再造浓缩丸水提取工艺的研究

【摘要】  　　目的优选再造浓缩丸的水提取工艺条件。方法以盐酸小檗碱含量作为主要考核指标，采用正交实验法和高效液相色谱（HPLC）法的分析技术，对水提工艺条件进行优选。结果最佳的水提取工艺为加药材8倍量水，提取3次，1.0 h/次。结论该工艺可行。

【关键词】  再造浓缩丸 水提取工艺 盐酸小檗碱 正交实验 高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo optimize the water extraction process of Zaizaononsu Wan.MethodsThe extraction process was optimized by an orthogonal design and HPLC based on the quantifying of paeoniflorin and Berberine Hydrochloride. ResultsThe optimal process was to extract the raw herbal materials for 3 times with water, 1.0h each time. The ratio of water volume to quantity of the herbal materials was 8∶1. ConclusionThe optimal extraction process is advisable.

　　Key words：Zaizaononsu Wan；  Water extraction；  Berberine hydrochloride；  Orthogonal experiment；  HPLC
   
　　再造浓缩丸系根据国内已上市销售药品“再造丸”改变剂型研制而成。功能舒筋活络，祛风除湿。用于风寒湿痹引起的中风瘫痪，口眼歪斜，半身不遂,腰腿疼痛，手足麻木，筋脉拘挛，行步艰难［1］。该方57味，药物所含成分复杂。据文献资料检索，本方药物中与功能主治有关的水提药材为25味。我们采用正交实验法对水提工艺条件进行优选，选择盐酸小檗碱含量作为水提取的主要考核指标，根据考察结果确定该药最佳的水提取工艺。

　　1  仪器与试药
   
　　岛津LC-10AVP型高效液相色谱仪（单元泵，紫外检测器，浙大N2000色谱工作站）； AS3120B数字超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（含量测定用）；乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为重蒸馏水。

　　2  方法与结果

　　2.1  正交实验设计 采用正交实验法对水提取工艺条件进行优选，以获得最佳工艺条件。方中黄连所含盐酸小檗碱为主要成分，具有较好的水溶性，与水煎工艺相一致，因此选择盐酸小檗碱含量作为水提取正交实验的主要考核指标，水煎煮，其效率主要受到煎煮次数、加水量和煎煮时间3个因素的影响。针对这3个因素，利用L9（34）正交表进行实验。因素水平安排见表1。

　　表1  因素水平（略）

　　2.2  指标成分的测定

　　2.2.1   干膏得率的测定按处方比例，分别称取地龙等药材73.1 g，共9份，按正交表中的实验方案，加水煎煮，滤过，合并滤液，滤液浓缩至稠膏，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，60℃减压干燥至恒重，置干燥器冷却30 min，称重,即得。结果见表2。

　　2.2.2  盐酸小檗碱的含量测定照高效液相色谱法［1］测定。
   
　　色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05 mol/L的磷酸二氢钠溶液（30∶70）为流动相；检测波长为346 nm；进样量10 μl。
   
　　对照品溶液的配制：精密称取盐酸小檗碱对照品5 mg，置50 ml容量瓶中，加盐酸-甲醇（1∶100）使溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取2 ml置10 ml容量瓶中加盐酸-甲醇（1∶100）稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含0.02 mg的溶液）。 供试品溶液的配制：取“2.2.1”项下的干浸膏约0.4 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加盐酸-甲醇（1∶100）25 ml，精密称定，超声30 min，静置，补足减失重量，滤过，即得。
   
　　测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。

　　2.2.3  正交实验及结果根据L9（34）表进行实验，因干膏得率与疗效不成量-效关系，故以含量为主要考核指标进行分析。结果见表2~3。

　　表2   正交实验结果L9（34） （略）

　　表3  含量方差分析（略）

　　2.2.4  实验结果分析直观分析表明，影响水提取效果因素顺序为：煎煮次数＞加水量＞煎煮时间，方差分析结果表明， A因素具有显著性意义，B因素、C因素无显著性意义，可见提取最佳工艺为A3B1C3。鉴于煎煮时间C1＞C3且C因素影响最小，从大生产省时节能等考虑，因此确定A3B1C1与A3B1C3两组工艺方案进行对比实验。结果见表4。

　　表4  A3B1C1 工艺与A3B1C3工艺对比实验结果（略）

　　实验结果表明，两组方案的指标无明显差异，为降低成本，因而选择水提取工艺为A3B1C1，即每次加8倍量水，煎煮3次，1.0 h/次，合并煎液，滤过。

　　3  讨论
   
　　本实验设计的提取工艺，在不影响有效成分的前提下，大大减少了患者的服用量，达到了剂型改制的目的。
   
　　本品药味多，所含成分复杂，盐酸小檗碱含量测定时，采用本实验所述的流动相：乙腈-0.05 mol/L的磷酸二氢钠溶液（30∶70），盐酸小檗碱有良好的峰形，并且与相邻色谱峰能有效分离。

【参考文献】
  　　［1］ 国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］. 北京： 化学工业出版社，2005：432，VID.