简介：摘要流感是一种严重危害公共健康的人畜共患呼吸道传染疾病，血凝素为甲型流感病毒包膜最主要的糖蛋白，病毒血凝素末端修饰的甘露聚糖可作为多种固有免疫系统识别的靶点。本文简述甲型流感病毒血凝素蛋白糖基化在固有免疫系统成分识别和抗病毒方面所起的作用。

简介：摘要目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区（HAα）和6个串联重复M2蛋白胞外区域（6M2e）的融合蛋白的表达和制备方法，并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列，将HAα和6M2e插入到原高变区位点，构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定，并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价，实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e，蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）37 ℃诱导10 h，通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400，且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33，P=0.774；t=7.60，P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升高，其中实验组IFN-γ转录水平为38.74±3.65，蛋白水平为（66.03±3.31）pg/mL，高于对照组（t=21.33，P=0.003；t=10.21，P<0.01）。结论成功制备了高纯度的融合蛋白FljBΔD2D3-HAα-6M2e，能有效刺激小鼠产生抗M2e-IgG和抗HAα-IgG，具有良好的免疫效果，为流感疫苗候选物研发奠定了基础。

简介：摘要目的探讨甲型流感病毒对缺少唾液酸残基巨噬细胞的侵染情况，并初步分析其对IFN表达的影响。方法将PR8、Memphis、Aichi三种甲型流感病毒株以相同的病毒滴度分别侵染MHS肺泡巨噬细胞，对照组（NC）加等量PBS，24 h收集上清及细胞样本。采用RT-PCR法检测实验组病毒的负载量；普通倒置光学显微镜镜下观察实验组及NC细胞病变；实时荧光定量RCR法检测实验组及NC巨噬细胞样本中IFN-β、IFN-γ及Toll样受体3（TLR3）的表达水平，并进行统计学分析。结果MHS巨噬细胞被3株甲型流感病毒株侵染后，镜下均观察到细胞病变，Aichi病变程度最强、Memphis次之、PR8最弱。在细胞和上清样本中检测到Aichi和Memphis核酸拷贝数较高（Aichi：胞内Ct=14.93，上清Ct=19.05；Memphis：胞内Ct=17.15，上清Ct=21.39），PR8拷贝数较低（胞内Ct=26.86，上清Ct=29.31）。与NC比较，3株病毒均诱导IFN-β高表达(Aichi/NC=210、Memphis/NC=93、PR8/NC=33)，同时抑制IFN-γ表达，差异均有统计学意义（F=224.00和2 637.00，P均<0.001）。此外，Aichi诱导TLR3表达量升高（Aichi/NC=5.03），与NC比较，差异有统计学意义（t=6.40，P=0.031）。结论尽管巨噬细胞表面缺少甲型流感病毒唾液酸受体，但仍可通过其他途径被病毒侵染，并影响其胞内病毒RNA识别受体和IFN的表达，不同毒株之间的侵染能力存在较大差异。