简介：摘要目的探讨神经生长因子(NGF)及血小板衍生生长因子(PDGF)对骨折的愈合影响，以及NGF与PDGF在骨折的愈合中是否有协同效应。方法将48只雄性8周龄SD大鼠(北京斯贝福生物有限公司)，采用随机数字表法分为4组，每组12只，分别于骨折断端局部应用NGF(NGF组)、PDGF(PDGF组)、NGF＋PDGF(联合组)、生理盐水(对照组)。各组分别于术后14 d和28 d选取6只大鼠，检测血清中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)含量。处死后检测骨痂中碱性磷酸酶(ALP)含量，苏木精-伊红(HE)染色测定骨痂平均骨小梁宽度(TW)和骨小梁表面成骨细胞指数(IOB)，组间比较采用方差分析，组间采用SNK法进行两两比较。结果术后14 d，NGF组、PDGF组、联合组、对照组血清中VEGF的含量依次为(235.25±16.33)、(245.40±17.84)、(351.45±17.19)、(212.21±17.96) pg/ml，实验组均较对照组升高，且联合组最高(F＝10.459，P<0.05)。术后28 d，NGF组、PDGF组、联合组、对照组骨痂中IOB依次为(356.94±20.30)、(347.35±17.62)、(397.44±22.35)、(301.68±14.20) mm2，其中联合组高于NGF组、PDGF组和对照组(F＝54.992，P<0.05)。结论NGF及PDGF局部应用对骨折愈合均有促进作用，且NGF及PDGF联合应用对骨折愈合具有协同作用，其协同作用机制可能与促进VEGF表达有关。

简介：摘要目的探讨局部注射神经生长因子(NGF)及碱性成纤维生长因子(BFGF)对大鼠胫骨骨折愈合的影响及其机制。方法选取12周龄清洁级成熟雄性SD大鼠48只，用数字表法随机分为NGF组、BFGF组、NGF＋BFGF组、对照组4组，各12只；每组大鼠按观察时间点不同随机分为术后2周及术后4周2个亚组，每亚组6只。48只大鼠均建立左胫骨骨折模型，并行1 mm克氏针髓内内固定。术后第3天于骨折断端周围局部经皮注射给药：NGF组注射NGF 0.8 μg＋0.3 mL生理盐水，BFGF组注射BFGF 1.2 μg＋0.3 mL生理盐水，NGF＋BFGF组注射NGF 0.8 μg＋BFGF 1.2 μg＋0.3 mL生理盐水，对照组注射0.3 mL生理盐水；每天注射1次，连续注射7 d。术后2周、4周分别行X线摄片，并采集各组大鼠股动脉血液标本后，采用颈椎离断法处死大鼠。取各组大鼠左胫骨骨痂标本，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测碱性磷酸酶(ALP)含量；将骨痂组织制成病理切片，行HE染色，观察组织学特点；应用多功能真彩色细胞图象分析管理系统计算切片中骨组织的骨小梁表面成骨细胞指数(IOB)、骨小梁宽度(TW)、骨小梁面积百分比(TV)；采用蛋白芯片技术检测大鼠血清中骨形成蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的含量。结果(1)术后2周、4周X线摄片：NGF、BFGF、NGF＋BFGF三组大鼠骨折愈合均较对照组快，以NGF＋BFGF组愈合最快。(2)ELISA检测：对照组、NGF组、BFGF组、NGF＋BFGF组术后2周骨痂组织中ALP的含量分别为(110.02±1.92)、(140.87±2.22)、(136.12±1.23)、(187.44±0.90)ng/mL，术后4周骨痂组织中ALP的含量分别为(91.23±1.47)、(106.62±1.64)、(104.83±1.05)、(130.59±1.18)ng/mL；各观察时点4组间比较，NGF＋BFGF组含量最高，组间两两比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(3)组织学观察：不同时间点上NGF、BFGF、NGF＋BFGF三组大鼠在骨痂的生长、骨小梁形成均较对照组明显，且NGF＋BFGF组优于其他组。骨小梁形态学指标测量显示，不同时间点4组间比较，对照组、NGF组、BFGF组、NGF＋BFGF组大鼠骨痂内骨小梁IOB、TW、TV均呈上升趋势，NGF＋BFGF组最高；组间两两比较，除NGF组与BFGF组各指标差异均无统计学意义(P值均>0.05)，其他指标组间差异均有统计学意义(P值均<0.05)。(4)蛋白芯片检测：不同时间点4组间比较，除VEGF含量在术后4周时差异无统计学意义(P>0.05)，VEGF术后2周及BMP-2、IGF-1术后2周、4周时，NGF组、BFGF组、NGF＋BFGF组均高于对照组，NGF＋BFGF组含量最高，组间两两比较，差异均有统计学意义(F＝198.285、368.060、2006.017、33.332、292.643，P值均<0.05)。结论NGF及BFGF均能促进大鼠胫骨骨折愈合，且两者联合应用有协同作用。其机制可能与能够促进骨折愈合过程中VEGF、BMP-2、IGF-1的表达有关。

简介：摘要目的探讨力生长因子（MGF）对破骨细胞活性的影响及其机制。方法使用诱导剂25 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）及30 ng/ml核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）对RAW264.7前体破骨细胞系进行诱导培养，培养7 d后通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法进行鉴定。取培养的破骨细胞，采用Western blot法测定45 ng/ml的MGF对破骨细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路及其活性的影响，即AKT、磷酸化（p）-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR和TRAP在0，4，8和12 h的表达水平，同时采用RT-PCR法从分子水平测定破骨细胞TRAP在0，4，8和12 h的表达水平。用20 μmol/L PI3K/AKT磷酸化抑制剂LY294002联合45 ng/ml MGF作用于破骨细胞，采用Western blot法检测AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR和TRAP在0，4，8和12 h的表达水平。结果M-CSF和RANKL对RAW264.7细胞培养7 d后，能够得到大量TRAP染色阳性的破骨细胞。Western blot结果显示，MGF 作用于破骨细胞后，AKT和mTOR的表达水平随作用时间无明显变化（P>0.05），p-AKT和p-mTOR的表达水平随着作用时间的延长持续增高，分别由0 h的（2.18±0.34）pg/ml和（0.83±0.10）pg/ml增加至12 h的（3.86±0.36）pg/ml和（1.56±0.19）pg/ml（P<0.05），TRAP的表达水平随作用时间显著降低，由0 h的（5.66±0.47）pg/ml降至12 h的（3.76±0.38）pg/ml（P<0.05）。RT-PCR法测定破骨细胞TRAP表达结果显示，MGF抑制破骨细胞TRAP的表达，由0 h的1.02±0.06降至12 h的0.53±0.11（P<0.05）。Western blot结果显示，LY294002联合MGF作用于破骨细胞后，AKT和mTOR的表达水平随作用时间无明显变化（P>0.05），p-AKT和p-mTOR的表达水平显著降低，分别由0 h的（3.28±0.18）pg/ml和（3.29±0.22）pg/ml降至12 h的（2.06±0.34）pg/ml和（2.04±0.20）pg/ml（P<0.05），而TRAP的表达水平随MGF作用时间则差异无统计学意义（P>0.05）。结论MGF通过PI3K/AKT信号途径抑制破骨细胞TRAP的表达，进而抑制破骨细胞活性；LY294002抑制破骨细胞PI3K/AKT信号通路的表达，进一步验证MGF抑制破骨细胞活性的机制。这一发现可为临床预防及治疗骨质疏松症提供新的思路。

简介：摘要目的探讨神经生长因子(NGF)对大鼠胫骨骨折愈合的血管组织及软骨组织的影响及其机制。方法选取雄性3月龄SD大鼠60只，随机分为NGF组及对照组，统一制备右胫骨骨折模型，NGF组使用0.2 ml(1 500 U)NGF局部注射，连续注射10 d；对照组使用0.2 ml生理盐水局部注射。骨折7、21、35 d，检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量，并行骨折局部X线检查，骨痂组织CD31免疫组织化学、番红绿染色及络氨酸激酶受体A(TrkA)免疫组织化学。符合正态分布的计量资料采用均值±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验。结果骨折7、21、35 d，局部X线发现NGF组骨折愈合更快，骨痂面积大于对照组。在骨折7、21 d时，NGF组骨痂中的软骨组织面积高于对照组[骨折7 d：(2 486.09±619.08)、(1 544.13±634.21) μm2，t＝3.361，P<0.05；骨折21 d：(3 127.61±665.13)、(1 904.48±813.89) μm2，t＝3.680，P<0.05]。NGF组血清中VEGF含量在骨折7 d时高于对照组[(77.89±8.06)、(63.72±8.85) ng/L，t＝3.744，P<0.05]，21 d时达到峰值[(109.22±7.76)、(101.29±6.05) ng/L，t＝2.551，P<0.05]，骨折35 d时两组VEGF含量均下降，但NGF组VEGF含量仍高于对照组[(90.88±6.11)、(72.28±4.11) ng/L，t＝7.978，P<0.05]。骨折7、21、35 d，NGF组CD31免疫染色表达更强，CD31染色阳性细胞及血管面积表达高于对照组[骨折7 d：77.60±15.61、55.90±20.71，t＝2.646，P<0.05；(3 329.20±704.71)、(2 420.04±885.31) μm2，t＝2.541，P<0.05；骨折21 d：139.10±29.31、84.30±24.54，t＝4.533，P<0.05；(6 848.63±812.78)、(4 257.55±994.58) μm2，t＝6.379，P<0.05；骨折35 d：48.50±14.56、30.50±11.41，t＝3.076，P<0.05；(2 413.59±753.33)、(1 573.95±650.82) μm2，t＝2.667，P<0.05]。NGF组TrkA受体表达高于对照组(骨折7 d：132.00±43.73、102.00±26.93，t＝2.294，P<0.05；骨折21 d：147.80±21.88、114.00±11.81，t＝2.251，P<0.05；骨折35 d：112.20±40.12、85.80±32.56，t＝2.191，P<0.05)。结论NGF能促进骨痂局部血管组织生长，调节软骨细胞代谢及骨化，从而促进骨折愈合。

简介：摘要目的探讨重组抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2，Her2)单克隆抗体(单抗)的酸碱电荷异质体对其生物活性和亲和力的影响。方法分别用过氧化氢、肽-N-糖苷酶F、羧肽酶B对抗Her2单抗进行氧化、脱糖、酶切处理。用阳离子交换高效液相色谱法和毛细管等电聚焦电泳分析抗Her2单抗的电荷异质体，使用微量差示扫描荧光法分析抗Her2单抗的热稳定性，用细胞增殖抑制法和表面等离激元共振技术分析抗Her2单抗的亲和力。结果脱糖处理抗Her2单抗的酸性电荷异质体增加了5.58%，与免疫球蛋白G Fc受体1(high affinity immunoglobulin gamma Fc receptor Ⅰ，FcGR1A)的亲和力明显减弱，亲和力常数为9.032×10-8 mol/L。氧化和酶切处理抗Her2单抗的热稳定性降低，去折叠温度分别为63.6和59.5 ℃，均低于未处理抗Her2单抗(66.7 ℃)。结论3种处理均会使抗Her2单抗产生电荷异质性，脱糖处理抗Her2单抗与FcGR1A的亲和力减弱，氧化和酶切处理抗Her2单抗的热稳定性降低。

简介：摘要目的探讨完成生长撑开型非融合矫形技术（growth friendly non-fusion technique, GF）治疗早发性脊柱侧凸（early-onset scoliosis，EOS）患者的远期随访疗效。方法回顾性分析2008年8月至2019年10月完成GF治疗的26例EOS患者，男12例、女14例，初次手术时年龄（7.2±2.4）岁。16例患者采用传统生长棒技术治疗，10例患者接受纵向可撑开型人工钛肋技术（vertical expandable prosthetic titanium rib，VEPTR）治疗。所有患者均接受2次以上的撑开手术且完成生长棒及VEPTR治疗后随访时间均超过2年。收集患者初次手术前、术后即刻、完成GF治疗时以及末次随访时的临床资料和影像学资料，同时记录手术相关并发症的发生情况。结果26例患者共接受145次撑开手术，撑开次数为（5.6±2.1）次。患者完成GF治疗时年龄（12.6±1.6）岁，GF治疗撑开时间为（4.7±1.4）年，完成GF治疗后随访时间为（2.9±0.9）年。内固定初次置入术后主弯Cobb角由术前81.2°±17.3°明显降低至41.1° ±13.1°（t=8.124，P< 0.001），末次撑开时增加至48.8°±15.4°。16例患者在末次撑开手术后再行终末融合手术，主弯Cobb角由末次撑开时52.8°±16.1°降低至45.4°±14.8°（t=2.415，P=0.035），矫正率为14.1%±9.4%；余10例患者未行终末融合手术而直接进行长期随访。患者完成GF治疗时及末次随访时主弯Cobb角分别为44.9°±16.2°和45.2°±15.6°；末次随访时与术前比较，主弯Cobb角矫正率为44.3%±15.5%。内固定置入术后胸椎高度及脊柱高度均较初次手术前明显增加，生长棒撑开期间胸椎高度（T1~T12）和T1~S1高度分别增加（3.3±0.9）cm和（5.6±1.9）cm，每次撑开手术后胸椎高度和T1~S1高度分别可获得（0.6±0.3）cm和（1.0±0.4）cm的增加。术后14例患者发生36例次并发症，撑开期间13例患者共发生27例次并发症，完成GF治疗后的随访期间共8例患者发生9例次并发症。结论GF矫形技术可以有效地控制EOS患者畸形的进展，同时维持躯干的生长发育，完成GF治疗后并发症发生率较撑开期间明显降低，但反复撑开后行终末融合手术的矫正率较低。

简介：摘要目的探讨ST段抬高型急性心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction，STEMI)经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention，PCI)术中采用冠状动脉注射重组人尿激酶原(recombinant human prourokinase for injection，rhPro-UK)对患者出血程度、血浆纤溶因子及血管再通的影响。方法2018年11月至2019年11月选取唐山市工人医院治疗的124例STEMI患者作为观察对象，采用前瞻性队列研究方法。按照计算机随机数字法将患者分为观察组63例，对照组61例。均采取血栓抽吸，对照组给予冠状动脉内注射25 μg/kg的替罗非班，观察组给予冠状动脉内注射20 mg的rhPro-UK，之后两组均行急诊PCI治疗。记录两组STEMI患者的出血程度、心肌微循环指标、血浆纤溶因子变化、血管再通情况、心电图ST段回落情况及左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter，LVESD)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)、心脏指数(cardiac index，CI)的变化。结果观察组的磷酸肌酸同工酶(creatine kinase isoenzymes MB，CK-MB)峰值(184.64±21.47)U/L及CK-MB峰值时间(14.32±2.02) h显著低于对照组[(258.94±31.64) U/L)、(16.58±2.09) h]，差异有统计学意义(t＝15.345、t＝6.123，P均<0.001)；观察组治疗后人组织纤溶酶原激活物(human tissue plasminogen activator，t-PA)(0.85±0.28) kU/L显著高于对照组(0.74±0.24) kU/L，人纤溶酶原激活物抑制剂(human plasminogen activator inhibitor，PAI-1)(0.16±0.05) kU/L较对照组(0.32±0.08) kU/L显著下降(t＝2.345，P＝0.021；t＝13.401，P<0.001)；ST段完全回落观察组77.78%(49/63)明显高于对照组54.10%(33/61)(Z＝7.758；P＝0.005)，ST段无回落观察组4.76%(3/63)明显低于对照组19.67%(12/61)(Z＝6.480；P＝0.011)。观察组治疗后7 d的LVEDD(49.37±3.14) mm、14 d的LVEDD(48.34±3.03) mm、7 d的LVESD(33.19±2.23) mm、14 d的LVESD(32.05±2.23) mm显著低于对照组治疗后7 d的LVEDD(50.64±3.03) mm、14 d的LVEDD(49.66±2.83) mm、治疗后7 d的LVESD(34.86±1.73) mm、14 d的LVESD(33.74±1.97) mm，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)；治疗后7 d的LVEF(56.32±4.97)%、14 d的LVEF(59.23±5.11)%、治疗后7 d的CI(3.65±0.22) L/(min·m2)、14 d的CI(3.76±0.21) L/(min·m2)显著高于对照组治疗后7 d的LVEF(54.46±4.87)%、14 d的LVEF(57.18±4.33)%、治疗后7 d的CI(3.48±0.25) L/(min·m2)、14 d的CI(3.56±0.24) L/(min·m2)，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论ST段抬高型急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术中冠状动脉注射rhPro-UK较替罗非班可进一步改善总出血率、血管再通率，显著改善血浆纤溶因子、心肌微循环及心功能，为治疗STEMI患者提供了另一种选择。