简介：目的胰岛素样生长因子-1（IGF-1）具有促进细胞分化、抑制细胞凋亡等多种生物学活性。该研究旨在探讨IGF-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法将传代培养的A549细胞暴露于高氧环境，并以不同浓度IGF-1（1、10、100ng／mL）干预48h，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测细胞存活率，AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡变化，同时用流式细胞仪检测凋亡调控相关蛋白（Bax、Bcl-2）表达水平的变化。结果高氧组细胞存活率为（51-3）％，IGF-1干预组细胞存活率随着IGF-1药物浓度的递增逐渐升高，中、高剂量IGF-1干预组细胞存活率分别为（64±3）％和（88±4）％，与高氧组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05）。高氧组A549细胞凋亡率为（38．3±5．4）％，较空气组（2．4±0．9）％明显增多；高氧组Bcl-2的蛋白表达水平为（72±5）％，较空气组（91±4）％明显下降；高氧组Bax的表达水平为（54±6）％，较空气组（3±2）％明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与高氧组比较，IGF-1干预组细胞凋亡率随着药物浓度的增加逐渐下降，分别为（16．1±4．7）％、（9．2±2．8）％和（6．94±2．5）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。与高氧组比较，IGF-1干预组细胞Bcl-2的表达逐渐增高，分别为（79±4）％、（94±4）％和（100±5）％，而Bax的表达逐渐下降，分别为（26±4）％、（5±2）％和（4±2）％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论高氧明显抑制A549细胞的增殖，促进其凋亡；IGF-1具有促进A549细胞增殖，通过调节凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达，抑制高氧诱导的A549细胞凋亡的作用。

简介：摘要目的研究腺病毒介导的白细胞介素37（IL-37）对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞生长及放射敏感性的影响，探讨IL-37作为新型放疗增敏剂的可能性。方法选择人NSCLC细胞株A549，将A549细胞分为3组：正常A549细胞（对照组）、空病毒转染的A549细胞[NC组，细胞感染复数（MOI）为100]、Ad-IL-37组（含IL-37的腺病毒转染A549细胞，MOI为100）。用蛋白质印迹法检测3组细胞IL-37蛋白表达情况；将3组细胞同时应用4 Gy照射剂量进行照射，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测吸光度（A）值，观察A549细胞增殖情况；流式细胞术观察受照射后各组A549细胞周期变化；蛋白质印迹法检测照射后各组细胞凋亡相关蛋白（bax、bcl-2、Caspase-3、Survivin）表达情况。结果对照组IL-37的相对表达水平为0.17±0.04，NC组为0.29±0.14，Ad-IL-37组为1.17±0.23（F=24.263，P=0.001）。照射后24 h时3组A值差异无统计学意义（F=2.587，P=0.160），照射后48、72、96、108 h时A值差异均具有统计学意义（F值分别为21.662、33.635、33.663、31.909，P值分别为0.005、0.001、0.001、0.001）；照射后24 h时NC组和Ad-IL-37组细胞增殖抑制率差异无统计学意义（t=1.620，P=0.247），照射后48、72、96、108 h时两组细胞增殖抑制率差异均有统计学意义（t值分别为5.414、7.233、15.306、19.035，P值分别为0.032、0.019、0.004、0.003）。IL-37联合可影响细胞周期的变化，对照组S期细胞比例为（36.4±1.0）%，NC组为（31.3±0.6）%，Ad-IL-37组为（27.2±2.9）%（F=12.96，P=0.007），对照组G2/M细胞比例为（20.5±0.8）%，NC组为（24.7±2.9）%，Ad-IL-37组为（41.4±4.1）%（F=27.92，P=0.001）。IL-37能上调照射的A549细胞促凋亡相关因子bax、Caspase-3蛋白水平（F值分别10.31、14.51，P值均为0.01），下调抑凋亡因子bcl-2、Survivin蛋白的表达（F值分别8.95、5.52，P值分别0.02、0.04）。结论IL-37可抑制A549细胞生长，具有潜在的放射增敏作用，这一作用可能通过影响肿瘤细胞的凋亡产生。

简介：摘要目的研究白花前胡丙素（Pra-c）对人肺癌A549细胞B7H3表达的调节作用。方法将人肺癌细胞A549分别用不同浓度Pra-C、50ng/mlIFN-γ及不加药培养基（空白组）处理，用流式细胞学技术检测其B7H3蛋白表达水平，用RT-PCR技术检测B7H3转录水平；构建B7H3荧光报告基因，以不同浓度Pra-C、50ng/mlIFN-γ及不加药培养基（空白组）处理，以双荧光素酶法观察其对B7H3启动子区的作用。结果Pra-C浓度在10μmol/ml～40μmol/ml时，下调B7H3蛋白表达且具剂量依赖性（P<0.05），40μmol/mlPra-C对B7H3蛋白的下调用最强，与50ng/mlIFN-γ组无统计学差异（P＞0.05）；40μmol/mlPra-C可显著下调A549细胞B7H3mRNA转录水平(P<0.05)，且与50ng/mlIFN-γ组无统计学差异（P＞0.05）；40μmol/mlPra-C处理B7H3荧光报告基因可显著下调B7H3启动子相对荧光强度（P<0.001），且与50ng/mlIFN-γ组无统计学差异（P＞0.05）。结论40μmol/mlPra-C能通过下调B7H3启动子区转录，从而下调A549细胞mRNA转录进而抑制性共刺激分子B7H3蛋白。

简介：摘要目的探索卡巴他赛（cabazitaxel，CBZ）对肺癌细胞转移能力与增殖能力的影响及相关作用机制。方法将肺癌细胞A549分为两组，实验组用低浓度50 μg/ml的卡巴他赛进行培养，对照组用加入等体积的溶解剂培养；利用CCK8，平板克隆实验检测两组细胞的增殖能力；利用transwell和细胞划痕实验检测两组细胞的迁移能力；通过蛋白免疫印迹检测MMP2/9（matrix metalloproteinase2/9，基质金属蛋白酶2/9），CDK4/6（cyclin-dependent kinase4/6，周期蛋白依赖性激酶4/6），P16等蛋白的表达量。结果A549细胞实验组与对照组相比，细胞增殖能力减弱；A549细胞平板克隆形成率实验组细胞和对照组分别为17.5%±2.3%和74.8%±4.5%，实验组细胞的平板克隆形成能力下降；蛋白免疫印迹结果显示实验组细胞的CDK4/6表达下调、P16表达上调；细胞划痕愈合百分数实验组和对照组分别为56.2%±3.8%和86.8%±5.2%，实验组细胞的划痕愈合能力下降；Transwell小室结果显示每个视野细胞数实验组和对照组分别为（35±4）个和（78±9）个，实验组的细胞迁移能力下降，蛋白免疫印迹结果表明实验组细胞的MMP2/9表达下调。结论卡巴他赛通过细胞外基质途径导致肺癌细胞A549转移能力下降，通过上调P16从而抑制细胞增殖。

简介：摘要目的研究奥美拉唑（OME）增强多柔比星（ADM）对肺腺癌A549细胞株的毒性作用。方法采用0、2.0、4.0、8.0以及16.0ug/mlOME对肺腺癌A549细胞株进行处理48h，之后采用锥虫蓝法测定A549细胞毒性。OME预处理A549细胞0和24h后，采用MTT法检测A549细胞的半数抑制浓度（IC50），分析不同浓度OME对肺腺癌A549细胞株的毒性作用。结果不同浓度OME处理48h后，锥虫蓝染色，显微镜下均未见蓝染细胞。不同浓度OME预处理0h，ADM对A549细胞的IC50对比无差异，P＞0.05。不同浓度OME预处理24h，ADM对A549细胞的IC50随着OME预处理浓度的增大而逐渐降低，均P＜0.05。结论OME对肺腺癌A549细胞无毒性作用，但能增强ADM对A549细胞的毒性。

简介：目的研究氧化苦参碱在体外对人肺癌细胞（A549）、人肝癌细胞（HepG-2）增殖抑制与促凋亡活性,并进行比较。方法通过MTT比色法和生长曲线法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,采用HE染色、Hoechst33258荧光染色和透射电镜3种方法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞形态的影响及促凋亡作用。结果MTT结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱200、400、800μg/mL浓度组A549、HepG-2细胞存活率均显著降低（P〈0.05、0.01）,半数抑制浓度（IC50）分别为1055.45、774.11μg/mL;生长曲线结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱组HepG-2细胞培养第4、5天及A549细胞第5天细胞数显著下降（P〈0.05、0.01）;在HE染色、Hoechst33258荧光染色和透射电镜形态学观察实验中,氧化苦参碱对HepG-2细胞作用较明显,细胞数量明显减少,同时出现细胞绒毛减少、细胞核变小变圆、固缩等明显的细胞凋亡形态学特征,对A549细胞形态的影响较弱。结论氧化苦参碱具有抑制肿瘤细胞增殖和促进凋亡的作用,对HepG-2作用较强,对A549作用较弱,具有一定的特异性。

简介：摘要目的探讨红芪多糖1(HPS1)联合吉非替尼对肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制。方法MTT法检测不同浓度的HPS1、吉非替尼及二者联用对肺腺癌A549细胞增殖的影响。流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布。实时荧光定量PCR法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。结果各浓度组(50、100、200、400 mg/L)HPS1对A549细胞增殖均有抑制作用，抑制率与浓度和时间呈正相关。HPS1、吉非替尼均可致A549细胞凋亡率增高，且两药联用组较单用吉非替尼组凋亡率明显增加(t＝2.412，P<0.05)。各浓度组HPS1均可降低Bcl-2蛋白表达(P值均<0.05)，增加Bax蛋白表达(P值均<0.05)，具有浓度依赖性；且两药联合处理对Bcl-2和Bax蛋白表达的抑制或促进作用均较单用吉非替尼组增强，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论HPS1联合吉非替尼在抑制A549细胞增殖、促使其凋亡方面有协同作用；其机制可能与降低Bcl-2/Bax mRNA比例相关。

简介：摘要目的研究血管紧张素转换酶2(ACE2)在肺腺癌A549细胞微环境中通过血管内皮生长因子(VEGF)诱导肿瘤血管形成的发生机制。方法将过表达对照质粒(pcDNA3.1组)、ACE2过表达质粒(pcDNA-ACE2组)、干扰对照质粒(shRNA-NC组)及ACE2干扰质粒(shRNA-ACE2组)转染到肺腺癌A549细胞中，48 h后提取细胞蛋白和上清液，利用蛋白质印迹法和酶联免疫吸附测定分别检测细胞及上清液中VEGF的表达。用上述上清液培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，分为pcDNA3.1组、pcDNA-ACE2组、shRNA-NC组、shRNA-ACE2组及shRNA-ACE2+VEGF antibody组(向shRNA-ACE2组条件培养基加入0.5 mg/L的VEGF中和抗体)，分别用MTT、细胞划痕实验、细胞侵袭实验和小管形成实验检测HUVECs的增殖、迁移、侵袭和小管形成能力。结果pcDNA-ACE2组A549细胞及上清液中VEGF的表达量较pcDNA3.1组减少(P值均<0.05)；shRNA-ACE2组A549细胞及上清液中VEGF的表达量较shRNA-NC组增加(P值均<0.05)。pcDNA-ACE2组HUVECs的增殖率、迁移率、侵袭细胞数及小管总长度较pcDNA3.1组下降(P值均<0.05)，shRNA-ACE2组HUVECs的增殖率、迁移率、侵袭细胞数及小管总长度较shRNA-NC组上升(P值均<0.05)，shRNA-ACE2+VEGF antibody组HUVECs的增殖率、迁移率、侵袭细胞数及小管总长度较shRNA-ACE2组明显降低(P值均<0.05)。结论ACE2通过下调肺腺癌A549细胞微环境中VEGF的表达，抑制肺腺癌血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和小管形成能力，抑制肺腺癌体外微血管形成。

简介：摘要目的改良人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的体外培养方法，简化细胞培养步骤。方法在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞培养过程中，复苏及传代时，避免使用离心机离心这一步骤。结果通过和传统细胞培养方法对比，这种改良的方法，培养PANC-1细胞，污染的机会少，特别适用于新手。

简介：目的：构建hHGF-pCDNA3.1表达载体,在中国仓鼠卵巢细胞中获得具有生物学活性的重组人肝细胞生长因子蛋白的高效、稳定表达.方法：RT-PCR扩增人肝脏中hHGF全长cDNA片段,克隆入pCDNA3.1（＋）真核表达载体中,构建hHGF-pCD-NA3.1重组质粒并转染中国仓鼠卵巢细胞,经筛选得到了高效、稳定表达hHGF的细胞克隆,采用RT-PCR和ELISA方法检测hHGF在中国仓鼠卵巢细胞中的表达.结果：酶切及测序结果表明重组质粒构建正确,RT-PCR显示细胞的rhHGFmRNA呈现高水平,ELISA检测hHGF在细胞中的分泌性表达,浓度达10ug/L.结论：成功地在中国仓鼠卵巢细胞中获得了hHGF蛋白的高效、稳定表达.为下一步将表达hHGF的细胞微囊化制备基因工程细胞,并移植用于相关疾病的基因治疗奠定了基础.

简介：目的:探讨肾疏宁防治系膜基质硬化的细胞分子机制.方法:应用细胞培养技术,进行肾小球系膜细胞培养,采取血清药理学方法,制备肾疏宁药物血清,并分为低、中、高三个剂量梯度,利用血管紧张素Ⅱ为刺激因子,在4h、8h、16h、32h四个时间段观察肾疏宁药物血清对正常和病理状态下系膜细胞增殖和分泌系膜基质ColⅣ及FN的影响.应用MTT测定系膜细胞增殖,细胞ELISA测定ColⅣ及FN的含量,RT-PCR检测ColⅣ及FN的mRNA水平.结果:血管紧张素Ⅱ能明显促进MC增殖和系膜基质中ColⅣ及FN的分泌,16h达到高峰,32h时呈下降趋势,肾疏宁血清中、高剂量组对ColⅣ及FN的分泌均有明显抑制作用,并呈现剂量依赖关系.RT-PCR结果也说明肾疏宁血清对正常和血管紧张素Ⅱ刺激下的MC分泌ColⅣ及FN的mRNA表达有下调作用.结论:肾疏宁能明显抑制肾小球系膜基质中ColⅣ及FN的合成与分泌,并在基因水平上对其有影响作用.这可能也是肾疏宁临床治疗MsPGN疗效较佳并且防治肾小球硬化的作用机理之一.

简介：摘要目的探讨miRNA-34b（miR-34b）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达情况及其体外对人NSCLC A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法收集2015年6月至2017年3月山西省肿瘤医院40例NSCLC患者癌组织及癌旁正常上皮组织（距癌灶边缘5 cm以上）标本。向A549细胞分别转染miR-34b序列模拟物（实验组）和无关序列（阴性对照组）。采用反转录、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测各组织和各组A549细胞中miR-34b表达情况；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测实验组和阴性对照组A549细胞增殖活性，Transwell法检测两组A549细胞侵袭能力。结果NSCLC组织中miR-34b相对表达量低于癌旁正常上皮组织（0.52±0.06比1.05±0.17），差异有统计学意义（P<0.001）。实验组A549细胞miR-34b相对表达量高于阴性对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。MTT法检测显示，实验组A549细胞培养24、48h细胞增殖能力（吸光度值）均低于阴性对照组（均P<0.01）。Transwell法检测显示，实验组侵袭的A549细胞数少于阴性对照组[（49.53±5.03）个比（121.00±12.06）个，P<0.01]。结论miR-34b在NSCLC组织中低表达，miR-34b表达上调可抑制NSCLC A549细胞增殖和侵袭。

简介：摘要目的探讨miR-363-3p靶向TWIST1调控非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭的分子机制。方法将体外培养的A549细胞分为空白对照组（细胞未做任何处理）；模拟物对照组（转染miR-363-3p模拟物阴性对照）；模拟物组（转染miR-363-3p模拟物）；后期实验另设：模拟物+ pcDNA组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）；模拟物+ TWIST1组（转染miR-363-3p模拟物和pcDNA3.1-TWIST1过表达质粒）。采用RT-PCR检测细胞中miR-363-3p的表达，Western blot检测细胞中TWIST1蛋白和上皮间质转化（EMT）相关蛋白Vimentin、E-cadherin的表达，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和TWIST1的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果与空白对照组和模拟物对照组比较，模拟物组A549细胞中miR-363-3p表达水平（1.00±0.08、0.97±0.05比3.82±0.45）升高，TWIST1 mRNA （1.00±0.06、0.98±0.06比0.39±0.02）和蛋白的表达水平（0.81±0.05、0.78±0.06比0.42±0.02）降低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与空白对照组和模拟物对照组比较，模拟物组A549细胞Vimentin蛋白表达水平（0.58±0.04、0.55±0.05比0.36±0.03）降低，E-cadherin蛋白的表达水平（0.22±0.02、0.25±0.03比0.47±0.03）增高，迁移细胞数（85.75±5.45、83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（128.26±6.15、125.95±8.05比71.64±5.75）降低，差异有统计学意义（P均< 0.05）。与模拟物对照组比较，模拟物组细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.55±0.05比0.36±0.03）降低，而E-cadherin蛋白表达水平（0.25±0.03比0.47±0.03）升高，迁移细胞数（83.52±6.85比53.05±4.50）和侵袭细胞数（125.95±8.05比71.64±5.75）均减少（P均< 0.05）。TWIST1是miR-363-3p潜在的靶基因。与模拟物+ pcDNA3.1组比较，模拟物+ TWIST1组A549细胞中Vimentin蛋白的表达水平（0.32±0.02比0.42±0.03）升高，而E-cadherin蛋白表达水平（0.56±0.04比0.38±0.03）降低，A549细胞的迁移数（49.45±4.22比67.52±5.05）和侵袭数（72.45±5.73比108.35±6.56）增加（P均< 0.05）。结论miR-363-3p可通过靶向TWIST1调控EMT抑制A549细胞迁移和侵袭。

简介：目的对新型永生化人肝细胞系HepZJ进行安全性研究。方法获取HepZJ培养上清液,通过PCR联合琼脂糖凝胶电泳法进行支原体检测,通过显色基质法进行内毒素检测;将HepZJ细胞悬液经尾iv进入SD大鼠后观察其生存情况并于不同时间点进行剖检,通实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法分析该细胞系的生物分布;将HepZJ细胞悬液sc进入BALB/c-nu裸鼠后分析其致瘤性。结果HepZJ支原体检测电泳图未见阳性条带;内毒素检测浓度〈2EU/mL;SD大鼠尾ivHepZJ后生存情况良好,血液、肺脏、脾脏在不同时间点出现不同程度的GAPDH-Human和TERT-Human基因表达,血液中12h后、肺脏和脾脏中1周后基本被清除,剖检过程中未见肿块形成;裸鼠scHepZJ后无硬性肿物形成。结论新型永生化人肝细胞系HepZJ无支原体、细菌污染,进入体内后无明显副反应及致瘤性,具备应用安全性。

简介：目的探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5(Atg5)调控非小细胞肺癌(NSCLC)自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法无义核酸序列NC(NC组)、miR-21模拟物(miR-21mimics组)、miR-21抑制物(miR-21抑制组)分别转染A549细胞,CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Westernblotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果与NC组比较,miR-21mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg53'-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型Atg53'-UTR的基因报告质粒与miR-21mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021(P<0.05);NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031(P<0.05);NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039(P<0.05)。与NC组比较,3-MA处理降低miR-21mimics转染诱导的A549细胞增殖能力(P<0.05);划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，分为对照组、pcDNA组（转染pcDNA）、CDKN2B-AS1组（转染pcDNA CDKN2B-AS1）和双转染组（转染pcDNA CDKN2B-AS1、pcDNA miR-98-5p）。检测A549细胞中CD-KN2B-AS1、miR-98-5p表达及PCNA、MMP-9蛋白表达，检测A549细胞活性、克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数。结果与pcDNA组相比，CDKN2B-AS1组A549细胞中CDKN2B-AS1表达水平[（2.14±0.14）vs （1.03±0.10）]、各时间点的细胞OD值、细胞克隆数[（314.60±18.13）个比（220.08±12.46）个]、克隆形成率[（85.81±3.06）% vs （60.03±2.85）%]、侵袭细胞数[（233.30±18.98）个vs （140.84±12.30）个]及细胞中PCNA[（0.78±0.08）vs （0.48±0.07）]、MMP-9蛋白表达[（0.75±0.06）vs （0.38±0.06）]水平显著升高（均P<0.05），miR-98-5p表达水平[（0.23±0.03）vs （0.99±0.09）]显著降低（P<0.05）；与CDKN2B-AS1组相比，双转染组A549细胞中CD-KN2B-AS1表达水平差异无统计学意义（P>0.05），miR-98-5p表达水平显著升高（P<0.05），各时间点的细胞OD值、细胞克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数及细胞中PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论lncRNA CDKN2B-AS1通过靶向抑制miR-98-5p表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有促进作用。

简介：摘要目的探讨miRNA-20a在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的A549细胞焦亡与炎症反应中的作用与调控机制。方法培养人肺泡上皮A549细胞，以LPS为刺激物建立细胞焦亡及炎症反应模型，给予LPS+三磷酸腺苷刺激为LPS组，未给予刺激为空白对照组，验证模型是否成功。将A549细胞根据转染物质分为miRNA-20a模拟物（mimics）组、mimics-阴性对照（negative control，NC）组、miRNA-20a抑制物（inhibitor）组和inhibitor-NC组，构建过表达及沉默miRNA-20a的A549细胞模型，各组细胞在转染24 h后给予LPS+三磷酸腺苷刺激。构建TLR4-3'UTR双荧光素酶报告基因载体质粒，包括野生型（WT）载体质粒TLR4-3'UTR-WT1、TLR4-3'UTR-WT2及相应的变异型（MUT）载体质粒TLR4-3'UTR-MUT1、TLR4-3'UTR-MUT2，用双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-20a的靶基因。采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫印迹试验及酶联免疫吸附试验检测各组焦亡标志因子消皮素D（gsdermin D，GSDMD），炎症因子凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase-1，Caspase-1）、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β），以及信号分子Toll样受体4（Toll-like receptor-4，TLR4）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）mRNA及蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞TLR4表达和NF-κB入核情况。结果LPS组A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达量均高于空白对照组（P<0.05），模型建立成功。mimics组miRNA-20a表达量高于mimic-NC组（P<0.05），inhibitor组miRNA-20a表达量低于inhibitor-NC组（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验显示，TLR4-3'UTR-WT与miRNA-20a mimics共转染组的相对荧光值低于TLR4-3'UTR-WT与mimics-NC共转染组（P<0.05）。mimics组LPS介导的A549细胞GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均低于mimics-NC 组（P<0.05），inhibitor 组GSDMD、ASC、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达水平均高于inhibitor-NC 组（P<0.05）。结论在LPS诱导的A549细胞焦亡及炎症反应中，miRNA-20a可能经TLR4/NF-κB 信号通路对细胞焦亡及炎症反应产生抑制作用。

简介：摘要目的探讨砷及其主要代谢产物对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡及促凋亡基因Bad和Bik表达的影响。方法于2020年10月，复苏培养A549细胞，利用细胞计数试剂CCK-8检测细胞活力，确定亚砷酸钠（NaAsO2）染毒A549细胞的浓度和时间。研究分为NaAsO2染毒组和代谢产物染毒组：NaAsO2染毒组染毒剂量为0（对照组）、20、40、60 μmol/L；代谢产物染毒组包括60 μmol/L一甲基胂酸（MMA）染毒组、60 μmol/L二甲基胂酸（DMA）染毒组。采用Hoechst33342/碘化丙啶双染法（Ho/PI）观察细胞凋亡情况，采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（qRT-PCR）检测染毒后细胞Bad和Bik mRNA表达水平，采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测Bad蛋白、磷酸化Bad（P-Bad-S112）蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白及下游蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP1）和细胞色素C（Cyt-C）的相对表达情况，采用分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）3、6、8、9的活性变化。结果与对照组比较，20、40、60 μmol/L NaAsO2染毒组凋亡细胞占比明显增加，差异均有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较，2.0、4.0、6.0 μmol/LNaASO2染毒组Bad mRNA表达水平、Bik mRNA表达水平升高，Bad蛋白、磷酸化Bad蛋白、Bik蛋白、裂解Bik蛋白、PARP1蛋白、Cyt-C蛋白相对表达量均升高，差异均有统计学意义（P<0.05），Caspase 3、6、8、9活性明显上调，差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，DMA染毒组Bad mRNA表达水平为1.439±0.173，差异有统计学意义（P=0.024），Bik mRNA表达水平差异无统计学意义（P=0.788）；MMA染毒组Bad和Bik mRNA表达水平差异无统计学意义（P=0.085、0.063）。与对照组比较，MMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量（0.696±0.023、0.707±0.014、0.907±0.031、1.032±0.016）差异无统计学意义（P=0.469、0.669、0.859、0.771）；DMA染毒组Bad、Bik、PARP1、Cyt-C蛋白相对表达量（0.698±0.030、0.705±0.022、0.908±0.015、1.029±0.010）差异均无统计学意义（P=0.479、0.636、0.803、0.984）。结论NaAsO2可通过引起Bad和Bik蛋白过表达，启动磷酸化Bad的负反馈调节以及Bik的降解，激活下游蛋白PARP1、Cyt-C和Caspase途径，介导A549细胞凋亡。

简介：目的探讨载顺铂的纳米羟基磷灰石对体外培养的人肺腺癌细胞A549增殖及胀亡的影响。方法用机械融合法制备载顺铂的纳米羟基磷灰石粒子．将肺腺癌A549细胞暴露于该粒子中培养。进行形态学观察，MTF法检测载顺铂的纳米羟基磷灰石粒子体外作用于人肺癌A549细胞的量效和时效关系，流式细胞仪分析细胞周期的时相变化。结果载顺铂的纳米羟基磷灰石粒子在体外对人肺癌A549细胞系具有明显的抑制作用．并呈现良好的量效和时效关系。肺癌细胞的生长阻滞于G2／M期，细胞体积增大，胞质空泡化，染色质凝集，胞浆溶解。结论载顺铂的纳米羟基磷灰石粒子具有体外抗肺腺癌系A549的作用，细胞增殖阻滞于G2／M期，阻断细胞周期的进展，导致癌细胞溶解坏死，诱导细胞凋亡是其可能的机制之一。

简介：摘要目的探讨榄香烯联合奥沙利铂诱导人肺腺癌A549细胞生长抑制和凋亡的作用。方法将人肺腺癌A549细胞株进行传代培养，将不同浓度榄香烯以及奥沙利铂作用于细胞株上，MTT法检测A549细胞的增殖抑制率。结果榄香烯作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是54.8μg/ml、27.2μg/ml，奥沙利铂作用于人肺腺癌A549细胞株24h和48h的IC50值是12.2μg/ml、3.8μg/ml。联合组抑制率明显高于单药组。结论两者联合在一定浓度范围内呈现出协同的抗肿瘤作用。