简介:摘要目的建立乳腺癌原代细胞成瘤模型,探讨体内转染干扰中电导钙激动钾离子通道(KCa3.1)的表达在乳腺癌增殖、肿瘤新生血管中的效应。方法收集随机选取的23例2018年至2019年于安徽医科大学第一附属医院乳腺外科手术切除的乳腺浸润性癌新鲜组织标本,分离并体外培养人乳腺癌原代细胞,建立22例裸鼠乳腺癌原代细胞成瘤模型;合成胆固醇修饰小干扰RNA(siRNA)并鉴定其转染效率,将成瘤裸鼠随机分为实验组(11例,siRNA干扰)及对照组(11例,阴性对照),检测体内转染Chol-siRNA干扰KCa3.1对乳腺癌成瘤组织增殖及血管生成的影响。应用SPSS 18.0统计软件分析,组间采用χ2检验及t检验。结果预先设计的siRNA1与siRNA2均可对乳腺癌原代细胞中KCa3.1产生有效干扰,蛋白质印迹法(Western blot)检测其干扰效率为(71.03±9.97)%及(65.81±9.18)%(t=21.034、20.883,P<0.05),差异有统计学意义;成功建立22例乳腺癌原代细胞BALB/c裸鼠成瘤模型,成瘤率为70.96%;成瘤组织行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测KCNN4干扰效率,Chol-siRNA组中KCNN4 mRNA表达水平显著低于对照组(t=6.541,P<0.05),差异有统计学意义;免疫组织化学检测成瘤组织肿瘤细胞因子的表达,对照组中VEGF的阳性表达率为(43.42±7.89)%,siRNA组中的阳性表达率为(13.19±4.32)%(t=11.146,P<0.05),差异有统计学意义;对照组中CD31的阳性表达率为(17.49±4.15)%,siRNA组中的阳性表达率为(9.28±5.86)%(P<0.05),差异有统计学意义;对照组中细胞核增殖抗原(Ki-67)的阳性表达率为(88.77±7.61)%,siRNA组中的阳性表达率为(58.17±9.62)%(t=8.274,P<0.05),差异有统计学意义。结论KCa3.1参与调控乳腺癌细胞的增殖及肿瘤血管生成,成功在体内成瘤模型中验证了干预KCa3.1对肿瘤形成的抑制作用。
简介:摘要目的探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)基因敲除后大鼠胰腺转录组基因表达及信号转导通路变化,分析BKCa基因在胰腺中的作用。方法3只BKCa基因敲除成年雌性SD大鼠(BKCa敲除组)由首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系王伟教授馈赠,设3只野生型成年雌性SD大鼠为野生组。取完整的胰腺组织,提取总RNA,采用转录组测序技术进行测序、差异分析软件DESeq2筛选BKCa敲除组和野生组胰腺组织间的差异表达基因,利用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达基因进行生物功能富集分析。采用RT-PCR法对富集分析出的关键基因进行验证。结果BKCa敲除组和野生组大鼠胰腺样本共检测到18 258个基因,经DESeq2软件筛选出348个表达差异基因,其中200个基因在BKCa敲除组胰腺中高表达,148个基因低表达。GO数据库显示214个差异表达基因富集在56个GO条目,其中24个涉及生物学过程,18个涉及细胞组分,14个涉及分子功能;KEGG数据库显示348个差异表达基因中15个富集于PI3K/Akt信号通路,经RT-PCR验证,其关键基因Hsp90ab1、Hsp90aa1、Foxo3a、Col1a2在BKCa敲除组胰腺组织的表达显著高于野生组(P<0.0001),而Thbs1、Pik3r1和Ppp基因表达差异无统计学意义。结论在转录组水平上筛选出BKCa敲除组与野生组大鼠差异表达基因,其显著富集于PI3K/Akt信号通路,为预测BKCa在胰腺中发挥的功能提供了线索。
简介:摘要目的通过对人宫颈癌Hela细胞、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织及人正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)蛋白含量及整合素β1蛋白产物的测定,探讨三种组织中IKCa1蛋白和整合素β1存在的差异及其与人类宫颈癌发生、发展存在的关联。方法(1)复苏及培养人宫颈癌Hela细胞株,同时随机采集临床手术治疗的数十例宫颈CIN组织及正常宫颈上皮组织,在三组标本中加入细胞裂解液,采用低温离心法提取全蛋白质。(2)将提取的全蛋白质应用酶联免疫(ELISA)技术分别研究14例正常宫颈上皮组织、14例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织及14份宫颈癌Hela细胞中IKCa1蛋白和整合素β1的表达差异,初步了解IKCa1蛋白和整合素β1在三种组织细胞中表达差异的趋势。结果(1)宫颈癌Hela细胞中IKCa1蛋白的浓度范围(ng/dl)为25.1821±1.82523,明显高于CIN组织的12.6614±1.08134及正常宫颈上皮组织的9.6486±1.35034,两两比较P均<0.05,其结果差异均存在统计学意义(F=450.65,P<0.0001)。(2)在14例正常宫颈上皮组织中、14例宫颈癌前病变(CIN)组织中、14瓶培养的传代宫颈癌Hela细胞中整合素β1蛋白表达的浓度范围(ng/dl)分别为29.4414±1.50857、24.9107±1.54259、18.2486±1.083482,其两两比较结果存在差异,且差异具有统计学意义(F=165.94,P<0.0001)。结论宫颈癌细胞中IKCa1蛋白的表达明显高于CIN组织和正常宫颈上皮组织,而整合素β1的表达明显低于CIN组织和正常宫颈上皮组织。IKCa1蛋白的表达水平在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、正常宫颈三者间呈递减趋势;而整合素β1的表达水平在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变、正常宫颈三者间呈递增趋势。IKCa1和整合素β1的异常表达与宫颈癌的发生发展密切相关,减低或增加它们表达可能减少及减慢宫颈癌的进展。
简介:摘要大电导钙激活钾离子通道是一种具有钙离子敏感性及电压依赖性且对血管张力调节具有重要作用的膜离子通道,糖尿病时血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道结构及功能发生改变,说明糖尿病血管病变可能与大电导钙激活钾离子通道异常有关。活性氧是体内一类氧的单电子还原产物,高血糖状态下活性氧生成增加。目前越来越多的证据表明高血糖状态下活性氧影响大电导钙激活钾离子通道功能,但具体机制尚不完全清楚。本文主要综述活性氧对糖尿病血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道的影响及其机制。
简介:摘要目的探讨中电导钙激活钾离子通道(SK4)蛋白与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的相关性。方法分析88例甲状腺乳头状癌患者的组织芯片,根据SK4免疫组织化学染色结果分为SK4阳性表达组(55例)和SK4阴性表达组(33例),细胞实验小干扰RNA(siRNA)敲除SK4的甲状腺乳头状癌细胞为实验组,甲状腺乳头状癌细胞为对照组。采用χ2检验分析SK4表达与临床病理特征之间的关系,采用Logistic回归模型分析甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移危险因素。通过Transwell细胞迁移和侵袭实验验证SK4对甲状腺乳头状癌细胞侵袭转移的作用。采用SPSS 22.0(IBM)和Graphpad prism 5.0软件分析。应用χ2检验和Fisher精确概率法分析组间差异,建立Logistic二元回归模型进行单因素、多因素分析。结果88例甲状腺乳头状癌组织中SK4阳性者为55例,阳性率为62.5%。SK4在甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移中阳性表达率为73.3%(33/45),SK4在各临床分期中阳性表达率为,Ⅰ期66.7%(24/33),Ⅱ期23.1%(3/13),Ⅲ期80.6%(25/33),Ⅳ期50.0%(3/6),χ2检验结果显示SK4的表达水平与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移、临床分期之间差异有统计学意义(χ2=4.611、11.762,P<0.05)。SK4的表达与患者年龄、性别、T分期、肿瘤部位之间无统计学意义(χ2=0.724、1.343、2.799、0.637,P>0.05)。Logistic回归分析结果显示SK4阳性和临床分期,是甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移的独立危险因素(OR=3.827、3.882,P<0.05)。SK4敲除后甲状腺乳头状癌细胞的侵袭及迁移能力的明显受到抑制,SK4敲除组侵袭及迁移能力低于对照组(224个细胞 比690个细胞;196个细胞比571个细胞;t=185.900、138.600,P<0.01)。结论SK4的表达与甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移中密切相关。