简介：摘要目的探究先天性巨结肠（Hirschsprung's disease，HD）血浆外泌体参与HD发生、发展的可能机制。方法收集2020年4月至2021年7月嘉兴市妇幼保健院收治的14例男性患儿血液样本，将其中7例HD患儿作为实验组，年龄为（18.14±18.17）个月，范围为2~48个月；将年龄范围与实验组患儿相匹配的7例男性非HD患儿作为对照组，年龄为（27.14±13.81）个月，范围为6~48个月。收集14例患儿外周血各8 ml，采用超速离心法分离血浆后提取外泌体。经过透射电镜观察、样品粒径分析、蛋白指标检测和RNA浓度检测鉴定外泌体后，进行外泌体miRNA测序，最后对差异表达的miRNA及其靶基因采用GO富集分析和KEGG富集分析。结果14例样本中均成功分离出外泌体，透射电镜下可观察到形态完整、球形、大小均一的典型外泌体结构。外泌体粒径分析结果显示，实验组与对照组血浆外泌体粒径分别为（144.22±33.98 ）nm和（122.99±21.24）nm，两组间的差异无统计学意义（P=0.186）。血浆外泌体浓度分析结果显示，对照组与实验组血浆外泌体浓度分别为（3.39± 3.90）×109和（3.47±4.04）×1010 Particles/ml，两组间的差异具有统计学意义（P=0.002）。外泌体蛋白指标检测结果显示：①对照组与实验组的外泌体蛋白浓度分别为（0.42±0.17）μg/μl和（0.13± 0.12）μg/μl，对照组浓度显著高于实验组，差异具有统计学意义（P=0.004）；②对照组和实验组的外泌体特异性阳性标志物CD9和CD81均有不同程度的表达，阴性标志物IgG基本没有表达。外泌体miRNA测序结果显示：①实验组RNA浓度高于对照组，（0.66±0.54 ）ng/µl比（0.24±0.10 ）ng/µl，两组间的差异具有统计学意义（P＝0.011）；②共筛选出3个差异性表达的miRNA，包括miR-382上调，miR-29B2和miR-29A下调。运用KEGG分析差异表达的miRNA结果显示，miR-382主要富集于PI3K-Akt信号通路，miR-29A富集于癌症中的蛋白聚糖和Hippo信号通路，而miR-29B2则富集于细胞周期通路。分析miR-382、miR-29B2和miR-29a的靶基因，取完交集后分别得到73、782和770个靶基因。结论HD患儿血浆外泌体中差异性表达的miRNA及其靶基因参与肠神经节细胞的生物学功能、细胞周期等调节，可能与HD的发生、发展机制相关。

简介：摘要目的探讨外泌体miR-218-5p在结直肠癌（CRC）患者血清中的表达水平及其与患者临床病理特征的相关性，评价其在CRC中的诊断效能。方法选择同济大学附属同济医院2016年10月至2018年10月确诊的结直肠癌病例组78例，术前采血并保存血清；选择同期健康体检者40例作为对照组。采用ExoQuick试剂盒提取血清外泌体，应用透射电镜、NTA、蛋白印迹对外泌体进行形态学和分子表型鉴定；利用miRNeasy试剂盒提取血清外泌体中总RNA，实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测各组血清外泌体miR-218-5p的表达水平。以miR-218-5p相对表达水平的中位数为截断值，将CRC患者分为高表达与低表达组，用χ²检验判断其与临床病理特征的关系；受试者工作特征（ROC）曲线判断其在结直肠癌中的诊断效能。结果试剂盒法成功提取到血清中的外泌体。结直肠癌组血清外泌体miR-218-5p的表达水平明显低于对照组［0.566（0.364，0.850）比1.054（0.781，1.709），P<0.001］；其低表达程度与肿瘤大小、TNM分期、肿瘤淋巴结转移和浸润深度显著相关（P均<0.05）；ROC分析表明血清外泌体miR-218-5p诊断结直肠癌的曲线下面积（AUC）为0.827（95%CI 0.754~0.900），明显优于常规的肿瘤标志物癌胚抗原CEA（AUC=0.718，95%CI 0.626~0.811）和糖类抗原CA199（AUC=0.661，95%CI 0.564~0.758）。结论结直肠癌患者血清外泌体中 miR-218-5p的表达下调与多个不良临床病理学因素相关，具有成为结直肠癌诊断生物标志物的潜力。

简介：摘要目的研究血清外泌体miR-744-5p在非小细胞肺癌中的表达变化及临床应用价值。方法回顾性研究。收集南方医科大学南方医院2016年11月至2018年2月就诊的92例非小细胞肺癌患者和91名健康对照者的血清，分离血清外泌体，同时进行RNA提取。应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清外泌体miR-744-5p的表达量，利用受试者工作特征（ROC）曲线评价外泌体miR-744-5p的诊断效能。结果非小细胞肺癌患者血清外泌体miR-744-5p的表达水平（0.012 2±0.019 7）较健康对照组（0.093 6±0.081 9）明显下调，差异有统计学意义（U=553.5，P<0.001）。在肺癌组中，早、晚期肺癌患者血清外泌体miR-744-5p的表达水平（0.011 7±0.013 9，0.012 6±0.021 2）与健康对照组相比，均明显降低（U=72.5，U=471.5，P均<0.001）；肺腺癌外泌体miR-744-5p表达水平（0.010 6±0.020 3）低于肺鳞癌（0.017 3±0.017 8），差异具有统计学意义（U=394.5，P<0.001）。ROC曲线显示血清外泌体miR-744-5p能够有效区分非小细胞肺癌患者和健康人群，曲线下面积为0.933 9（95%CI=0.899 6~0.968 1，P<0.000 1）；外泌体miRNA-744-5p能够有效诊断早期肺癌，曲线下面积为0.943 1（95%CI=0.883 7~1.000 0，P<0.000 1）。结论血清外泌体miR-744-5p有希望作为非小细胞肺癌非侵入性的分子诊断标志物，但尚需要进一步比较研究和扩大验证。

简介：摘要外泌体是一种直径为30～150 nm的膜性小囊泡，由细胞内多囊泡出芽形成，可与细胞膜融合释放至细胞外基质中。脂肪源性间充质干细胞(ADSC)是具有自我更新及多向分化潜能的细胞，通过旁分泌外泌体的作用转运活性物质，调控机体炎症反应，细胞的迁移、增殖、分化以及血管的生成等，从而增强创面修复能力，促进创面愈合，抑制瘢痕形成。慢性创面是指无法通过正常有序而及时的修复过程达到解剖和功能上的完整状态，病程超过4周的创面。当前针对慢性创面的治疗方法多种多样，其中ADSC具有良好的应用前景，但因伦理问题，存在一定的局限性，而外泌体可避开这个问题。本文就ADSC外泌体治疗慢性创面进行综述。

简介：摘要目的筛选慢性乙型肝炎患者经异甘草酸镁（MgIG）治疗前后血浆外泌体的差异蛋白质组。方法分别采集36例MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后的血浆标本（2 ml/例），利用超速离心方法提取血浆外泌体，利用Nanosight NS300颗粒粒度分析仪检测外泌体颗粒的浓度和内径。随机各抽取3例MgIG治疗前后组的血浆外泌体，裂解后提取蛋白，利用胰蛋白酶消化后，用液相色谱串联质谱技术进行label-free差异蛋白质组学分析，筛选出变化倍数1.5倍以上的差异蛋白。利用酶联免疫吸附测定技术对感兴趣差异蛋白的表达量进行验证（n = 30）。计量资料的比较采用配对样本均数的t检验。结果提取的外泌体平均颗粒浓度为2.2×109个/ml，平均粒径为（107±52）nm，与理论血浆外泌体大小值相符，证明成功提取了血浆外泌体。蛋白质组学结果显示，MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后相比较，共筛选出153个差异蛋白，包括85个上调蛋白和68个下调蛋白。酶联免疫吸附实验结果显示，慢性乙型肝炎患者MgIG治疗后组和治疗前组相比较，血浆外泌体中肝细胞生长因子激活剂和肝细胞生长因子样蛋白浓度差异有统计学意义（P < 0.05）。肝细胞生长因子激活剂在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为（45.9±9.4）μg/ml，在MgIG治疗后组为（13.9±2.0）μg/ml。肝细胞生长因子样蛋白在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为（23.4±4.9）μg/ml，在MgIG治疗后组为（13.8±2.2）μg/ml。酶联免疫吸附实验结果均与蛋白质组学结果一致。结论本研究成功筛选出MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后血浆外泌体差异蛋白质组，为研究MgIG治疗慢性乙型肝炎的分子机制提供实验依据。

简介：摘要目的探讨健康者和RA患者血浆来源外泌体对人静脉内皮细胞功能的影响。方法收集健康者和RA患者血浆，用试剂盒分离外泌体后，通过透射电镜观察其形态特征、纳米颗粒分析仪（NTA）测量其大小及免疫印迹实验对表面标志蛋白进行鉴定。通过CCK8、细胞划痕、Transwell小室实验检测外泌体对内皮细胞增殖和迁移侵袭能力的影响；RT-PCR检测细胞分泌缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）含量变化。采用t检验。结果透射电镜观察到双凹圆盘状的囊性小泡，纳米颗粒跟踪分析（NTA）测其直径在50~150 nm，蛋白质印迹法显示出血浆外泌体表面标志蛋白flotillin1和CD81，相对分子质量分别为47 000和26 000。内皮细胞活性随着外泌体浓度增高而降低，但2组差异均无统计学意差义（t=1.86，P>0.05）。与健康者血浆外泌体相比，RA血浆外泌体可显著抑制内皮细胞迁移[（2.24±0.23）和（1.46±0.13），t=6.60，P<0.05]，侵袭能力减弱[（0.673±0.030）和（0.827±0.030），t=8.11，P<0.05]，分泌HIF-1α、VEGF细胞因子的能力也显著降低，差异均有统计学意义[（0.706±0.020）和（0.908±0.040），t=10.10，P<0.05；（0.692±0.010）和（0.841±0.020），t=14.90，P<0.05]。结论血浆来源的外泌体可能在RA并血管损伤中发挥重要的作用。

简介：摘要外泌体是一种具有磷脂双分子层的微小囊泡，可以向受体细胞传递生物大分子进而影响受体细胞的生物过程。巨噬细胞作为重要的固有免疫细胞，在促进人体组织发展、抵御病原体入侵、维持机体内环境稳态方面发挥重要作用。M2型巨噬细胞更与肿瘤等重大疾病的发生发展密不可分。近期，一部分研究者将目光投放在M2型巨噬细胞与外泌体两大热点之上，通过大量的实验发现，M2型巨噬细胞来源的外泌体可通过携带微小核糖核酸(microRNA，miRNA)调节靶基因的表达，进而影响受体细胞相关蛋白的合成，这种作用可对机体生物功能产生影响，进而影响疾病的进程。M2型巨噬细胞分泌的外泌体中miRNA或可成为临床上疾病诊疗的新靶点，可为重大疾病如癌症的诊断与监控、药物载体等方面在个体化医疗领域中提供新的思路与可能。

简介：摘要目的探究非小细胞肺癌（NSCLC）根治性放化疗后血清外泌体来源的microRNA-4429（miR-4429）水平与预后的关系。方法收集NSCLC患者血液标本309例［化疗前（T0），化疗1个周期后（T1）和化疗2个周期后（T2），每时间点各103例］，采用实时荧光定量PCR法检测miR-4429表达水平，分析其与NSCLC根治性放化疗预后的关系。结果103例NSCLC患者1年、2年和3年生存率分别为69.90%、45.63%和34.95%。生存组T1-miR-4429和T2-miR-4429表达水平分别为0.66±0.14和0.77±0.11，高于死亡组T1-miR-4429（0.60±0.06）和T2-miR-4429（0.62±0.11），差异均有统计学意义（t=2.269、6.997，P<0.05）。限制性立方样条拟合COX回归分析结果显示T2-miR-4429与NSCLC生存预后呈线性关系。COX回归分析结果显示TNM分期是NSCLC生存预后的独立危险因素（P<0.05），分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429均是NSCLC生存预后的独立保护因素（P<0.05）。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型的校正曲线与理想曲线重合度较好，C-index为0.713。结论T2-miR-4429表达水平高提示NSCLC生存预后不良风险低。由TNM分期、分化程度、靶向治疗和T2-miR-4429构建的列线图回归模型有一定的区分度和精准度，可辅助评价NSCLC生存预后。

简介：摘要结核病是目前全球严重危害人民健康的传染性疾病之一。外泌体是多种细胞分泌的细胞外囊泡，拥有双层脂质结构，在细胞间信息传递、机体免疫等生理过程发挥着重要作用。外泌体能呈递表面抗原，激活多种细胞免疫因子，介导巨噬细胞杀伤结核分枝杆菌的细胞免疫反应。本综述旨在总结近几年结核病中的外泌体研究进展，为结核病的发病机制的揭示及新型疫苗的研制提供新思路。

简介：摘要：外泌体是由多种细胞分泌且广泛分布于各种体液中，直径最小为40mn，最大为160纳米的囊泡结构，内部富含脂质与蛋白质等物质，同时也广泛存在信使RNA等基因遗传物质，在细胞交流中意义重大，同时也是参与多种肾脏疾病的发生发展，如肾纤维化，移植后急性排斥反应，肾功能延迟恢复，糖尿病肾病等。正是因此证实了该物质在各种肾脏疾病的诊断与治疗中具有积极意义。

简介：摘要目的观察131I标记、内化精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(iRGD)靶向的多功能外泌体(iRGD-Exo-131I)对未分化甲状腺癌(ATC)细胞的杀伤作用。方法蛋白印迹检测Hth7、Cal-62(购自上海生命科学院细胞所)两种ATC细胞中整合素αvβ3的表达；设计包含酪氨酸、iRGD肽段及外泌体膜蛋白(Lamp2b)基因的质粒，将其转染HEK-293T(天津医科大学肿瘤医院)细胞后利用超高速离心法得到靶向外泌体(iRGD-Exo)；共聚焦显微镜观察Hth7细胞对靶向及无靶向外泌体的摄取情况；氯胺T法制备iRGD-Exo-131I；细胞毒性实验验证iRGD-Exo的细胞安全性，并比较131I标记的靶向及无靶向外泌体对Hth7细胞的毒性；构建Hth 7荷瘤鼠模型，当瘤体直径约8 mm时按随机数字表法分为4组(每组5只)，分别尾静脉注射磷酸盐缓冲液、无靶向外泌体(blank-Exos)、blank-Exos-131I或iRGD-Exos-131I溶液，在注射后不同时间点(0、3、6、9、12、15、18 d)记录瘤体体积及荷瘤鼠体重。采用两样本t检验、单因素方差分析统计数据。结果整合素αvβ3在Hth7、Cal-62细胞中明显高表达。共聚焦实验显示外泌体经iRGD修饰后可增强Hth7细胞对其的摄取能力。iRGD-Exo-131I的标记率为(50.16±4.21)%，放化纯>95%。共孵育48 h后，131I标记的靶向与无靶向外泌体组Hth7细胞存活率均显著低于游离Na131I组[靶向组：(40.97±6.55)%比(83.80±5.21)%，t＝12.531，P<0.05；无靶向组：(67.32±8.92)%比(83.80±5.21)%，t＝3.912，P<0.05]；且无靶向组高于靶向组[(67.32±8.92)%比(40.97±6.55)%，t＝5.833，P<0.05]；动物实验亦证实iRGD-Exo-131I能更有效地抑制ATC细胞的增殖。结论成功制备iRGD-Exo-131I，且该标志物较稳定，靶向性良好；体外及体内实验证实其能有效杀伤ATC细胞。

简介：摘要汗腺在人体皮肤中分布广泛，其中外泌汗腺主要起散热排汗作用。汗液分泌由神经系统调控，包括分泌部分泌与导管部重吸收2个过程，涉及钙离子通道、钾离子通道、钠钾氯协同转运蛋白1、Best2蛋白、水通道蛋白5、囊性纤维化跨膜转导调节因子、上皮钠离子通道等多种离子通道和蛋白。该文将对涉及外泌汗腺汗液分泌的神经传导体系、各类离子通道等进行综述，以期为损伤汗腺再生修复及干细胞转化研究提供一定的理论依据。

简介：摘要由于中枢神经系统的复杂性及血脑屏障的存在，中枢神经系统疾病的治疗一直是研究领域的热点及难点。近年来关于间充质干细胞来源外泌体(MSCs-EVS)的研究发现，MSCs-EVS是潜在的中枢神经系统疾病治疗药物，同时，因其具有良好的生物相容性及通过血脑屏障的能力，MSCs-EVS还可作为中枢神经系统疾病治疗药物的天然载体。笔者现围绕MSCs-EVS在中枢神经系统疾病治疗中的应用现状及其作用机制研究进展进行综述，并展望MSCs-EVS作为一种全新治疗方式在中枢神经系统疾病中的应用前景。

简介：摘要目的探讨三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer, TNBC）患者血清外泌体中微小RNA（microRNA-335-5p, miR-335-5p）和重组人血管内皮生长因子受体1（human vascular endothelial growth factor receptor 1, VEGFR-1, FLT1）表达水平及其诊断价值。方法高通量基因表达数据库（Gene Expression Omnibus database, GEO）分析并筛选乳腺癌组织中差异表达的miRNA，于2016年1月至2017年11月收集宁波大学附属人民医院的56例TNBC患者的外周血标本，分离外泌体并鉴定。生物信息学分析筛选出FLT1作为miR-335-5p的靶基因。qRT-PCR分别检测miR-335-5p、FLT1在血清外泌体中的表达水平。分析miR-335-5p与TNBC患者临床病理参数的关系，受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic, ROC）评估miR-335-5p的诊断价值，Kaplan-Meier生存曲线对miR-335-5p和FLT1做生存预后分析。结果TNBC患者血清外泌体中miR-335-5p表达低于对照组，FLT1在血清外泌体中的表达高于对照组（均P<0.05）。miR-335-5p表达情况与TNBC患者组织分级（χ2=22.02，P<0.000 1）、分化程度（χ2=20.67, P<0.000 1）、淋巴结转移有关（χ2=4.667, P=0.030 8）；miR-335-5p诊断ROC下面积为0.809 8（95% CI: 0.726 3~0.893 2, P<0.000 1）。Kaplan-Meier生存分析显示，miR-335-5p低表达组患者的总生存期较高表达组明显缩短（P=0.004 5）。其靶基因FLT1的高表达与低生存率相关（P=0.048 0）。结论血清外泌体源性miR-335-5p可作为预测TNBF预后的重要指标，有望在TNBC的诊断和治疗中发挥作用。

简介：摘要目的探讨轻度炎症状态下人牙髓干细胞（human dental pulp stem cell，hDPSC）产生的外泌体与基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）联合应用对牙髓组织再生的影响。方法分离培养hDPSC，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激hDPSC，超速离心法提取hDPSC经LPS刺激后产生的外泌体（exosomes from lipopolysaccharide-stimulated hDPSC，L-EXO）和正常状态下分泌的外泌体（exosome from normal hDPSC，N-EXO），通过透射电镜和蛋白质印迹法鉴定提取物。将40只6~8 周龄的SD 大鼠通过随机数字表法分为S组（单独应用SDF-1）、L+S组（SDF-1 与L-EXO 联合应用）、N+S组（SDF-1与N-EXO联合应用）和空白对照组（根管内不植入任何物质），每组10只。以双侧下颌第一磨牙为实验牙，建立大鼠无髓根管模型，根据分组分别在根管内植入不同的内容物。植入后30 d过量麻醉处死所有大鼠，取大鼠双侧下颌骨组织，应用HE、Masson及免疫组织化学染色法进行组织学评价。结果HE染色结果显示，除空白对照组外，其他3组根管内均可见新生牙髓样组织，其中L+S组根管内新生组织的量及组织中的细胞数量最多，S组最少。Masson染色结果显示，L+S组矿化组织沿根管壁纵向排列，胶原纤维有序排列，N+S组呈无规律紊乱分布。定量分析各组新生血管面积，结果显示L+S组血管密度［（2.03±0.65）%］显著高于S组［（0.65±0.05）%］及N+S组［（1.06±0.38）%］（F=5.879，P<0.05）。免疫组织化学结果显示，S 组及L+S组的趋化因子受体4表达量显著低于N+S 组（F=8.633，P<0.01）。结论hDPSC分泌的外泌体联合SDF-1可提高根管内新生组织的量和组织中的血管密度，L-EXO的作用较N-EXO强，并且新生组织中胶原纤维及矿化组织的排列更规律有序。

简介：摘要目的探讨人脐带间充质干细胞来源的外泌体（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosome, hucMSC-ex）对缺血缺氧神经细胞增殖、迁移、凋亡、自噬等的影响及其机制。方法培养原代神经胶质细胞，建立氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型，hucMSC-ex孵育之后，MTT检测细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测细胞凋亡，RT-PCR检测凋亡基因mRNA表达水平及Western blot检测其对凋亡蛋白、自噬蛋白及PI3K/AKT信号表达变化。计量资料多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。结果MTT实验结果显示OGD可抑制细胞增殖，hucMSC-ex孵育2 h后，细胞增殖抑制率较对照组下降（P<0.05）；流式细胞技术检测结果显示hucMSC-ex孵育之后可以减少细胞凋亡（P<0.05）；细胞迁移实验显示OGD可降低细胞迁移能力（P<0.01），外泌体孵育之后细胞迁移能力增强（P<0.05）。RT-PCT技术及Western Blot检测结果显示，OGD可以诱导细胞发生凋亡与自噬，hucMSC-ex可激活PI3K/Akt信号通路，抑制Bax与Caspase-3蛋白（P<0.05）及mRNA（P<0.01）表达水平，促进Bcl-2蛋白（P<0.05）及mRNA（P<0.01）表达水平；同时，hucMSC-ex可抑制Beclin-1、Atg3和LC3-Ⅱ蛋白表达水平（P<0.05）及Beclin-1、Atg3基因mRNA表达水平（均P<0.01）。结论hucMSC-ex可促进OGD神经胶质细胞的增殖、迁移，抑制其凋亡及自噬水平，对缺血缺氧损伤性神经胶质细胞具有修复能力，其保护机制与PI3K/ Akt信号通路相关。

简介：摘要目的探讨人诱导多能间充质干细胞来源外泌体（iMSC-Exos）对肺泡巨噬细胞（AM）焦亡的作用及机制。方法通过旋转超滤法提取人诱导多能间充质干细胞（iMSC）培养上清液中的外泌体，并利用透射电镜、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）、高分辨率可调电阻脉冲对提取的外泌体进行鉴定。体外培养大鼠AM细胞株NR8383，取对数生长期细胞分为3组：对照组在AM上清液中加入等量磷酸盐缓冲液（PBS）；脂多糖/三磷酸腺苷（LPS/ATP）组AM经500 μg/L的LPS刺激23 h后再加入5 mmol/L的ATP刺激1 h诱导细胞焦亡；iMSC-Exos组将100 mg/L iMSC-Exos与NR8383细胞共孵育3 h后再给予LPS和ATP刺激。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）和乳酸脱氢酶（LDH）分析检测细胞毒活性；采用免疫荧光法观察细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测AM释放炎性因子白细胞介素（IL-1β、IL-18）水平；采用Western blotting法检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体途径及焦亡相关蛋白消皮素D（GSDMD）表达。结果提取的外泌体经透射电镜观察为圆形囊泡，Western blotting显示外泌体标志物CD63、CD9呈阳性表达，高分辨率可调电阻脉冲检测显示粒子平均直径130 nm，提示外泌体提取成功，能被AM吞噬。与对照组相比，LPS和ATP刺激后，细胞活性下降〔（0.56±0.05）%比（1.06±0.07）%，P<0.01〕，坏死物质LDH释放增加（U/L：1 218.86±22.73比188.30±1.61，P<0.01），炎性因子分泌增加〔IL-1β（ng/L）：958.91±32.78比194.63±5.14，IL-18（ng/L）：870.89±21.86比288.85±24.48，均P<0.01〕，细胞凋亡率〔（55.35±6.19）%比（12.01±1.32）%，P<0.01〕及caspase-1表达均升高（荧光强度：41.06±3.65比2.80±0.54，P<0.01），提示LPS联合ATP可成功诱导细胞焦亡。与LPS/ATP组相比，给予iMSC-Exos预处理后，AM活性增加〔（0.81±0.05）%比（0.56±0.05）%，P<0.01〕，LDH释放减少（U/L：535.05±42.55比1 218.86±22.73，P<0.01），炎性因子分泌减少〔IL-1β（ng/L）：381.82±19.50比958.91±32.78，IL-18（ng/L）：533.77±31.54比870.89±21.86，均P<0.01〕，细胞凋亡率〔（19.74±2.96）%比（55.35±6.19）%，P<0.01〕和caspase-1表达均下降（荧光强度：12.16±1.31比41.06±3.65，P<0.01），同时NLRP3炎症小体途径及焦亡相关蛋白GSDMD表达水平受到显著抑制〔NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin）：0.62±0.06比1.89±0.11，活化的caspase-1蛋白（cleaved caspase-1/β-actin）：0.42±0.07比1.22±0.17，GSDMD蛋白（GSDMD/β-actin）：0.57±0.05比1.22±0.05，均P<0.01〕。结论iMSC-Exos抑制了LPS/ATP诱导的AM焦亡和炎性因子表达，可能与靶向抑制NLRP3炎症小体途径有关，提示iMSC-Exos能抑制AM焦亡，发挥抗炎效应。

简介：摘要目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者血清外泌体来源的miR-223-3p的表达水平并分析其临床应用价值。方法病例对照研究。收集2018年3月至2019年8月就诊于南通大学附属医院血液科的68例新诊断未经治疗的MM患者（Ⅰ期16例、Ⅱ期22例、Ⅲ期30例），同期56名健康对照和30例复发MM患者以及随访到的初诊后经过3个月化疗的患者的血清标本。纯化鉴定血清外泌体，提取RNA，通过RT-qPCR比较各组间血清外泌体中miR-223-3p的表达情况，分析其表达水平与临床病理资料的相关性，并通过ROC曲线评价其诊断效能。结果与健康对照者（0.92±0.29）相比，初诊的MM患者血清外泌体miR-223-3p的表达水平（0.52±0.23）显著下降，差异有统计学意义（U=565，P<0.000 1）。根据MM的国际分期系统，Ⅰ期患者血清外泌体miR-223-3p的表达水平（0.67±0.26）明显高于Ⅱ期（0.47±0.21）和Ⅲ期患者（0.48±0.19）（U值分别为96.5、138，P均<0.05）。此外，在随访的30例MM患者中，经过3个月化疗后血清外泌体miR-223-3p的表达水平（0.69±0.19）较化疗前（0.50±0.22）（U=228.5，P=0.000 8）有所上升。而与健康对照组（0.84±0.21）相比，复发的MM患者组（0.65±0.18）中血清外泌体miR-223-3p的表达水平也是下降的（U=244，P=0.002）。同时，血清外泌体miR-223-3p的表达水平可能与白蛋白低表达（U=411.5，P=0.043 1）和骨损害（U=309，P=0.001）有关。ROC曲线表明血清外泌体miR-223-3p诊断MM的AUC为0.853，高于β2-微球蛋白（β2-MG）（AUC=0.805）和白蛋白（AUC=0.743）。三者联合检测AUC为0.918。结论血清外泌体miR-223-3p可作为MM潜在的辅助诊断指标，将其与β2-MG和白蛋白联合应用可提高MM的诊断效能。

简介：摘要目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）患者腹水来源的外泌体对卵巢癌干细胞样细胞（OCS-LC）干性特征及侵袭能力的影响。方法（1）采用无血清悬浮培养法诱导卵巢癌细胞系A2780细胞生成OCS-LC，并采用成球实验、分化功能实验以及流式细胞仪检测等方法鉴定OCS-LC的成球克隆生长、定向分化潜能、干性标志物CD133表达等干性特征。（2）采用超速离心法提取卵巢癌来源外泌体（OCDE），包括卵巢癌患者腹水来源及A2780细胞来源的外泌体［即腹水来源外泌体（ADE）及细胞来源外泌体（CDE）］，采用透射电镜观察外泌体形态、纳米颗粒跟踪分析（NTA）法测量外泌体粒径、蛋白印迹（western blot）法检测特异性蛋白分子热休克蛋白70（HSP-70）、CD63、CD9的表达等方法对外泌体ADE和CDE进行鉴定。（3）将ADE和CDE分别与OCS-LC共培养，即ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组，以磷酸盐缓冲液（PBS）与OCS-LC共培养作为空白对照组。通过观察3组OCS-LC的成球周期、最大球直径及成球率，评估各组OCS-LC的成球能力；采用免疫荧光染色法检测3组OCS-LC的干性标志物CD133的表达；实时荧光定量PCR技术检测3组OCS-LC中干细胞转录因子八聚体结合转录因子4（Oct-4）和Nanog mRNA的表达；穿膜小室（transwell小室）实验检测3组OCS-LC的侵袭能力。结果（1）OCS-LC的鉴定：成球实验显示，OCS-LC单细胞悬液在无血清培养基中可二次成球生长；分化功能实验显示，OCS-LC细胞球在含血清培养基中改变生长方式，分化成呈贴壁生长的A2780细胞；流式细胞仪检测显示，OCS-LC中CD133阳性（CD133+）细胞的比例为（18.9±0.9）%，显著高于其对照（即A2780细胞）的（0.6±0.5）%（t=38.570，P<0.01）。（2）OCDE的鉴定：透射电镜下观察，外泌体ADE和CDE均可见清晰的脂质双层膜结构，一侧呈凹陷的半球形或杯托样；NTA法测量显示，外泌体粒径主要在30~100 nm范围，平均粒径67.2 nm；western blot法检测显示，特异性蛋白分子HSP-70、CD63、CD9均呈阳性表达。（3）共培养后，成球实验显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组OCS-LC均可继续成球生长，其中ADE+OCS-LC组细胞呈现两种生长方式，大部分细胞继续维持干性成球生长，小部分细胞出现分化，呈贴壁生长；3组OCS-LC的成球周期分别为（15.3±1.5）、（10.3±0.6）、（6.7±0.6） d，细胞球最大直径分别为（100.3±3.2）、（145.2±5.1）和（170.0±2.1） μm，成球率分别为（1.05±0.20）%、（4.15±0.10）%和（10.45±0.25）%，3组分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.05），且CDE+OCS-LC组分别与ADE+OCS-LC组比较，差异也均有统计学意义（P均<0.05）。免疫荧光染色法检测显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组，CDE+OCS-LC组OCS-LC细胞球中呈绿色荧光的CD133+细胞数依次增多，3组OCS-LC细胞球中CD133+细胞比例［分别为（26.6±1.5）%、（46.2±2.1）%和（58.4±2.2）%］比较，差异有统计学意义（F=187.588，P<0.05），且CDE+OCS-LC组较ADE+OCS-LC组更高（t=6.753，P<0.05）。实时荧光定量PCR技术检测显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组OCS-LC中Oct-4 mRNA的表达水平分别为1.04±0.12、3.46±0.24、4.03±0.31，Nanog mRNA表达水平分别为1.00±0.07、1.57±0.32、2.66±0.15，3组分别比较，差异均有统计学意义（P均<0.05），且CDE+OCS-LC组均显著高于ADE+OCS-LC组（P均<0.05）。transwell小室实验显示，空白对照组、ADE+OCS-LC组、CDE+OCS-LC组的侵袭细胞数依次增多，分别为（30±5）、（102±4）、（210±7）个，3组比较，差异有统计学意义（F=820.800，P<0.05），且CDE+OCS-LC组显著高于ADE+OCS-LC组（t=23.202，P<0.05）。结论卵巢癌ADE能够增强和维持OCS-LC的干性特征，促进肿瘤细胞的侵袭转移，但CDE优于ADE。

简介：摘要目的探讨血清外泌体miRNA-155-5p（miR-155-5p）表达与食管鳞状细胞癌（ESCC）患者预后的关系。方法收集2014年10月至2015年12月福建省肿瘤医院收治的336例ESCC患者标本，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清外泌体miR-155-5p的相对表达量。用X-tile软件获得血清外泌体miR-155-5p表达水平的截断值，根据最佳截断值分为miR-155-5p低表达组和高表达组。运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采用Cox比例风险回归模型进行生存分析。结果采用X-tile软件获得血清外泌体miR-155-5p表达水平的截断值为2.340。根据此截断值将患者分为miR-155-5p低表达组（<2.340）51例和高表达组（≥2.340）285例。两组患者年龄（χ2=0.020，P=0.887）、性别（χ2=0.283，P=0.595）、肿瘤部位（χ2=0.063，P=0.977）、分化程度（P=0.474）、临床分期（χ2=3.996，P=0.136）和是否手术治疗（χ2=0.941，P=0.332）比较，差异均无统计学意义。血清外泌体miR-155-5p高表达组患者的死亡风险比低表达组高（HR=1.763，95% CI 1.049~2.961，P=0.032）。结论血清外泌体miR-155-5p表达水平高与ESCC不良预后相关，可作为ESCC患者预后的新型标志物。