简介:目的以解脲支原体1型培养液为模板,PER获得其MB抗原保守区部分基因,进行体外表达和纯化。方法用ExPasy网上软件Protscale分析Uu14个血清型的MB蛋白结构特点及抗原特性,选定14个血清型均在该蛋白同一保守区域有较好的抗原性,针对该序列设计特异性引物,并以UU血清1型DNA为模板进行PER,获得其MB抗原基因相应的片断,克隆入表达载体经测序鉴定后。在大肠杆菌中表达并纯化,以Western—blot鉴定表达产物。结果准确扩增了解脲支原体1型MB抗原保守区基因片段,并在大肠杆菌中获得表达。结论成功构建了pQE30/MB抗原部分保守序列的原核表达载体,在体外成功表达并纯化。表达和纯化的产物具有免疫反应性。
简介:摘要目的人类OTX2基因编码区有1个高度保守的同源结构域(38-l00aa),光间受体视黄类物质结合蛋白IRBP受OTX2调控1,拟初步探讨OTX2保守编码区的63位和72位氨基酸定点突变对下游基因IRBP启动子的影响。方法本研究在otx2的高度保守域构建突变型OTX2表达载体,根据转染质粒类型分为PGL3野生型组、PGL突变型组、PGL3-basic组,检测下游基因IRBP启动子区载体的荧光素酶活性。结果野生型OTX2可使IRBP转录活性提高,3种突变型OTX2则降低了IRBP的启动子转录活性(P<0.05)。与野生型OTX2相比,p.Pro63Gly和p.Leu72Thr均使下游基因转录活性下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论文献已报道的2种OTX2突变显著降低了IRBP启动子的转录活性;63位及72位氨基酸定点突变对IRBP启动子转录活性无影响。
简介:摘要目的将异位妊娠接受药物保守治疗患者的临床护理经验加以归纳总结,为今后的临床护理工作提供指导与借鉴。方法随机抽取2014年6月至2016年3月期间我院收治的3例异位妊娠行药物保守治疗的患者作为研究对象,对其病历资料进行回顾性分析。在常规护理的基础上为患者进行综合性护理干预,比较护理前后患者的情绪变化,统计护理满意情况。将护理措施加以归纳总结。结果汉密顿抑郁量表结果显示,3名患者护理后的情绪均出现了明显的积极性转变,生活质量水平显著提升,差异前后比较存在明显的统计学意义(P<0.05)。另外,3名患者对此次护理工作均持满意态度。结论异位妊娠患者接受综合性护理干预,可有效调节患者的心理情绪且护理满意度较高。因而建议广泛推广应用。
简介:利用PCR技术扩增HCVns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性.HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.
简介:摘要特种实验室是中国石油大学(华东)重要的实验楼,外墙采用了蒸压轻质砂加气混凝土砌块(AAC),该材料内部含有大量的封闭、细小的气泡,具有干密度小、保温性能良好、隔音等优点。采用薄层砌筑工艺灰缝小(2-3mm),有效减少墙体复合应力,从而增加墙体有效强度,使抗震性能大为提高。
简介:目的:克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果:cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论:成功克隆和表达了COPS3cDNA。
简介:目的:探讨Reprimo基因3′非翻译区824位点G>C位点单核苷酸多态性改变与肺癌发生的相关性。方法基因分型用TaKaRa公司的MightyAmpDNA聚合酶法,分别检测36例肺癌患者(癌症组)和23例非癌症患者(对照组)的Reprimo基因3′非翻译区824位点G>C分布,运用χ2检验、Logistic回归分析和Armitage′s趋势检验分析基因多态性、患者性别、吸烟与否、年龄与肺癌发生的相关性。结果两组标本经哈迪‐温伯格平衡检测,对照组在Reprimo基因3′非翻译区824位点G>C基因型GG、GC、CC观测频数分别为21、1、1,理论频数分别为20.01、2.80、0.10,差异无统计学意义(P=0.067);癌症组的GG、GC、CC基因型观测频数分别为33、1、2,理论频数分别为31.17、4.65、0.17,差异有统计学意义(P=0.003)。Logistic回归分析显示,年龄、基因多态性、患者性别和吸烟与否在肺癌发生中均不是危险因素(P>0.05);经Armitage′s趋势检验显示,Reprimo基因3′非翻译区824位点多态性与肺癌发生之间无相关性(χ2=0.00,P=0.946)。结论Reprimo基因3′非翻译区824位点G>C单核苷酸位点多态性与肺癌发生不具有相关性。