黄芩中黄芩苷提取纯化工艺优化

黄芩中黄芩苷提取纯化工艺优化

赵忠庆，危菊芬

云南白药集团药品事业部，云南昆明 650500

【摘要】 优化黄芩中黄芩苷的提取工艺。方法：采用正交实验设计，以黄芩苷的提取率为指标，优选黄芩苷的最佳工艺条件。结果：黄芩中黄芩苷的最佳提取工艺为：14倍量的沸水煎煮2次，1h/次，提取液调pH值1～2，80℃保温1小时，弃上清液，沉淀过滤，80℃干燥，粉碎即得。结论：该工艺简单易行，时间周期短，适用于生产。

【关键词】黄芩；黄芩苷；提取；纯化

仪器与材料

多功能提取罐（河南衡阳市药物机械厂）、乙醇、盐酸（河南尔康制药股份有限公司）、氢氧化钠（天津市瑞金特化学品有限公司）、黄芩（云南白药集团股份有限公司，按2015版药典检验合格），黄芩苷标准品（中国药品生物制品检验所）

方法与结果

2.1 色谱条件：C¹⁸烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：甲醇-水-冰醋酸（47：53：0.2）；检测波长：280nm^[3]；流速：1.0mL/min；柱温：25℃，进样量20µL。

2.2 标准曲线的建立：精密称取黄芩苷标准品7.39mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为黄芩苷储备液（黄芩苷浓度为0.02956mg/mL。分别取储备液0、1、2、3、4mL，置于5mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度。另取储备液，分别进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行回归，得线性回归方程Y=2.70811×10^-8X＋0.00148（r=0.99974mg/mL），黄芩苷测定浓度线性范围为0.05912 ̴ 0.2956mg/mL。

2.3 精密度试验：将同一标准品溶液在1d内重复进样3次，连续测定3d，分别计算日内、日间精密度，结果分别为0.47%、1.99%，均小于2%，说明此方法重现性好。

2.4 加样回收率实验：取“2.5”项下样品，加入黄芩苷标准品溶液各1、2、3mL，配成低、中、高浓度各3份，以“2.2”项下方法计算，结果低、中、高 种浓度的加样回收率分别为103.8%（RSD=1.21%）、98.4%（RSD=0.76%）、96.4%（RSD=1.32%。

2.5 单因素提取工艺筛选试验^{[1] [2]}

2.5.1 不同溶媒对黄芩苷含量的影响：将提取次数固定为1次，溶媒倍量固定为10倍（重量比），提取时间固定为1h，分别以70%、95%的乙醇及水为溶媒进行提取，考察不同溶媒对黄芩苷含量的影响，结果70%、95%的乙醇和水中黄芩苷含量（mg/mL）分别为0.1292、0.06452、0.09318。结果表明，三个溶媒中，水的提取率最高，且水做溶媒的生产成本相对较低，故考虑用水做提取溶媒。

2.5.2 不同溶媒倍量对对黄芩苷含量的影响：将提取次数固定为1次，提取时间固定为1h，分别以8、10、12、14、16倍于黄芩药材水进行提取，考察不同溶媒倍量对黄芩苷含量的影响，结果8、10、12、14、16的黄芩苷含量（mg/mL）分别为0.1169、0.1292、0.1532、0.1445、0.09136。结果表明，以10、12、14倍水提取时提取率较高，故在正交试验设计时考虑以10、12、14倍水来考察提取效果。

2.5.3 不同提取时间对黄芩苷含量的影响：将提取次数固定为1次，溶媒量固定为10倍，分别提取0.5、1、2、3h，考察不同提取时间对黄芩苷含量的影响，结果0.5、1、2、3h的黄芩苷含量（mg/mL）分别为0.08423、0.1292、0.1226、0.1033。

结果表明，提取时间0.5h时，提取率较低，故在正交试验设计时考虑以1、2、3h作为提取时间。

2.6正交试验筛选提取工艺^{[1] [2]}

2.6.1 实验设计：根据单因素试验结果，设计正交试验以筛选最佳工艺，试验水平n=3,因素A（提取次数，次）分别为1、2、3；B（提取时间，h）分别为1、2、3；C（加水倍量，倍）分别为10、12、14。以黄芩苷提取率为考察指标，采用L₉(3)³正交表进行试验，结果详见表1。

表1 L₉(3)³正交实验表

2.6.2 数据处理：以黄芩苷含量结果进行直观分析和方差分析，结果详见表2。

对直观分析和方差分析结果进行综合考虑，并结合生产实际（从节约成本的角度考虑）确定最佳提取条件：提取溶媒为水，水加入量为黄芩粉量的14倍，回流提取1，提取2次。

表2 方差分析结果

F_0.05(2,2)=19.00

方差分析结果表明，各因素对黄芩苷含量具有显著影响，其影响大小为C>A>D。

2.6.3验证试验：称取黄芩粉3g共3批，按上述最佳提取工艺条件提取，进行验证试验，结果1、2、3批黄芩苷含量和提取率分别是0.156 mg/ml、10.42%；0.162mg/ml、10.77%；0.163mg/ml、10.98%。分析这3批提取物中黄芩苷含量后表明，3批提取液中的黄芩苷含量均无显著性差异，黄芩苷含量较高，且节约成本。

2.7 酸沉纯化黄芩苷正交实验

2.7.1 酸沉正交实验设计

以折纯黄芩苷量、得率为指标，以pH值、保温温度、保温时间为因素，进行L₉(3)³的正交试验，正交L₉(3)³水平n=3,因素A：pH分别为1～2、2～3、3～4；B：保温温度(℃)分别为60、80、100；保温时间分别为1、2、3 。

2.7.2 酸沉工艺方法

取药材450g，按上述提取正交实验得到的最佳工艺条件进行提取得黄芩苷提取液，将其提取液分为9份，以2.7.1中给出的条件按正交试验设计表3进行纯化条件的选择，得到的沉淀用水洗至中性，干燥即得。

表3 酸沉正交实验表

表3-1 酸沉正交实验得率方差分析表

表3-2 酸沉正交实验折纯黄芩苷方差分析

由方差分析，提取率受pH值影响限制，而折纯黄芩苷受pH值、保温温度因素影响显著，故取A₁B₂C₁为最佳条件。即酸沉条件为，pH值1～2，80℃，保温1小时。

讨论

通过正交实验得黄芩苷最佳提取工艺为：黄芩中黄芩苷的最佳提取工艺为：14倍量的沸水煎煮2次，1h/次，提取液调pH值1～2，80℃保温1小时。

由方差分析结果表明：影响黄芩苷纯度的主要因素是纯化的方法，且有显著的影响，提取方法和粒度没有影响，本实验从节省能源和物力方面考虑，对其工艺进行了优选。

参考文献

[1] 黄群．黄芩的药理活性研究．[J] 辽宁中医药大学学报．2010，12（5）：226-227.

[2] 李子，郝近大．黄芩道地产区形成与变迁的研究．[J] 时珍国医国药．2010，21（12）：3290-3292.

[3] 中华人民共和国药典．2015版一部．中国医药科技出版社．2015.6．

作者简介：赵忠庆（1978~），男，大学本科，2003年毕业于云南中医学院中药系。工程师，执业药师， 任职于云南白药集团股份有限公司，目前主要从事中药制剂生产工艺研究以及生产管理。

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