简介:摘要目的探讨不同化疗药物联合DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对肺腺癌细胞A549细胞凋亡的影响。方法采用前瞻性随机对照研究方法,分别使用顺铂、紫杉醇、吉西他滨及5-Aza-dC联合药物处理A549细胞。根据药物干预方式的不同分为对照组、顺铂联合紫杉醇(TP)组、顺铂联合吉西他滨(GP)组及5-Aza-dC分别联合TP、GP用药组。使用CCK-8法检测各组药物对A549细胞增殖能力的影响;Transwell迁移、侵袭实验检测各组药物对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。实时荧光定量聚合酶链式反应检测各药物处理对凋亡基因表达水平的影响。对不同药物处理组细胞增殖程度的比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法。结果TP组24、48、72 h不同时间点对肺腺癌细胞的抑制率分别为(20.00±4.23)%、(35.00±2.80)%,(56.00±3.11)%;5-Aza-dC联合TP组对肺腺癌细胞的抑制率显著增加,在24、48、72 h不同时间点分别为(38.00±3.80)%、(50.00±3.25)%、(93.00±4.33)%。GP组24、48、72 h不同时间点对细胞的抑制率分别为(33.00±5.10)%、(54.00±3.80)%、(74.00±2.82)%;而5-Aza-dC联合GP方案可显著抑制细胞生长,24、48、72 h不同时间点对细胞的抑制率分别为(54.00±3.00)%、(67.00±5.30)%、(95.00±1.13)%。同一药物对肺腺癌细胞的抑制作用随着时间的延长而增强(TP组:F=35.93,P<0.001;5-Aza-dC联合TP组:F=97.33,P<0.001;GP组:F=41.73,P<0.001;5-Aza-dC联合GP组:F=79.00,P<0.001),且不同时间点,两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。5-Aza-dC联合TP、GP化疗方案可抑制肺腺癌细胞A549的迁移和侵袭,且比TP或者GP组的抑制效果更强;5-Aza-dC联合GP方案与单独应用GP方案相比,细胞凋亡蛋白Caspase 8的表达水平显著升高(t=5.87,P=0.004);5-Aza-dC联合TP方案与单独应用TP方案相比,细胞凋亡蛋白Caspase 8(t=3.94,P=0.017)、Caspase 6(t=5.81,P=0.004)和BCL2结合蛋白3(BBC3)(t=6.53, P=0.003)的表达水平升高。结论5-Aza-dC可能作为化疗增敏剂来增加肺腺癌细胞的敏感性。
简介:Thenon-classicalHLAclassIantigenHLA-GisanimmunemodulatorwhichinhibitsthefunctionsofTcells,NKcells,andtheDendriticcells(DC).Asaresult,HLA-Gexpressioninmalignantcellsmayprovidethemwithamechanismtoescapetheimmunesurveillance.Inmelanoma,HLA-Gantigenexpressionhasbeenfoundin30%ofsurgicallyremovedlesionsbutinlessthan1%ofestablishedcelllines.OnepossiblemechanismunderlyingthedifferentialHLAGexpressioninvivoandinvitroisthattheHLA-Ggeneisepigeneticallyrepressedinmelanomacellsinvitro.Totestthishypothesis,wetreatedtheHLA-GnegativemelanomacelllineOCM-1AwiththeDNAmethyltransferaseinhibitor5-aza-2'-deoxycytidine(5-AC)andanalyzedwhetherHLA-Gexpressioncanberestored.OurdatastronglysuggestthatHLA-GissilencedasaresultofCpGhypermethylationwithina5'regulatoryregionencompassing220bpupstreamofthestartcodon.Aftertreatment,HLA-GmRNAexpressionwasdramaticallyincreased.WesternblotandflowcytometryshowedthatHLA-Gproteinwasinduced.Interestingly,HLA-Gcellsurfaceexpressiononthe5-ACtreatedOCM-1AcellsismuchlessthanthatontheHLA-GpositiveJEG-3cellswhileasimilaramountoftotalHLA-Gwasobserved.Possiblemechanismsforthedifferencewereanalyzedinthestudysuchascellcold-treatment,peptideloadingandantigenprocessingmachinerycomponents(APM)aswellasβ2microglobulin(β2-m)expression.DatarevealedthattheAPMcomponentcalreticulinmightbeinvolvedinthelowerHLA-GsurfaceexpressiononOCM-1Acells.Takentogether,ourresultsindicatedthatDNAmethylationisanimportantepigeneticmechanismbywhichHLA-Gantigenexpressionismodulatedinmelanomacellsinvitro.Furthermore,tothefirsttime,wehypothesizedthatthedeficiencyofcalreticulinmightbeinvolvedinthelowHLA-Gsurfaceexpressiononthe5-ACtreatedOCM-lAcells.
简介:目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(sodiumbutyrate)和DNA甲基化抑制剂5-aza对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化的影响。方法常规培养大鼠BMSCs,细胞分为4组:依次加入丁酸钠0mM,0.5mM,1.0raM,2.0mM。MTT和流式细胞仪检测不同浓度丁酸钠对细胞增殖和凋亡的影响。4周后利用westernblot和免疫荧光检测4组细胞的心肌细胞特异性蛋白的表达。从上述4组中选出诱导能力最强的丁酸钠组与5-aza组成4个实验组:阴性对照组,5-aza组,丁酸钠组,5-aza.L丁酸钠组。作用4周后检测心肌细胞特异性蛋白的表达。结果丁酸钠抑制细胞增殖,具有浓度依赖性,而对细胞凋亡没有明显影响。检测发现丁酸钠和5-a.za均能有效诱导BMSCs分化为心肌细胞,丁酸钠诱导分化最适浓度为1.0mM。同时1.0mM丁酸钠诱导分化效率高于5-aza。除此,5-aza和丁酸钠共同作用于BMSCs,其诱导分化能力明显高于其它组。结论丁酸钠能够有效诱导BMSCs向心肌细胞分化,丁酸钠浓度为1.0mM时诱导能力最强,同时诱导分化率高于5-aza。5-aza和丁酸钠一起作用诱导BMSCs向心肌细胞分化的能力明显高于其它组,间接证明DNA去甲基化和组蛋白乙酰化具有协同作用。丁酸钠在有效作用浓度范围内,虽然抑制BMSCs增殖,但是不影响细胞凋亡,表明丁酸钠具有低毒的特性,为以后丁酸钠应用于临床打下实验基础。
简介:目的探讨甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-Aza)对CDH1启动子甲基化状态及舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞侵袭迁移的影响。方法5-Aza处理TSCC细胞株UM1和UM2,倒置相差显微镜下观察处理前后细胞形态及排列情况;划痕试验和Transwell试验检测处理前后细胞迁移和侵袭能力;Westernblot法和免疫荧光检测E-cadherin表达;甲基化特异PCR(MSP)检测处理前后UM1、UM2细胞E-cadherin编码基因CDH1的甲基化状态。细胞相对侵袭率的比较采用χ2检验,P〈0.05为差异有统计学意义。结果UM1细胞呈小圆形、多边形或梭形,细胞排列松散,未见明显的细胞间的紧密连接;UM2细胞则表现为多边形,细胞与细胞之间紧密接触,呈典型的"铺路石"样排列。UM1细胞E-cadherin表达较UM2低,细胞划痕经过48h后完全铺满,而UM2细胞划痕48h后不足75%。加入去甲基化药物5-Aza后,UM1细胞形态稍不规则,以多边、多角形细胞为主,且出现类似UM2细胞的铺路石样排列的细胞团,可见细胞间的紧密连接,细胞划痕经过48h后仍不足70%,细胞相对侵袭率为加药前的102%(χ2=0.651,P〉0.05),E-cadherin表达上调。MSP结果显示,UM1细胞的E-cadherin编码基因CDH1的呈现过甲基化,去甲基化药物5-Aza作用后其甲基化程度降低。结论5-Aza可诱导E-cadherin编码基因CDH1去甲基化,导致E-cadherin上调抑制其迁移能力。
简介:STUDIESONHETEROMACROCYCLICPOLYETHER(XIV)THESYNTHESISOFSELENACROWNETHERWITHHYDROXYGROUPANDDISELENA-AZA-CROWNETHERHanShengXu;Ju...
简介:Theneedforwide-bandclockanddatarecovery(CDR)circuitsisdiscussed.A2Gbpsto12Gbpscontinuous-rateCDRcircuitemployingamulti-modevoltage-controloscillator(VCO),afrequencydetector,andaphasedetector(FD&PD)isdescribed.Anewautomaticfrequencybandselection(FBS)withoutexternalreferenceclockisproposedtoselecttheappropriatemodeandalsosolvetheinstabilityproblemwhenthecircuitispoweringon.Themulti-modeVCOandFD/PDcircuitswhichcanoperateatfull-rateandhalf-ratemodesfacilitateCDRwithsixoperationmodes.TheproposedCDRstructurehasbeenmodeledwithMATLABandthesimulatedresultsvalidateitsfeasibility.
简介:决定区域3的补充(CDR3)的分析一些由immunoscopespectratyping技术的T淋巴细胞受体(TCR)成功地被使用了在自体免疫的疾病和感染疾病调查TCR的差异。在这研究,我们由immunoscopespectratyping技术在四个正常志愿者的人的外部血淋巴细胞为所有32个TCRAV基因家庭调查了CDR3长度分发的模式。PCR产品在1.5%agarose胶化电气泳动上展出了一个卑微的乐队,这被发现。每个TCRAV家庭在6%上展出了超过8个乐队定序胶化电气泳动。所有TCRAV家庭的CDR3spectratyping与不同CDR3长度显示出标准Gaussian分布,并且CDR3的表示频率在基因家庭之中是类似的。大多数在TCRAV家庭的CDR3在框架重新结合。然而,一些CDR3显示出外面框架基因重新整理。另外,我们发现在一些TCRAV家庭,在最长的CDR3和最短的CDR3之间有18氨基酸差异。这些结果可能是有用的进一步在健康人和疾病状态学习人的TCR基因,TCRCDR3基因全部剧目,和全部剧目飘移的再结合机制。
简介:摘要:在数字时代,无线电和电视已进入一个新阶段,将信息技术、移动互联网控制系统和信号模拟系统结合起来,大大促进了无线电和电视在移动互联网时代的转变和技术发展,为实时广播提供了技术支持这些技术革新使无线电和电视能够进一步扩大应用领域和渠道,扩大其应用范围,并在因特网变革的背景下适应无线电和电视结构调整的需要。