验

精密量取同一批生产的茴三硫药品样品6份加入10mL容量瓶中（相当于每份样品含0.68mg茴三硫），分别加入茴三硫对照品形成低、中、高量加样回收测试品，按照标准步骤测定并计算回收率，具体测量结果见下表：

2.9样品测定

取2.2中配好的茴三硫供试品溶液适量，置于色谱仪中进行测定，记录色谱图，然后按照2.5中计算获得的峰面积-茴三硫含量公式计算含量。

3、讨论

传统茴三硫含量的测定一般采用紫外分光光度法，但这一方法具有专属性不足、准确度偏低等缺点。本文作者曾经尝试过多种色谱流动相，包括乙腈-磷酸盐缓冲液体系、水-乙腈体系等，分离效果均不满意；采用本文的甲醇-水体系之后，茴三硫的分离状况明显改善，吸收峰明显且无干扰峰，基线平稳、没有脱位，取得了令人满意的效果。本文提出的高效液相色谱法测量茴三硫制剂中有效成分的含量，具有抗干扰性强、准确度高等优势，适合替代紫外分光法对茴三硫制剂的品质进行质量控制。

参考文献

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[2]陈庆先,刘鹏飞,朱晶.高效液相色谱法测定茴三硫片中茴三硫的含量测定[J].中国医药指南,2011,09(30).

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