简介：目的：利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ—RT—PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平，并进行疾病的活动性相关分析。方法：用PrimerExpressv2．0软件，根据GenBank提供的序列，在人IL-2RαmRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA，加入已优化的一步法FQ—RT—PCR反应体系，扩增产物经凝胶电泳后切胶回收，并与pUCm—T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后，用T7RNA聚合酶转录为cRNA，作为FQ—RT—PCR系列浓度标准品。评价FQ—RT—PCR检测IL-2RαmRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA—B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2RαmRNA基因的表达水平，结合血浆可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)浓度，探讨与炎症活动的相互关系。结果：成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107cells／ml，其批内CV8．4％，批间CV9．6％；扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析，证实为IL-2RαmRNA特异性片段。对各30例HLA—B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明：与正常人对照组结果比较，HLA—B27阳性组与HLA—B27阴性组IL-2RαmRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0．01)。IL-2RαmRNA对炎症活动评价的灵敏度为96．7％。结论：FQ—RT—PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点；IL-2RαmRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态，可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

简介：摘要目的研究端粒酶逆转录酶（hTERT）基因对纤维肉瘤生长的影响。

简介：目的与细胞培养和LCR比较考察6种国产PCR试剂盒在检测性传播疾病门诊患者标本沙眼衣原体的诊断价值。方法在北京、上海、南京、天津5家临床医院性传播疾病门诊收集到673份尿道／宫颈拭子标本，分别进行沙眼衣原体培养和PCR检测，对结果不相符合的标本采用连接酶链反应(LCR)复检，比较分析检测结果。结果合格病例616例，36份培养法检测阳性6．3％，PCR检测阳性率分别为23．5％-28．7％。与培养结果比较，各种PCR检测的敏感性均在90％以上。LCR复核标本200份，与之相比，PCR检测的敏感性为83．9％-98．6％，特异性66．7％-94．7％，YI指数0．523-0．881。其中PCR2结果符合性最好(YI指数0．881)。综合分析发现国产PCR技术检测沙眼衣原体的敏感性均在85％以上，特异性均在95％以上。结论国产PCR技术检测尿道／宫颈拭子沙眼衣原体具有较高的敏感性与特异性，可以用于临床检验，实验率质控与监督是本方法得以正确应用的关键。

简介：目的：探讨人类端粒酶逆转录酶（hTERT）基因位点（rs2736100、rs2853676）单核苷酸多态性（SNP）与青岛地区人群乙肝肝癌的易感性。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCRRFLP）检测来自青岛地区的肝癌患者165例、非肝癌乙肝病毒感染者195例、健康对照者402例hTERT基因型分布。结果：（1）肝癌组患者rs2736100位点GG基因型频率显著高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者（均P〈0.05）,携带GG基因型者罹患肝癌的风险分别增加至2.13倍、2.17倍和2.14倍。（2）肝癌组患者rs2853676位AA基因型频率显著高于对照组、非肝癌HBV感染者及所有非HCC者（均P〈0.05）,携带AA基因型者罹患肝癌的风险分别增加至3.42倍、2.39倍和3.02倍。结论：hTERTrs2736100和rs2853676位点基因多态性与肝癌易感性相关。

简介：摘要目的分析放弃抗逆转录酶治疗的原因，为提高服药依从性提供科学的依据。方法采用回顾性调查分析的方法对某县放弃抗逆转录酶治疗患者治疗数据库中所有数据进行描述性统计分析。结果对该县数据库中放弃抗逆转录酶治疗患者中的96例治疗病例进行逐一回顾性分析，结果显示男性患者放弃治疗比例明显高于女性，同性恋途径感染放弃治疗比例高于其他感染途径患者，青壮年放弃治疗比例高于其他年龄组，因为职业原因居家治疗放弃治疗比例低于流动职业患者。结论提高服药依从性要从四个方面着手设立治疗随访期间的服药依从性的长期跟踪教育机制；要从提供或者设立稳定、牢固的职业岗位入手来提高服药的方便性和依从性；设立县级抗逆转录酶治疗药品储备库，提高药品的可及性；将纳入基本药品保障目录，设立抗逆转录酶治疗药品自购报销机制，提高患者服药的自律性。

简介：目的：了解乙型肝炎病毒（HBV）感染者HBV基因型的构成状况及HBVP区基因变异的特点。方法对2010年8月～2011年10月送检的740份HBV感染者血清，采用ABI基因测序仪检测HBV耐药位点和基因型，应用SPSS15.0软件进行统计分析。结果在740例HBV感染者中，检出HBVB基因型40例（5.41%），C基因型695例（93.92%），D基因型5例（0.68%）；与拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦耐药明确相关的位点突变377例（50.95%），其中195例（51.72%）患者既往有明确的应用核苷（酸）类似物（NA）史，在这195例发生耐药的患者中，B基因型12例，C基因型183例，两基因型间耐药发生率无明显差异，他们中包括CHB患者118例，肝硬化患者77例，主要耐药变异模式为M204V＋L180M、M204I、M204I＋L180M和A181V，两组间ALT、HBVDNA载量和主要耐药变异模式检出率均无统计学差异；HBVDNA载量是影响NA耐药的相关因素（x2=0.496，P〈0.001），但耐药与年龄、性别、疾病严重程度（CHB或肝硬化）和ALT水平无显著性相关；此外，本文还检出多处未知变异位点，如rt64、rt126、rt178和rt129等。结论核苷（酸）类似物的使用将伴随病毒变异的发生，其耐药基因变异位点具有一定的特点及规律性，动态监测HBVDNA载量对早期发现耐药有一定的价值。

简介：摘要目的对核苷类逆转录酶抑制剂在艾滋病治疗中的应用效果进行探讨分析。方法随机选取我院在2015年1月至2016年8月接受治疗的80例艾滋病患者病例资料，根据不同的治疗药物原则将这些患者分为观察组与对照组，对照组的患者将采用核苷类逆转录酶抑制剂奈韦拉平、司他夫定以及奈非那韦的治疗；观察组的患者将选用核苷类逆转录酶抑制剂拉米夫啶（3TC）+齐多夫啶（AZT）+Lopinavir(LPV)进行治疗，将两组患者的临床应用效果进行对比分析。结果对照组在治疗前的艾滋病毒抗体光密度（OD）的平均值（2.5346+0.1765），观察组在治疗前的艾滋病毒抗体光密度的平均值为（2.3267+0.3214），对照组在治疗后的艾滋病毒抗体光密度的平均值为（1.7342+0.1723），观察组在治疗后的艾滋病毒抗体光密度的平均值为（0.9654+0.9342），对照组的艾滋病毒抗体光密度的平均值下降率明显的高于观察组，将两组患者的临床治疗效果进行对比分析，P<0.05，差异具有统计学意义。结论在艾滋病应用治疗中使用核苷类逆转录酶抑制剂对治疗的效果有明显的作用，此外联合使用NNRTIs也可以对临床疗效有一个提高作用。

简介：摘要目的探讨中药苦参提取物氧化苦参碱（Oxymatrine）对视网膜母细胞瘤(RetinoblastomaRB)端粒酶(Telomerase)活性表达的影响，研究氧化苦参碱对RB的作用机制,为氧化苦参碱在抗视网膜母细胞瘤临床用药提供更完整的理论依据。方法体外培养视网膜母细胞瘤HXO-Rb细胞,实验组细胞加入氧化苦参碱提取物，对照组细胞中加入等量的培养液，倒置显微镜下观察细胞形态学的变化。同时分别采用不同浓度及不同时段的氧化苦参碱研究其对HXO-Rb的抑制作用。结果氧化苦参碱可抑制HXO-Rb细胞的生长，当浓度为100ug/ml时细胞形态学可明显观察到改变，端粒酶的活性下降，细胞凋亡率比值最大，并且随着时间延长，细胞凋亡增加。

简介：作者报道1例联合抗逆转录病毒疗法治疗急性逆转录病毒综合征引起脱发伴严重脂溢性皮炎的患者。推测其可能是人体对抗逆转录病毒治疗产生免疫应答的一种新表现。

简介：摘要目的建立一种实时荧光逆转录重组酶介导的等温扩增（reverse transcription recombinase-aided amplification，RT-RAA）技术检测寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）的方法，以实现ZIKV的现场快速筛查及诊断。方法通过基因组序列比对，选择ZIKV保守序列设计RT-RAA特异性引物和探针，并用系列稀释的ZIKV重组质粒与毒株核酸验证方法的灵敏性与重复性，通过检测登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒等其他虫媒病毒验证方法的特异性。结果建立的RT-RAA方法可在39 ℃恒温条件下30 min内对ZIKV进行高效扩增，检测系列稀释的ZIKV重组质粒，其95%检测限可达到15拷贝/反应，特异性强，与登革病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒虫媒病毒无交叉反应，且重复性好。结论本研究建立的ZIKV的RT-RAA等温扩增方法，具有反应迅速，无需精密仪器，操作简单等优点，适合于应急快速检测。

简介：目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoVGⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoVGⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoVGⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoVGⅡ的检测,饮用水被NoVGⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。

简介：摘要目的探讨端粒酶逆转录酶(TERE)对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠中性粒细胞凋亡的影响。方法24只SD大鼠按数字表法随机分为正常对照组、ANP 3 h组、ANP 6 h组、TERT抑制剂BIBR1532干预组(BIBR1532组)，每组6只。采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠构建ANP模型，分别在造模后3、6 h收集和分离大鼠外周血中性粒细胞BIBR1532组在造模前腹腔注射2 mg/kg BIBR1532，在造模后3 h处死大鼠，收集外周血中性粒细胞。应用荧光定量PCR法检测中性粒细胞TERT mRNA表达量；蛋白质免疫印迹法检测中性粒细胞TERT蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bax表达量；流式细胞术检测中性粒细胞的凋亡；ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-6水平。取大鼠胰腺组织行病理学检查。结果正常对照组、ANP 3 h组、ANP 6 h组、BIBR1532组大鼠外周血中性粒细胞TERT mRNA表达量分别为1.03±0.26、3.31±1.07、5.21±0.78、1.95±0.49；TERT蛋白表达量分别为0.09±0.03、0.43±0.12、0.58±0.11、0.22±0.07；Bcl-xL蛋白表达量分别为0.19±0.05、0.50±0.07、0.85±0.04、0.40±0.11；Bax蛋白表达量分别为0.29±0.08、0.23±0.03、0.17±0.02、0.43±0.12；细胞凋亡率分别为(10.03±0.74)%、(7.99±0.27)%、(6.65±0.36)%、(22.98±2.86)%。ANP 3、6 h组TERT mRNA和蛋白表达量、Bcl-xL蛋白表达量高于对照组，Bax蛋白表达量、细胞凋亡率低于对照组，而BIBR1532组TERT mRNA和蛋白表达量、Bcl-xL蛋白表达量低于ANP 3 h组，Bax蛋白表达量、细胞凋亡率高于ANP 3 h组，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。正常对照组、ANP 3 h组、BIBR1532组血清TNF-α水平分别为(96.67±27.12)、(382.30±46.33)、(206.88±36.42)ng/L，IL-6水平分别为(43.34±14.50)、(134.21±16.13)、(88.06±13.05)ng/L，ANP 3 h组均高于正常对照组，而BIBR1532组均低于ANP 3 h组，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。BEBR1532组大鼠胰腺组织病理改变较ANP组明显改善。结论ANP大鼠外周血中性粒细胞TERT表达量显著升高，给予TERT抑制剂干预后，ANP大鼠中性粒细胞凋亡率显著升高，表明TERT可抑制ANP大鼠外周血中性粒细胞的凋亡。

简介：目的研究淋巴瘤患者三氧化二砷治疗前后外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶表达的变化以及可能的机制。目的用实时荧光定量PCR目的检测22例患者，比较hTERT的相对值NhTERT（NhTERT=100×hTERT拷贝数／GAPDH拷贝数）的差异，并与正常组20例进行比较。结果三氧化二砷治疗前后淋巴瘤外周血单个核细胞hTERT基因表达均高于正常组，治疗后外周血hTERT基因表达有一定的下降。结论淋巴瘤患者外周血单个核细胞hTERT基因表达对于诊断有一定的意义，诱发hTERT基因表达下降，降低端粒酶活性可能是As203治疗淋巴瘤的机制之一。

简介：摘要目的采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)系统的方式，通过检测结直肠癌患者外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达，分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。方法选取2015年10月至2016年10月于重庆市开州区人民医院确定诊断的结直肠癌患者47例为肿瘤组。同期选取23名健康体检者为对照组。采用荧光定量RT-PCR系统技术检测肿瘤组及对照组外周血液标本中的hTERT mRNA表达的具体情况，并分析其表达与肿瘤特征的关系，分析其对结直肠癌微转移的诊断价值。结果肿瘤组hTERT mRNA阳性表达量为(14.022±7.691)，对照组为(0.467±0.391)，肿瘤组明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。47例结直肠癌患者外周血液中hTERT mRNA阳性表达的情况，与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及浸润程度无关，差异均无统计学意义(均P>0.05)，与是否有淋巴、血行转移及TNM分期有关，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论采用实时荧光定量RT-PCR系统，克服了传统检测技术不能定量只能定性的检测缺点，通过检测外周血hTERT mRNA表达量，可作为有效诊断结直肠癌及是否微转移，有在临床上普及、推广价值。

简介：艾滋病（AIDS）是感染人类免疫缺陷病毒（HIV）所致的免疫系统损害和感染为主要特征的一组综合征,尚无特效的治疗方法,联合高效抗逆转录病毒治疗（HAART）能明显降低AIDS患者机会性感染的发生和病死率。因HAART需要终身服药，病情稳定的患者在门诊治疗，依从性很难得到保证，如何使患者顺利进行治疗，是临床治疗和护理值得探讨的问题。其中健康宣教是非常重要的一个环节，

简介：摘要目的观察分析护理干预对艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗(HAART)依从性及护理满意度的影响。方法将我院2014年1月-2018年6月收治的艾滋病患者80例作为本次的研究对象，随机将其分为2组对照组和干预组，每组各有患者40例。对照组患者实施常规咨询和日常护理，干预组患者在对照基础上给予全面系统的护理干预，比较2组患者的治疗依从性和护理满意度。结果干预组患者的依从性为92.50%，明显高于对照组的72.50%，差异有统计学意义（P<0.05）。干预组患者的护理满意度为95.00%，明显高于对照组的77.50%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论护理干预能够显著提高艾滋病患者HAART治疗依从性以及护理满意度，从而具有较高的临床应用价值。

简介：摘要目的LCR与PCR在检测解脲支原体（UU）泌尿生殖感染中的临床意义与差别，方法用LCR法与PCR法对232份临床病历进行检测UU，其中201份来源于男性尿道拭子和女性宫颈拭子，对两种检测方法的检测结果进行了分析。结果LCR检测法检测232份标本，UU阳性率为29%（69/232），PCR法检测232份标本，阳性率为23%（55/232）。LCR与PCR检测有明显差异（P〈0.05〉，结论LCR用于临床男性尿道拭子和女性宫颈拭子在诊断泌尿生殖感染中有极其重要意义。

简介：目的了解拉米夫定耐药株感染者HBV基因型特征并分析耐药株HBV逆转录酶（RT）区变异位点和变异类型。方法应用PCR扩增和直接测序HBV逆转录酶区并与Genebank中90株不同基因型野毒株序列进行比较，确定54例耐药株感染者HBV基因型和HBVRT核苷酸的变异特点。结果在54例拉米夫定耐药株感染者中，HBVB基因型占27．78％，C型占70．37％，B／C混合型占1．85％；51例患者出现RT保守区氨基酸变异（包括550和526位氨基酸变异）；18例患者出现除主型区外HBVRT非主型区伴随变异；3例患者未检测到与拉米夫定相关性变异。结论拉米夫定耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型；拉米夫定耐药株的氨基酸变异不仅见于RT区的526和550两个位点，其他位点以及RT非保守区也可发生变异。

简介：目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc＋亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL（fluc）SN在脂质体介导下＂乒乓＂转染GP＋E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP＋E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL（fluc）SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。

简介：目的：建立SYBRGreenI实时RT-PCR快速检测呼吸道合胞病毒（respiratorysyncytialvirus，RSV）A、B亚型的方法。方法：根据RSVG蛋白编码基因的核苷酸序列设计三条引物，其中P1为RSV通用引物，P2、P3分别为A、B亚型特异性引物。使用SYBRGreenI荧光染料结合熔解曲线分析进行检测，根据产物特征性熔解温度（meltingtemperaturesTm）鉴别RSVA、B亚型。结果：本法对RSVLong株（A亚型）和CHl8375株（B亚型）进行检测，其Tm值分别为84．06和89．06℃；与常见呼吸道病毒间无交叉反应；48例临床标本中检出RSV阳性29例，其中A亚型占72．4％（21／29），B亚型占27．6％（8／29）。结论：SYBRGreenI实时RT-PCR结合熔解曲线分析检测RSV亚型具有快速、简便、特异等特点，可对临床标本直接分型。